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人Smith D1抗原的重组表达及其抗体检测方法的建立

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人Smith D1抗原的重组表达及其抗体检测方法的建立

作者：吴文冰福建医科大学

学位级别：硕士

SLE是一种自身免疫性疾病,患者血清中可检出多种自身抗体,其中最重要的是抗ds-DNA抗体和抗Sm抗体,虽然抗ds-DNA抗体对于确诊SLE及判断狼疮的活动性参考价值较大,但SLE病人经治疗(如使用激素),抗ds-DNA抗体的阳性率明显降低,而抗Sm抗体... 详细信息

SLE是一种自身免疫性疾病,患者血清中可检出多种自身抗体,其中最重要的是抗ds-DNA抗体和抗Sm抗体,虽然抗ds-DNA抗体对于确诊SLE及判断狼疮的活动性参考价值较大,但SLE病人经治疗(如使用激素),抗ds-DNA抗体的阳性率明显降低,而抗Sm抗体虽然与SLE病情活动与否无关,但治疗后抗Sm抗体仍持续阳性,故抗Sm抗体又称为回顾性抗体,被认为是SLE的标志性抗体,并已成为美国风湿病协会(American College of Rheumatology,ARA)1997年修订的诊断标准之一。在Sm抗原中能与抗Sm抗体发生反应的是Sm B/Bˊ和Sm D,而Sm E、F、G及N几乎不与抗Sm抗体起反应。抗Sm B/Bˊ抗体与其它抗RNP抗体存在交叉反应,降低了抗Sm B/Bˊ抗体对SLE诊断的特异性,故抗Sm D抗体被认为是SLE的标志性抗体,而Sm D抗原中最重要的免疫活性蛋白是Sm D1,因此抗Sm D1抗体的检测对SLE的诊断具有重要的作用。本研究利用分子克隆技术,以人白血病HL-60细胞的cDNA文库为模板,PCR扩增人Sm D1基因编码序列,并将其插入原核表达载体pGEX-5T,构建原核重组表达载体pGEX-5T-Sm D1,在*** BL21(DE3 plysS+)中诱导Sm D1的表达。通过12% SDS-PAGE电泳、蛋白免疫印迹等鉴定表达产物。结果表明,重组Sm D1在*** BL21(DE3 plysS+)中获得较高表达,并具有较高的抗原活性。所得的包涵体经变性、复性后用GST层析柱进行初步分离纯化,得到了纯度较高的重组蛋白,为特异性抗Sm D1抗体的检测奠定了基础。由于原核表达产物为包涵体,在纯化方面较为复杂,故本研究尝试在真核表达系统中进行表达。同样以人白血病HL-60细胞的cDNA文库为模板,PCR扩增人Sm D1基因编码序列,并将其插入真核表达载体pPIC9K,构建真核重组表达载体pPIC9K-Sm D1,在毕赤酵母SMD1168中诱导Sm D1的分泌型表达。经硫酸胺浓缩沉淀,通过Tricine-SDS-PAGE电泳、蛋白免疫印迹等鉴定表达产物。结果表明,重组Sm D1在毕赤酵母SMD1168中同样获得较高表达。我们应用初步纯化的真核产物建立DIGFA法检测抗Sm D1抗体,敏感性与IB法相同,特异性稍差,但本法具有简便、快速和经济等优点,由于检测标本有限,该法在临床上的应用价值有待进一步研究。总之,本实验室通过分子克隆技术初步获得了人Sm D1抗原,并对其抗原性进行了一定的研究,并建立了DIGFA法检测抗Sm D1抗体。

关键词：原核表达真核表达 Smith D1抗原斑点免疫金渗滤法

清热安腹汤治疗胃肠结热型小儿肠系膜淋巴结炎的临床研究

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清热安腹汤治疗胃肠结热型小儿肠系膜淋巴结炎的临床研究

作者：吴文冰黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过观察清热安腹汤治疗胃肠结热型小儿肠系膜淋巴结炎的临床症状改善情况,评价清热安腹汤疗效。方法:选取黑龙江中医药大学附属第一医院儿科门诊符合中西医诊断标准的胃肠结热型肠系膜淋巴结炎患儿共60例,并运用随机数字法将本研... 详细信息

