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早产儿脐血中γδ T淋巴细胞功能变化特征的研究

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免疫学杂志 2017年第9期33卷 795-799,828页

作者：王清冯婷吴啓洪林芳杨川巩天祥成都市血液中心 610041 四川大学华西第二医院出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室成都610041

目的检测分析早产儿和足月儿脐带血中γδT细胞的数量、比例及相关功能变化特征,探讨早产儿人群的γδT细胞功能变化对其抵抗病毒感染的意义。方法采用流式细胞术检测脐带血单个核细胞(cord blood mononuclear cell,CBMC)中γδT细胞的... 详细信息

目的检测分析早产儿和足月儿脐带血中γδT细胞的数量、比例及相关功能变化特征,探讨早产儿人群的γδT细胞功能变化对其抵抗病毒感染的意义。方法采用流式细胞术检测脐带血单个核细胞(cord blood mononuclear cell,CBMC)中γδT细胞的数量比例;流感病毒感染刺激早产儿和足月儿CBMC 24 h,流式细胞术测定γδT细胞中细胞因子Perforin、IFN-γ和TNF-α的表达情况;采用异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)联合IL-2刺激扩增CBMC中γδT细胞,比较早产儿和足月儿γδT细胞的扩增效率。结果早产儿γδT细胞在CBMC中的数量及比例较足月儿明显减少;流感病毒刺激后,早产儿和足月儿γδT细胞的Perforin、IFN-γ和TNF-α的表达都有显著升高,但早产儿倍增幅度明显不及足月儿;经IPP和IL-2联合刺激后,脐带血中γδT细胞都有所增殖,但早产儿的扩增效率明显低于足月儿。结论早产儿γδT细胞存在数量及功能的不足,这可能是造成早产儿更易患感染性疾病的重要因素之一。

关键词：脐带血 γδT细胞细胞因子增殖

体外扩增的Vγ9Vδ2T细胞抗H1N1流感病毒效应的研究

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免疫学杂志 2016年第7期32卷 553-558页

作者：冯婷巩天祥吴啟洪朱婷婷陶于洪李虹四川大学华西第二医院出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室成都610041 成都市血液中心 610041 四川大学华西第二医院儿科成都610041

目的探讨帕米磷酸钠（PAM）体外扩增培养的人外周血Vγ9Vδ2 T细胞对感染流感病毒H1N1的人肺上皮细胞A549的细胞毒效应。方法 PAM和IL-2联合刺激培养健康成人外周血单个核细胞（PBMC）10~14 d,免疫磁珠分选法纯化得到Vγ9Vδ2 T细胞,再... 详细信息

目的探讨帕米磷酸钠（PAM）体外扩增培养的人外周血Vγ9Vδ2 T细胞对感染流感病毒H1N1的人肺上皮细胞A549的细胞毒效应。方法 PAM和IL-2联合刺激培养健康成人外周血单个核细胞（PBMC）10~14 d,免疫磁珠分选法纯化得到Vγ9Vδ2 T细胞,再将Vγ9Vδ2 T细胞与感染流感病毒的A549细胞按不同的效靶比（E∶T）接触共育或按E∶T=20∶1非接触共育6 h。流式细胞分析术检测A549的存活率及Vγ9Vδ2 T细胞穿孔素（perforin）的表达情况,收集培养上清检测流感病毒的滴度,提取培养上清及A549细胞的总RNA,实时荧光定量检测流感病毒基质蛋白M1基因的表达情况。结果 PAM在体外能有效活化并扩增Vγ9Vδ2 T细胞。Vγ9Vδ2 T细胞对感染流感病毒的A549细胞具有较强的杀伤作用,且随E∶T的升高而增大,在E∶T=20∶1时,Vγ9Vδ2 T细胞能杀伤60%的感染了流感病毒的A549细胞。接触共育组的A549细胞杀伤率明显高于非接触共育组（P〈0.05）。Vγ9Vδ2 T细胞经流感病毒感染后Perforin的表达明显上调。接触共育组的病毒复制也明显受到抑制（P〈0.05）。结论 PAM刺激扩增的Vγ9Vδ2 T细胞能有效杀伤感染流感病毒的人肺上皮细胞A549,其效应机制依赖于两者细胞间的接触。

