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白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34kDa-1促进Raw264.7细胞免疫应答及DENV-2的复制

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中国热带医学 2025年

作者：旷晓元肖秋秋吴文诗牟小会吴家红贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室贵州省微生物组与传染性疾病防控重点实验室贵州省安顺市人民医院生殖医学科

目的探讨白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34kDa-1对巨噬细胞（Raw264.7）的免疫调控作用及对Raw264.7细胞中2型登革病毒（Denguevirustype2，DENV-2）复制的影响。方法将原核表达质粒pET32a(+)-rAlb-34kDa-1转入到大肠埃希菌（***）BL21（DE3）... 详细信息

目的探讨白纹伊蚊唾液蛋白rAlb-34kDa-1对巨噬细胞（Raw264.7）的免疫调控作用及对Raw264.7细胞中2型登革病毒（Denguevirustype2，DENV-2）复制的影响。方法将原核表达质粒pET32a(+)-rAlb-34kDa-1转入到大肠埃希菌（***）BL21（DE3）后，按实验室前期建立的表达纯化条件获取唾液蛋白并通过SDS-PAGE及WesternBlot（WB）方法鉴定；以CCK8法分析rAlb-34kDa-1蛋白对Raw264.7细胞的毒性。将0.02 、0.20和2.0μg/mL浓度rAlb-34kDa-1作用Raw264.7细胞6、12和24 h，采用实时荧光定量逆转录PCR（Real-timequantitativereversetranscriptionPCR，qRT-PCR）检测细胞中白细胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白细胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子-α(Tumornecrosisfactor-α，TNF-α)、趋化因子配体2（Chemokineligand2，CCL2）、干扰素-β（Interferon-β，IFN-β）、干扰素刺激基因15（InterferonStimulatedGene15，ISG15）的表达，运用酶联免疫吸附实验（Enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）检测细胞培养上清IL-6和TNF-α的分泌；免疫荧光法观察rAlb-34kDa-1作用Raw264.7细胞后p65进入细胞核的情况，分析rAlb-34kDa-1蛋白是否通过NF-κB信号通路实现对Raw264.7细胞的免疫调控；按分组（DENV-2作用组、唾液蛋白+DENV-2共孵育组）加不同的处理因素作用6、12和24 h后收集细胞，利用qRT-PCR检测细胞内DENV-2的mRNA表达量及运用流式细胞术（FCM）检测不同处理因素作用24h细胞内J2（dsRNA）的荧光强度。结果 SDS-PAGE及WB结果显示成功获得rAlb-34kDa-1蛋白且经CCK8法分析该蛋白对Raw264.7细胞无毒性；0.2μg/mL和2.0μg/mL的rAlb-34kDa-1均能诱导Raw264.7细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、CCL2、IFN-β、ISG15的表达；rAlb-34kDa-1作用Raw264.7细胞1 h后显著增强Raw264.7细胞核内的p65的荧光强度；rAlb-34kDa-1与DENV-2作用于Raw264.7细胞12 h时，2 μg/mL的rAlb-34kDa-1显著增强细胞中DENV-2的mRNA表达量。作用24 h时，0.02μg/mL、0.2μg/mL、2μg/mL的rAlb-34kDa-1均能增强Raw264.7细胞中DENV-2的mRNA表达量，2μg/mL的rAlb-34kDa-1与DENV-2共孵育于Raw264.7细胞24h后细胞内J2的荧光信号显著增强；结论 rAlb-34kDa-1蛋白能调节小鼠Raw264.7细胞免疫应答，促进DENV-2在Raw264.7细胞中复制。

关键词：白纹伊蚊 rAlb-34kDa-1蛋白 2型登革病毒免疫调控

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多发性硬化症小胶质细胞转录调控网络分析

上海交通大学学报(医学版) 2025年第1期 29-41页

作者：蔡蔷薇孙锋吴文玉邵付明高正良金盛凯上海大学医学院上海大学附属南通医院老年医学研究院海军军医大学附属公利医院麻醉科上海大学医学院中日友好医学研究所同济大学医学院上海市养志康复医院基础研究中心

目的·通过单细胞核转录组分析，探讨多发性硬化症（multiple sclerosis,MS）中小胶质细胞在灰质与白质的基因差异性表达及其在疾病进展中的作用，鉴定疾病相关的关键转录调控网络。方法·从基因表达数据库（Gene Expression Omnibus,GE... 详细信息