目的:通过观察清热安腹汤治疗胃肠结热型小儿肠系膜淋巴结炎的临床症状改善情况,评价清热安腹汤疗效。方法:选取黑龙江中医药大学附属第一医院儿科门诊符合中西医诊断标准的胃肠结热型肠系膜淋巴结炎患儿共60例,并运用随机数字法将本研究分为试验组30例和对照组30例。试验组给予中药汤剂清热安腹汤口服,对照组采用头孢丙烯颗粒治疗。比较两组患儿治疗前后各项临床症状、体征及腹部肠系膜淋巴结大小变化等情况,统计分析清热安腹汤治疗胃肠结热型小儿肠系膜淋巴结炎的临床效果。结果:1.治疗前对两组患儿临床一般资料、各项症状体征积分及腹部肠系膜淋巴结各径线比较(P>0.05),无明显差异,可以进行比较。2.治疗后两组患儿中医证候总积分、各单项积分较治疗前均明显降低(P0.0 5)。3.治疗后两组患儿肠系膜淋巴结均有不同程度缩小(P<0.05),但试验组在缩小肠系膜淋巴结大小方面优于对照组(P<0.0 5)。4.治疗后试验组总有效率为93.33%,对照组总有效率为80%,两组比较具有统计学差异(P<0.05),提示清热安腹汤临床疗效优于对照组。结论:1.清热安腹汤治疗胃肠结热型小儿肠系膜淋巴结炎临床疗效显著且优于对照组;2.清热安腹汤可以有效改善小儿腹痛、食少纳呆、烦躁不安、大便秘结等临床症状;3.清热安腹汤能够明显改善小儿肠系膜淋巴结肿大程度。

关键词：肠系膜淋巴结炎清热安腹汤胃肠结热

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用快速斑点免疫金渗滤法检测抗SSA抗体

临床检验杂志 2005年第3期23卷 205-206页

作者：吴文冰兰小鹏杨湘越唐玉钗南京军区福州总医院全军检验中心福州350025

目的建立一种简便、快速、可靠的检测抗SSA抗体的方法。方法将重组的SSA抗原包被于硝酸纤维素(NC)膜上,以胶体金标记的葡萄球菌蛋白A(StaphylococusproteinA,SPA)作为显示剂,建立一种检测抗SSA抗体的快速斑点免疫金渗滤法(dotimmunogold... 详细信息

目的建立一种简便、快速、可靠的检测抗SSA抗体的方法。方法将重组的SSA抗原包被于硝酸纤维素(NC)膜上,以胶体金标记的葡萄球菌蛋白A(StaphylococusproteinA,SPA)作为显示剂,建立一种检测抗SSA抗体的快速斑点免疫金渗滤法(dotimmunogoldfiltrationassay,DIGFA)。结果本法对系统性红斑狼疮(SLE)阳性率为100%,对皮肌炎(DM)阳性率为100%,狼疮性肾炎(LN)阳性率为75%,本法与免疫印迹法(IBT)的符合率为94.1%。IBT法阴性的50例病人中,本法检出3例阳性病例(其ANA均为阳性);健康体检50例均为阴性。结论本法简便、快速、可靠,整个检测过程只需2min,不需其他特殊设备。

关键词：自身免疫性疾病抗SSA抗体斑点免疫金渗滤法葡萄球菌蛋白A 系统性红斑狼疮

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田野的力量（上）：村庄里的风景

读写月报（新教育） 2012年第3期 70-75页

作者：吴文冰四川

大约是1998年，在成都一家小杂志做小编辑，每天一早起来写下一些印刻在童年时代的小画面。

关键词：风景村庄力量 1998年

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妈妈，我们祷告吧

读写月报（新教育） 2015年第2期 64-69页

作者：吴文冰

一个人在童年若不曾祷告过，到晚年就不可能给出感恩的赐予。——【德】斯坦纳《人的普遍智识》小鹭和茂华玩得很欢，但后来还是发生了小小的冲突。小鹭好强敏感的特性呈现了出来。这份不开心一直延续着，用指责和委屈的方式。小客人都... 详细信息