关键词： Vγ9Vδ2T细胞帕米磷酸钠流感病毒 A549细胞

CNG发动机用耐热疲劳高硅蠕墨铸铁材料研究

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铸造技术 2021年第11期42卷 952-957页

作者：纪汉成吴启洪科华控股溧阳市联华机械制造有限公司江苏常州213351 溧阳市绿色铸造产业技术创新战略联盟江苏常州213351

研究开发了CNG发动机用耐热疲劳高性能的高硅耐热蠕墨铸铁,采用壳型铸造制备涡轮增压器壳铸件及本体试样。通过多种合金元素最优化复合搭配使用,使该蠕墨铸铁的常温及高温综合机械性能良好,并具有优良的耐热疲劳性能、抗氧化性能、高温... 详细信息

研究开发了CNG发动机用耐热疲劳高性能的高硅耐热蠕墨铸铁,采用壳型铸造制备涡轮增压器壳铸件及本体试样。通过多种合金元素最优化复合搭配使用,使该蠕墨铸铁的常温及高温综合机械性能良好,并具有优良的耐热疲劳性能、抗氧化性能、高温强度及在高温中具有良好的尺寸稳定性和良好的导热能力。经过发动机试验台耐久试验及装车试验证明,其蠕墨铸铁产品能够经受周期性载荷及热应力的作用,满足CNG发动机频繁停车怠速冷热冲击的工况条件,使用寿命比现有铸铁材料大幅度提高。

关键词：高硅耐热蠕墨铸铁涡轮增压器壳耐热疲劳性

HDV表面抗原sHDAg对人外周血γδT细胞的表型及功能影响

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HDV表面抗原sHDAg对人外周血γδT细胞的表型及功能影响

第十二届全国免疫学学术大会

作者：杨川冯婷苗天雨林芳吴啟洪郭应坤李虹四川大学华西第二医院出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室四川大学华西医院血管外科四川大学华西第二医院放射科

研究背景:丁型病毒性肝炎(HDV)是一种RNA病毒,sHDAg是HDV最先合成的表面抗原,它将HDV基因组RNA转移到复制区域起始RNA的复制,对HDV基因组RNA的复制起正调控作用;γδT细胞是一类重要的T淋巴细胞,在机体受到外界病原体感染后,γδT细胞... 详细信息

研究背景:丁型病毒性肝炎(HDV)是一种RNA病毒,sHDAg是HDV最先合成的表面抗原,它将HDV基因组RNA转移到复制区域起始RNA的复制,对HDV基因组RNA的复制起正调控作用;γδT细胞是一类重要的T淋巴细胞,在机体受到外界病原体感染后,γδT细胞可以通过抗原递呈、免疫调节、分泌细胞因子等来应对感染;目前HDV的免疫机制还不明确,有文献报道HDAg能刺激辅助性T细胞分泌INF-γ以抵抗感染,但是γδT细胞在HDV感染的过程中是否起作用还未知。目的:本实验拟研究sHDAg对γδT细胞表型及功能活性的影响,以探究γδT细胞在HDV感染机体中的免疫机制。方法:扩增sHDAg基因,将sHDAg基因片段连入pet28a原核表达载体中,构建pet28a-sHDAg重组质粒,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21,经IPTG低温诱导得到抗原蛋白,通过Ni-NTA纯化柱获得融合蛋白,通过western blot检测目的蛋白,将纯化所得的与外周血单核细胞(PBMCs)共培养,分别设置不同浓度的sHDAg(0mg/ml,0.5mg/ml,2mg/ml,8mg/ml)和不同的时间点(2h,4h,6h,8h),用流式细胞仪分别对γδT细胞活化标志物CD69、NKG2D和细胞因子IL-17A、INF-γ进行检测。实验结果:Western blot结果显示纯化所得的蛋白可以和anti-sHDAg抗体特异性结合;γδT细胞在接受sHDAg刺激后,其表面活化标志物CD69和NKG2D的表达均上调,与对照组相比,CD69由0.032%上升为50.4%(8mg/ml,8h),NKG2D由0.64%上升为35.2%(2mg/ml,8h),功能性细胞因子INF-γ的表达亦有上调,由1.14%上升为9.52%(8mg/m1,8h),而IL-17A表达无明显变化。结论:sHDAg可以活化γδT细胞表面分子CD69和NKG2D以及促进细胞因子INF-γ表达,提示γδT细胞可能在HDV的侵染过程中被活化并通过分泌INF-γ等相关细胞因子以参与抗HDV感染。