目的·通过单细胞核转录组分析，探讨多发性硬化症（multiple sclerosis,MS）中小胶质细胞在灰质与白质的基因差异性表达及其在疾病进展中的作用，鉴定疾病相关的关键转录调控网络。方法·从基因表达数据库（Gene Expression Omnibus,GEO）中获取MS和对照冷冻人脑组织样本单细胞核转录组测序（single nucleus RNA sequencing,snRNA-seq）数据。使用R软件和Seurat软件等，利用特定的细胞标志物对数据进行细胞类型的鉴定。从鉴定的细胞群中提取小胶质细胞，根据其解剖来源将其分为灰质和白质小胶质细胞；利用降维聚类技术，获得具有差异性的小胶质细胞亚群。使用Seurat分析得到MS组与对照组在亚群层面上的差异表达基因（differentially expressed genes,DEGs）。对DEGs进行基因本体论（Gene Ontology,GO）分析与京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）分析，进一步探究这些差异的生物学意义。使用Monocle3进行拟时序分析，研究疾病进展中的细胞亚群动态变化。使用单细胞调控网络推理和聚类（single cell regulatory network inference and clustering,SCENIC）方法分析转录因子（transcription factor,TF）调控网络，寻找可能参与MS调控的关键转录调控网络。结果·对数据进行质量控制后共保留了149 062个细胞核。对snRNA-seq数据进行降维聚类分析后，以DOCK8、CSF1R、P2RY12、CD74作为小胶质细胞的关键标志物鉴定得到了12 238个小胶质细胞。GO和KEGG分析结果表明，灰质小胶质细胞在疾病过程中内吞作用、离子稳态、脂质定位等功能下调，白质小胶质细胞在疾病过程中蛋白质折叠、细胞质翻译、温度刺激响应等功能上调。SCENIC分析显示MS疾病中FLI1、MITF、FOXP1等TF的表达上调。结论·小胶质细胞在MS的发展中具有重要作用，白质小胶质细胞受到MS的影响比灰质小胶质细胞更为明显。FLI1、MITF、FOXP1等是参与MS调控的关键TF，这些转录调控网络在疾病调控中发挥核心作用。

关键词：多发性硬化症小胶质细胞单细胞核转录组富集分析转录调控网络

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健康城市导向下滨水区城市设计的“源-流”模式

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生态学杂志 2025年第1期44卷 314-324页

作者：刘芮含周琴王逸权李鹏程季宪吴文东北大学江河建筑学院沈阳110819 西安交通大学人居环境与建筑工程学院西安710049

随着城市环境问题不断凸显,以健康城市为导向的规划设计成为应对挑战的重要途径之一。本文拓展了“源-流”理论,包括社会和经济因素,并提出了一个适合城市设计的“源-流”模式。这种模式将健康城市中的“人类健康”和“城市健康”两方... 详细信息

随着城市环境问题不断凸显,以健康城市为导向的规划设计成为应对挑战的重要途径之一。本文拓展了“源-流”理论,包括社会和经济因素,并提出了一个适合城市设计的“源-流”模式。这种模式将健康城市中的“人类健康”和“城市健康”两方面突出问题作为“源”,使环境、社会、经济等解决问题的“流”形成一个网络,共同优化城市结构,以缓解城市环境问题和提高居民的生活质量。中国沈阳市的彩塔现代服务产业片区是一个典型的老城市中心,存在一些如风环境不友好、舒适度差和活力不足的问题。本文以此区域为例,从“风源”和“人源”两个方面出发,结合PHOENICS软件对该区域的风环境进行量化和模拟,构建了“风流+水流+绿流”和“人流+交通流+经济流”的优化策略。结果表明,这种优化策略可以实现滨水区生态效益的扩大,提高风环境的质量,激发街区的活力,提高居民的幸福指数,并为城市滨水区的规划和更新提供新的思路。

关键词：健康城市城市设计风环境模拟城市滨水区

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论侵犯商业秘密罪的分层认定规则

河南财经政法大学学报 2025年第1期40卷 117-128页

作者：吴文博中国人民大学刑事法律科学研究中心北京100872

前置法和刑法对于商业秘密纠纷的介入由于保护法益的不同而存在差别,反不正当竞争法着眼于商业秘密所有人的私权益,刑法保护的则是公平自由的竞争秩序。罪与非罪的判断需要以法益为指导并采用分层级的认定路径具体展开:第一层级需要以... 详细信息

前置法和刑法对于商业秘密纠纷的介入由于保护法益的不同而存在差别,反不正当竞争法着眼于商业秘密所有人的私权益,刑法保护的则是公平自由的竞争秩序。罪与非罪的判断需要以法益为指导并采用分层级的认定路径具体展开:第一层级需要以秘密性和保密性为识别标准,将涉案信息不具有智力成果属性的予以排除;第二层级需要首先以个案狭义情节要素的识别为基础检视刑法介入的必要性和适当性,其次数额要素的功能应由肯定入罪转向否定入罪,将数额要素不符合司法解释规定的案件进行出罪处理。只有同时满足两方面的要求才可以对法益侵害程度值得刑法处罚作出肯定评价。在层级认定模式下,法律和司法解释的规定能够在法律适用过程中实现有效的沟通与衔接。

关键词：侵犯商业秘密罪商业秘密纠纷公平自由的竞争秩序商业秘密情节严重

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