一个人在童年若不曾祷告过，到晚年就不可能给出感恩的赐予。——【德】斯坦纳《人的普遍智识》小鹭和茂华玩得很欢，但后来还是发生了小小的冲突。小鹭好强敏感的特性呈现了出来。这份不开心一直延续着，用指责和委屈的方式。小客人都走了，她还在独自难受，并借题发挥，把情绪波及妈妈、外婆和洗漱这些事上。我一直默默感受小鹭不舒服的情绪，但也不是无条件任由她宣泄，比如，不能倒掉准备好的热水。

关键词：妈妈祷告借题发挥斯坦纳情绪普遍指责智

我看到了我的任务——做一名华德福学校小学主课教师

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读写月报（新教育） 2015年第11期 35-40页

作者：吴文冰

周三，也就是2009年12月15日，我和几位成都华德福学校的老师围着烤火炉一起学习中文版《人智学启迪下的儿童教育》。学到第八页，德国老师星涵请我用一句自己的话来概括本段意思。一个闪光的句子跳了出来：“如果一个人从生命中得到了... 详细信息

周三，也就是2009年12月15日，我和几位成都华德福学校的老师围着烤火炉一起学习中文版《人智学启迪下的儿童教育》。学到第八页，德国老师星涵请我用一句自己的话来概括本段意思。一个闪光的句子跳了出来：“如果一个人从生命中得到了对生命的觉知，那么他才有能力去设定他自身的任务。”

关键词：华德福学校教师小学 2009年儿童教育老师生命学习

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生日诗带来的成长

读写月报（新教育） 2012年第1期 54-60页

作者：吴文冰四川

一、认识治疗性诗歌创作2010年，成都华德福学校举办治疗教育大会期间，我选择了“治疗性诗歌创作”艺术工作坊。体验了不同的音带来的不同的感受，做了大量感受他人也感受自己的活动，我第一次体验到放空自己聆听周遭、聆听自己的感觉... 详细信息

一、认识治疗性诗歌创作2010年，成都华德福学校举办治疗教育大会期间，我选择了“治疗性诗歌创作”艺术工作坊。体验了不同的音带来的不同的感受，做了大量感受他人也感受自己的活动，我第一次体验到放空自己聆听周遭、聆听自己的感觉，也了解了一些治疗性诗歌的创作技巧。

关键词：诗歌创作成长生日 2010年华德福学校创作技巧治疗工作坊

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深蓝女孩（连载）

读写月报（新教育） 2009年第1期 67-72页

作者：吴文冰

我相信．一群极具灵性天赋的孩子已经降临到我们这个时代。他们也许就是我们身边最不守规矩，不断制造麻烦的某一个。他们不再是任人塑造的顺从者。他们是伪装的天使，有着战士的灵魂。传统的教育方法在他们面前彻底崩溃。他们终将在挑... 详细信息

我相信．一群极具灵性天赋的孩子已经降临到我们这个时代。他们也许就是我们身边最不守规矩，不断制造麻烦的某一个。他们不再是任人塑造的顺从者。他们是伪装的天使，有着战士的灵魂。传统的教育方法在他们面前彻底崩溃。他们终将在挑战中引领着父母、老师、社区走向更有爱更有创造力的新纪元时代。——他们就是“深蓝小孩”。

关键词：连载女孩教育方法创造力孩子灵性父母老师

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孕育有时，生长有时

读写月报（新教育） 2010年第10期 30-31页

作者：吴文冰四川

最近听了几节华德福学校四五年级的课，有一个现象给我留下了深刻的印象。就是，只要在课堂上给孩子们自由表达的时间，就很容易变成孩子之间的讨论甚至辩论，不同性格的孩子会冒出不同的火花。这个时候，老师如果能清楚地意识到这些讨... 详细信息

最近听了几节华德福学校四五年级的课，有一个现象给我留下了深刻的印象。就是，只要在课堂上给孩子们自由表达的时间，就很容易变成孩子之间的讨论甚至辩论，不同性格的孩子会冒出不同的火花。这个时候，老师如果能清楚地意识到这些讨论背后隐藏的孩子们的心灵真实的渴求，加以有效引导，说不定会激发孩子对这个世界的好奇和探索兴趣，同时又会是一个师生共享思维和想象飞扬的旅程。

关键词：生长华德福学校自由表达探索兴趣孩子五年级课堂老师