关键词： sHDAg γδT细胞细胞因子免疫机制

脓毒症患者外周血中γδT细胞的功能特征及其作用机制的初步研究

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脓毒症患者外周血中γδT细胞的功能特征及其作用机制的初步研究

第十一届全国免疫学学术大会

作者：冯婷廖雪莲曹兴吴啓洪陶于洪李虹四川大学华西第二医院出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室四川大学华西第二医院重症科四川大学华西第二医院儿科

研究背景:脓毒症是指机体对感染反应失调而引起的致命性的器官功能障碍。脓毒症逐年上升的发病率使其成为ICU患者死亡的最重要的因素。随着病程的发展,脓毒症患者的免疫系统会先经历过度的炎症反应期,然后进入后期的免疫抑制状态。目前... 详细信息

研究背景:脓毒症是指机体对感染反应失调而引起的致命性的器官功能障碍。脓毒症逐年上升的发病率使其成为ICU患者死亡的最重要的因素。随着病程的发展,脓毒症患者的免疫系统会先经历过度的炎症反应期,然后进入后期的免疫抑制状态。目前,大多数关于脓毒症免疫的研究针对的是适应性免疫,而涉及固有免疫的则很少且不深入。作为固有免疫重要一员的γδT细胞,其在脓毒症免疫抑制中的作用则鲜有报道。目的:研究脓毒症患者外周血γδT细胞的功能变化。方法:静脉抽取ICU诊断为严重脓毒症/脓毒症休克患者的外周血,提取外周单个核细胞,采用流式细胞术测定γδT细胞的CD69,NKG2D,PD-1,Fas,及IFN-γ,Perforin,IL10,IL17,TGFβ的表达情况;同时用非特异抗原PMA刺激细胞,流式细胞术检测γδT细胞的CD69及IFN-γ的表达情况。结果:研究总共纳入107例严重脓毒症/脓毒症休克的患者和30例健康对照。与健康对照相比较,脓毒症患者外周血γδT细胞的比例显著下降;早期活化指标CD69的表达明显高于对照组,但细胞毒受体NKG2D的表达则显著低于对照组;而PD-1和Fas的表达在患者与健康组间无明显差异;与此同时,脓毒症患者γδT细胞的细胞因子IFN-γ,IL-17,IL-10,TGF-β的水平均显著高于健康人。在使用非特异性刺激剂刺激细胞后,脓毒症患者γδT细胞的CD69和IFN-γ表达水平的倍增情况均低于健康人,差异有显著性。结论:脓毒症状态下,γδT细胞的数量显著降低,功能有明显改变。经非特异抗原刺激后,γδT细胞的活化程度及功能因子的释放能力显著低于对照组,这些变化均可能与脓毒症病人后期的免疫抑制状态有关。

关键词：脓毒症 γδT细胞流式细胞术

纳米材料SPION诱导人单核细胞自噬作用的研究

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纳米材料SPION诱导人单核细胞自噬作用的研究

第十届全国免疫学学术大会

作者：吴啟洪冯婷金蓉蓉朱婷婷艾华李虹四川大学华西第二医院西部妇幼医学研究院四川大学国家生物材料工程技术研究中心

研究背景:纳米材料被广泛的运用于生物医药行业,其可以作为药物载体、药物释缓剂、造影剂等,但是其生物安全性一直是研究者被受关注的问题。SPION具有很好的生物相容性,被广泛的运用于临床的诊断和治疗。因此,研究SPION与人的免疫细胞... 详细信息

研究背景:纳米材料被广泛的运用于生物医药行业,其可以作为药物载体、药物释缓剂、造影剂等,但是其生物安全性一直是研究者被受关注的问题。SPION具有很好的生物相容性,被广泛的运用于临床的诊断和治疗。因此,研究SPION与人的免疫细胞之间的相互作用对其生物安全性评价具有重要的意义。目的 :本文主要拟研究纳米材料SPION对人单核细胞自噬的诱导作用,探讨其作用机制并进一步评价SPION的生物安全性。方法 :采集健康人外周血,分离获取单个核细胞(PBMC),并用CD14磁珠分选得到单核细胞,采用流式细胞术检测其纯度和颗粒度(side-scatter);将纯化的单核细胞接种于24孔板进行培养,再用不同浓度的SPION(0、10、20、50、100μg/μl)刺激单核细胞,刺激24h后收集细胞,分别采用Western Blot检测自噬相关蛋白LC3及P62的表达情况,并用MDC染色检测其自噬泡,以及CCK-8方法检测SPION刺激后单核细胞活性。结果:流式显示单核细胞的纯度在92.7%—96.2%之间,能够满足实验需要;SPION的浓度越高其颗粒度越大,提示单核细胞可能以非饱和的方式对材料进行摄取。Western Blot结果显示经SPION刺激诱导后,单核细胞内自噬标记物LC3由|型向‖型转换,并且呈剂量依赖性增加,自噬负调控蛋白P62的条带和灰度值亦呈剂量依赖性减少,并且MDC染色法结果显示自噬泡的数量和荧光强度都有明显增加,并呈剂量依赖性关系。CCK-8结果显示SPION对单核细胞的活力无明显影响。结论 :纳米材料SPION具有良好的生物相容性,并且能够诱导人单核细胞发生自噬,其自噬在其中的具体作用机制还有待作进一步的研究。

