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H9N2亚型禽流感病毒纯化及病毒HA蛋白定量方法研究

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中国畜牧兽医 2019年第7期46卷 2069-2078页

作者：彭成成吴熠潇刘旭平谭文松华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室

为实现H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)疫苗上下游过程的控制,本研究结合蔗糖密度梯度离心和SDS-PAGE灰度分析建立了H9N2亚型AIV纯化和病毒HA蛋白定量的方法。首先将收获的病毒原液经差速离心、PEG6000沉淀和蔗糖密度梯... 详细信息

为实现H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)疫苗上下游过程的控制,本研究结合蔗糖密度梯度离心和SDS-PAGE灰度分析建立了H9N2亚型AIV纯化和病毒HA蛋白定量的方法。首先将收获的病毒原液经差速离心、PEG6000沉淀和蔗糖密度梯度离心分别进行澄清、浓缩和分离纯化;其次,采用改装过的高效液相色谱仪系统(HPLC)准确定位和收集病毒离心区带,并对该区带进行SDS-PAGE和Western blotting分析,同时考察该收集方式的线性和重复性;然后,在此基础上优化病毒液的澄清工艺以提高病毒回收率;最后,观察还原SDS-PAGE分离的H9N2亚型AIV蛋白条带的共迁移情况并确定糖苷酶PNGase F脱糖基处理的最佳条件,采用Image J软件分析SDS-PAGE图谱中4个主要病毒蛋白条带(NP、HA1、M1和HA2)的灰度以确定流感病毒血凝素的含量。结果表明,HPLC收集的病毒离心区带的蛋白浓度与PEG6000浓缩的上清体积在8~32 mL范围内具有良好的线性关系(R^2=0.994),且该收集方式重复性好,批内和批间变异系数分别为1.29%和4.11%。病毒液经过澄清、浓缩和分离纯化后,最终的病毒回收率为79.55%。纯化的H9N2亚型AIV的蛋白浓度为1 000μg/mL时,经糖苷酶PNGase F脱糖基处理后便能得到条带清晰平整且分离良好的SDS-PAGE图谱。经灰度分析,HA含量占总病毒蛋白含量的46.18%。本研究初步建立了H9N2亚型AIV纯化和病毒HA蛋白定量的方法,为H9N2亚型AIV全病毒灭活疫苗的研发和生产提供了简单、准确的检测手段。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒血凝素蔗糖密度梯度离心纯化 SDS-PAGE 定量

基于MDCK悬浮细胞灌注培养的流感病毒生产过程开发

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生物技术通报 2020年第10期36卷 247-255页

作者：吴熠潇 Thomas Bissinger Yvonne Genzel 刘旭平 Udo Reichl 谭文松华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237 Max Planck Institute for Dynamics of Complex Technical Systems Germany 39106

为了提升用MDCK悬浮细胞培养生产流感疫苗的效率,克服目前存在的产能低下问题,以期满足日益增长的流感疫苗市场需求和提升应对大流行爆发的能力。通过病毒驯化、稀释流加条件下的细胞生长和产毒能力分析、Semi-perfusion中的细胞高密度... 详细信息

为了提升用MDCK悬浮细胞培养生产流感疫苗的效率,克服目前存在的产能低下问题,以期满足日益增长的流感疫苗市场需求和提升应对大流行爆发的能力。通过病毒驯化、稀释流加条件下的细胞生长和产毒能力分析、Semi-perfusion中的细胞高密度培养可行性分析以及ATF灌注反应器过程验证完成过程开发。驯化的病毒加速了其在细胞内的感染扩增,且在稀释流加培养中获得(3.57±0.17)log10(HAU/100μL)的病毒滴度。Semi-perfusion可实现细胞高密度培养至40×106 cells/mL以上,病毒产量达4 log10(HAU/100μL)以上,同时发现MOI和胰酶浓度对病毒的复制过程存在显著影响。在反应器中的ATF灌注培养过程得到了与Semi-perfusion相近的细胞密度及更高的病毒产量4.37 log10(HAU/100μL),并且通过降温措施维持了高密度下的单细胞病毒产量,克服了“细胞密度效应”。建立了基于MDCK悬浮细胞ATF灌注培养的流感病毒生产平台,通过同时提高细胞密度和单细胞病毒产率提升了流感病毒的生产效率,为基于细胞培养的流感疫苗产业化生产提供了新选择。