关键词：纳米材料 SPION 自噬单核细胞

MSC对γ δ T细胞生物学功能的影响及其机制初探

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MSC对γ δ T细胞生物学功能的影响及其机制初探

中华医学会2014全国微生物学与免疫学学术年会

作者：刘晓欢冯婷申重阳朱婷婷吴啟洪李虹四川大学华西第二医院妇儿疾病及出生缺陷教育部重点实验室四川大学华西第二医院儿科

目的研究脐带来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对同种异体外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)来源的γδT细胞主要生物学功能如增殖、细胞因子分泌及细胞毒作用的影响,以及探索其可能涉及的分...

目的研究脐带来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对同种异体外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)来源的γδT细胞主要生物学功能如增殖、细胞因子分泌及细胞毒作用的影响,以及探索其可能涉及的分子机制。方法确定共培养比例:MSC与新鲜分离的PBMC通过直接接触和transwell物理分隔两种方式共培养14天(比例MSC:PBMC=1:5,1:20,1:80,1:320),流式分析γδT细胞扩增比率。

关键词：

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γδT细胞的分类及其功能特质研究的新进展

医学综述 2016年第13期22卷 2497-2501页

作者：吴啟洪朱婷婷冯婷李虹四川大学华西第二医院西部妇幼医学研究院在读研究生成都610041

γδT细胞是一群不同于αβT细胞的T淋巴细胞群,其表面T细胞受体由γ链和δ链组成。而γδT细胞本身亦是一群高度异质性细胞,其亚类种类多、表型多变、功能丰富。γδT细胞除传统的Vδ1、Vδ2和Vδ3γδT细胞外,还可根据其功能差异分为... 详细信息

γδT细胞是一群不同于αβT细胞的T淋巴细胞群,其表面T细胞受体由γ链和δ链组成。而γδT细胞本身亦是一群高度异质性细胞,其亚类种类多、表型多变、功能丰富。γδT细胞除传统的Vδ1、Vδ2和Vδ3γδT细胞外,还可根据其功能差异分为调节性γδ、产生IL-17的γδ、产生干扰素的γδT细胞、人类错配修复基因2特异性γδT细胞以及白细胞介素6γδT细胞。γδT细胞各亚类间生物学特性各异,在机体肿瘤、感染及自身免疫性疾病等的发生、发展中均有重要作用,被认为是机体连接天然免疫与适应性免疫功能的桥梁。

关键词：肿瘤 γδT细胞感染干扰素γ 生物学效应

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管道机器人微小厚度高精度测量算法

传感器与微系统 2019年第3期38卷 137-140页

作者：吴啟洪姚如贵王圣尧左晓亚西北工业大学电子信息学院陕西西安710072

针对目前大多磁感应检测数据处理算法用于管道内自动测厚时存在误判率高、精度较低、耗时长等缺点的问题,研究了输油气管道内的微小污垢厚度的高精度校准算法。针对静态校准,提出一种采用数据预处理、基于改进中值滤波器与最小二乘法拟... 详细信息

针对目前大多磁感应检测数据处理算法用于管道内自动测厚时存在误判率高、精度较低、耗时长等缺点的问题,研究了输油气管道内的微小污垢厚度的高精度校准算法。针对静态校准,提出一种采用数据预处理、基于改进中值滤波器与最小二乘法拟合的综合算法;针对实际应用中温度、湿度、元器件老化等因素引起的测量结果波动,提出了测量中动态校准测量算法。经实际测试,结果表明:所提方法的测量精度达到了±(1+%1)μm,满足高精度测量的要求。

关键词：微小厚度校准改进的中值滤波器最小二乘法拟合