关键词： MDCK细胞流感病毒灌注培养 semi-perfusion

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高雅的蝴蝶兰

小作家选刊（小学生版） 2011年第12期 21-21页

作者：吴熠潇浙江省江山市中山小学五年级一班

早晨，我起床来到餐桌旁，一股清香扑鼻而来，仔细搜寻，原来是那株浓妆艳抹的蝴蝶兰发出来的。这盆蝴蝶兰造型独特，球形的花苞像一个个小铃铛在微风中互相碰撞着，也像一群婀娜多姿的蝴蝶停留在花茎上。它们各有各的姿态，

关键词：《高雅的蝴蝶兰》小学生作文语文学习

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动物细胞大规模培养生产人流感疫苗研究进展

国际生物制品学杂志 2023年第5期46卷 300-305页

作者：吴熠潇(综述) 谭文松(审校) 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237 上海倍谙基生物科技有限公司上海201203

目前公认的预防流感的最佳方法为疫苗接种。近年来,采用动物细胞大规模培养技术生产病毒性疫苗所凸显的安全性、经济性和时效性优势日益显著,将是未来流感疫苗工业化生产的发展趋势。如何利用动物细胞大规模培养的关键技术去提高流感病... 详细信息

目前公认的预防流感的最佳方法为疫苗接种。近年来,采用动物细胞大规模培养技术生产病毒性疫苗所凸显的安全性、经济性和时效性优势日益显著,将是未来流感疫苗工业化生产的发展趋势。如何利用动物细胞大规模培养的关键技术去提高流感病毒的产量,则是加强这些优势的关键所在。此文综述了流感疫苗及其生产方式、动物细胞大规模培养生产流感疫苗涉及的关键技术以及动物细胞大规模培养中影响病毒扩增效率的因素等方面的研究进展。

关键词：流感疫苗动物细胞大规模培养流感病毒扩增

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基于边缘强化的无监督单目深度估计

系统工程与电子技术 2024年第1期46卷 71-79页

作者：曲熠陈莹江南大学轻工过程先进控制教育部重点实验室江苏无锡214122

为解决无监督单目深度估计边缘深度估计不准确的问题,提出了一种基于边缘强化的无监督单目深度估计网络模型。该模型由单视图深度网络和姿态网络两部分构成,均采用编解码结构,其中单视图深度网络编码器使用高分辨率网络(high-resolution... 详细信息

为解决无监督单目深度估计边缘深度估计不准确的问题,提出了一种基于边缘强化的无监督单目深度估计网络模型。该模型由单视图深度网络和姿态网络两部分构成,均采用编解码结构,其中单视图深度网络编码器使用高分辨率网络(high-resolution net,HRNet)作为骨干网络,在整个过程中保持高分辨率表示,有利于提取精确空间特征;单视图深度网络解码器引入条状卷积,细化深度边缘附近的深度变化,同时利用经典的高斯拉普拉斯算子增强边缘细节,最终充分利用深度边缘信息提高深度估计质量。在KITTI数据集中进行的实验结果表明:所提模型具有较好的深度估计性能,能够使深度图中的目标边缘更加清晰,细节更加丰富。

关键词：单目深度估计无监督学习条状卷积边缘增强

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认真对待动物正义:契约主义的视角

自然辩证法研究 2024年第4期40卷 36-42页

作者：杨通进吴旌熠余国师广西大学马克思主义学院南宁530004

罗尔斯式动物正义论者通过诉诸边缘人理据、修改契约方的道德动机、重新阐释合作的意涵、增加无知之幕的厚度等方式,把罗尔斯的正义论扩展应用于人与动物的关系。作为与能力进路、关系进路和利益进路的动物正义论并驾齐驱的第四种动物... 详细信息

罗尔斯式动物正义论者通过诉诸边缘人理据、修改契约方的道德动机、重新阐释合作的意涵、增加无知之幕的厚度等方式,把罗尔斯的正义论扩展应用于人与动物的关系。作为与能力进路、关系进路和利益进路的动物正义论并驾齐驱的第四种动物正义论类型,契约主义的动物正义论在借鉴和吸收罗尔斯式动物正义论捍卫者之思想资源的基础上,通过两个重要的建构策略(消除罗尔斯契约论思想中的霍布斯式要素;凸显平等直觉理据的重要性),从契约主义的角度重构了罗尔斯式动物正义论,为人对动物负有的政治义务提供了独特的理据和视角。契约主义动物正义论的批评者认为:(1)认可人对动物的正义义务,将意味着动物拥有与人完全相同的道德权利,导致权利的泛滥;(2)将苦乐感受能力作为获得正义关怀的分界线是武断的;(3)动物正义论预设了“动物拥有道德地位”这一前提。契约主义动物正义论者认为,上述批评要么是不切题的,要么是基于对罗尔斯正义论的误解。

关键词：动物正义罗兰兹直觉平等理据

面向 “一带一路” 制造技术标准竞争扩散的双边网络协同优化

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系统工程理论与实践 2024年

作者：周青吴正熠陈文冲杭州电子科技大学数据科学与智能决策实验中心杭州电子科技大学管理学院

推动经技术标准联盟本土化改造升级的制造技术标准扩散是中国企业快速占领 “一带一路”市场、助力当地产业链转型升级的重要抓手.考虑制造技术标准的产品和技术二维特性，研究建立面向 “一带一路”制造技术标准扩散的双边网络协同决... 详细信息

推动经技术标准联盟本土化改造升级的制造技术标准扩散是中国企业快速占领 “一带一路”市场、助力当地产业链转型升级的重要抓手.考虑制造技术标准的产品和技术二维特性，研究建立面向 “一带一路”制造技术标准扩散的双边网络协同决策模型.基于标准扩散中消费者、联盟、本土制造企业等不同决策主体，通过引入合同设计与采纳机制刻画双边网络协同过程，以构建一主多从双层多目标关联优化模型.将联盟面向消费者的新产品定价和面向本土制造企业的采购合同设计定义为主问题，以同时最大化存在标准竞争时新产品扩散程度、本土制造企业新技术采用量、联盟标准扩散收益等多维目标;将考虑制造技术升级成本的本土企业采购合同接收与生产供给定义为从问题，以最大化企业参与新技术标准的净收益.设计嵌套 NSGA-II 算法求解关联优化模型并结合案例测试模型与算法的有效性.

关键词：制造技术标准标准联盟双边网络协同多目标主从关联优化嵌套NSGA-II

基于HYPE模型的汉江安康断面以上流域非点源污染模拟

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水资源保护 2024年第3期40卷 140-148页

作者：杨雨潇李家科西安理工大学西北旱区生态水利国家重点实验室陕西西安710048

基于空间数据和属性数据,构建了汉江安康断面以上流域环境水文预测(HYPE)模型,模拟了2012—2016年安康水文站的降水量和径流以及研究区非点源总氮、总磷污染负荷。结果表明:HYPE模型日径流量和月径流量模拟结果率定期纳升效率系数分别为... 详细信息

基于空间数据和属性数据,构建了汉江安康断面以上流域环境水文预测(HYPE)模型,模拟了2012—2016年安康水文站的降水量和径流以及研究区非点源总氮、总磷污染负荷。结果表明:HYPE模型日径流量和月径流量模拟结果率定期纳升效率系数分别为0.78、0.90,验证期分别为0.69、0.87;总氮、总磷负荷模拟结果率定期纳什效率系数分别为0.71、0.69,验证期分别为0.68、0.63,表明HYPE模型在研究区具有良好适用性;汉江安康断面以上流域总氮和总磷非点源污染负荷主要集中在6—10月,主要来源于农业化肥施用与水土流失;研究区总氮单位面积负荷流失量为0.354~6.139 kg,总磷单位面积负荷流失量为0.012~0.395 kg,总氮、总磷流失最严重的区域主要分布在流域偏南部,合理使用化肥、加强防治水土流失是控制研究区非点源污染的有效措施。

关键词：非点源污染 HYPE模型总氮负荷总磷负荷汉江

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基于子空间字典低秩表示的流形投影学习

华东理工大学学报(自然科学版) 2024年

作者：冯文熠王喆华东理工大学信息科学与工程学院青海大学信息化技术中心

低秩表示(Low-Rank Representation,LRR)能够将每个数据点表示为若干个基的线性组合，是一种获取样本底层低维结构的方法。然而，大多数LRR方法使用原始数据集作为字典，这不能揭示数据的真实分割。提出了一种无监督投影方法：基于子空... 详细信息

低秩表示(Low-Rank Representation,LRR)能够将每个数据点表示为若干个基的线性组合，是一种获取样本底层低维结构的方法。然而，大多数LRR方法使用原始数据集作为字典，这不能揭示数据的真实分割。提出了一种无监督投影方法：基于子空间字典低秩表示的流形投影学习。该方法学习最优子空间作为LRR问题的字典，而不是使用原始数据集。利用基数最少的方案，低秩表示矩阵能很好地恢复原始数据。同时，通过对投影矩阵施加行稀疏约束，该方法不仅可以选择鉴别性特征并忽略冗余特征，而且使子空间学习具有很好的解释性。此外，通过引入流形结构保持约束，使得样本的原始表示和距离信息在投影下保持不变。在多个真实世界数据集上的实验结果表明，该方法优于最近提出的一些相关方法。

关键词：低秩表示无监督投影子空间学习特征提取流形学习