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利用SIgA-ELISA建立猪肺炎支原体感染的检测方法

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利用SIgA-ELISA建立猪肺炎支原体感染的检测方法

致病性大肠杆菌肠毒素的测定——Ⅱ用乳兔试验测定热敏性肠毒素

中国畜牧兽医学会2009学术年会

作者：冯志新逯晓敏刘茂军吴叙苏甘源邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心山西农业大学动物科技学院

为更准确对猪肺炎支原体（Mhp）感染及免疫状况进行检测,本文以猪鼻拭子为检测样品,利用猪肺炎支原体粘附因子P97R1原核表达蛋白作为包被抗原;以羊抗猪IgA为二抗,兔抗猪IgG-HRP作为酶标三抗,建立Mhp sIgA间接ELISA检测方法（SIgA-ELISA... 详细信息

为更准确对猪肺炎支原体（Mhp）感染及免疫状况进行检测,本文以猪鼻拭子为检测样品,利用猪肺炎支原体粘附因子P97R1原核表达蛋白作为包被抗原;以羊抗猪IgA为二抗,兔抗猪IgG-HRP作为酶标三抗,建立Mhp sIgA间接ELISA检测方法（SIgA-ELISA）。通过对包被抗原的浓度,样品的孵育时间,封闭液,二抗与三抗的最佳稀释度和作用时间以及显色液的作用时间进行优化,摸索该方法的最佳反应条件。根据对260份Mhp SIgA阴阳性标准品的检测结果,利用Medcalcl软件确定了SIgA-ELISA检测方法的cut-off值。并将该方法与Mhp套式PCR检测方法以及商品化的Mhp抗体ELISA检测试剂盒（IgG-ELISA）进行平行比较,结果发现SIgA-ELISA方法对Mhp感染检测具有很高的敏感性（97.0%）、特异性（94.4%）与准确性（95.8%）;且SIgA-ELISA方法与IgG-ELISA方法相比,能有效区分Mhp的感染与免疫。

关键词：猪肺炎支原体 SIgA 间接ELISA

来源： cnki会议评论

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畜牧与兽医 1982年第3期 102-104页

作者：吴叙苏吴纪棠奚晋弗常运生丁再棣江苏省农科院畜牧兽医所

以7至9日龄乳兔由口接种肠致病性大肠杆菌培养物,测定热敏性肠毒素(LT)。接种后5小时观察结果判断,与乳鼠试验测定耐热性肠毒素(ST)相仿,以肠道重与剩余体重之比值为准。其比值大于或等于0.085的为阳性反应,小于或等于0.074的为阴性反应... 详细信息

以7至9日龄乳兔由口接种肠致病性大肠杆菌培养物,测定热敏性肠毒素(LT)。接种后5小时观察结果判断,与乳鼠试验测定耐热性肠毒素(ST)相仿,以肠道重与剩余体重之比值为准。其比值大于或等于0.085的为阳性反应,小于或等于0.074的为阴性反应,在0.075至0.084之间的为可疑。反应结果,较乳鼠测定ST更为分明;阳性反应的比值大都大于0.090,阴性反应,大都小于0.070,可疑反应极少。以具有阳性反应的培养物,在65°C加热10或15分钟,即使培养物具有ST与LT两种肠毒素,接种乳兔后其肠道与体重之比值,终是小于0.070,说明用乳兔试验测定热敏性肠毒素,是明确可靠的。根据37株猪源菌种的测定结果,可将菌株分为ST~+LT~+(产生两种肠毒素)、ST~+LT~-(只产生耐热性肠毒素),ST~-LT~+(只产生热敏性肠毒素)和ST~-LT~-(不产生肠毒素)四种类型。

关键词：热敏性肠毒素耐热性肠毒素乳鼠乳兔肠致病性大肠杆菌致病性试验测定

用血清学方法检测肠致病性大肠杆菌不耐热性肠毒素

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中国兽医杂志 1984年第4期 2-4页

作者：吴纪棠吴叙苏常运生奚晋弗郭美玲江苏省农科院畜牧兽医所

肠致病性大肠杆菌能产生直接侵害寄主肠粘膜细胞而引起腹泻的毒素——肠毒素。肠毒素有耐热性(ST)与不耐热性(LT)两种。测定肠毒素是鉴定大肠杆菌致病性的重要手段之一。一般用动物(兔或猪)作肠扎结试验测定肠毒素,但不能区分ST与LT。测... 详细信息

肠致病性大肠杆菌能产生直接侵害寄主肠粘膜细胞而引起腹泻的毒素——肠毒素。肠毒素有耐热性(ST)与不耐热性(LT)两种。测定肠毒素是鉴定大肠杆菌致病性的重要手段之一。一般用动物(兔或猪)作肠扎结试验测定肠毒素,但不能区分ST与LT。测定ST,常用乳鼠胃内接种试验。测定LT的方法则较多,如兔回肠扎结试验,乳兔由口接种试验,家兔或豚鼠毛细血管通透性亢进皮肤试验,小鼠Y-1肾上腺细胞或中国地鼠卵细胞培养等。已为许多作者证实有效,但均需用活体动物或适当的传代细胞,比较烦琐。最近Evans等报

关键词：绵羊红细胞菌种致敏溶血试验阳性反应肠致病性大肠杆菌生理盐水多粘菌素多肽耐热性肠毒素血清学

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弓形虫紫外线弱毒虫株的培育研究

中华医学杂志 1991年第3期71卷 157-157页

作者：计浩吴叙苏吕立新王春香江苏省农业科学研究院畜牧兽医研究所

近年来,以辐射和弓形虫诱变培育弓形虫弱毒虫株进展较快,我们培育的猪源南京汤山弓形虫NTAⅠ,Ⅱ、Ⅲ,3个紫外线弱毒品系,尤以NTA-Ⅲ系150～250代次弱毒株较为稳定,其毒力最低,免疫猪后经反复多次检查尚未发现弓形虫包囊,现将试验结果简... 详细信息

近年来,以辐射和弓形虫诱变培育弓形虫弱毒虫株进展较快,我们培育的猪源南京汤山弓形虫NTAⅠ,Ⅱ、Ⅲ,3个紫外线弱毒品系,尤以NTA-Ⅲ系150～250代次弱毒株较为稳定,其毒力最低,免疫猪后经反复多次检查尚未发现弓形虫包囊,现将试验结果简要如下。

关键词：弓形虫紫外线弱毒株培养

4株高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的分离与鉴定

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江苏农业学报 2008年第4期24卷 444-450页

作者：李贺侠刘茂军甘源张理航孙佩元张宁吴叙苏邵国青江苏省农业科学院兽医研究所江苏南京210014 安徽省和县兽医管理站和县238200

2007年7月从江苏某些猪场采集的具有明显高热症状的病料组织中分离出4株病毒，经对病毒的TCID50测定、血清学试验、病毒基因鉴定，确认这4株为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒。病毒基因序列分析发现：4株病毒的NSP2基因均存在2处共30个... 详细信息

2007年7月从江苏某些猪场采集的具有明显高热症状的病料组织中分离出4株病毒，经对病毒的TCID50测定、血清学试验、病毒基因鉴定，确认这4株为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒。病毒基因序列分析发现：4株病毒的NSP2基因均存在2处共30个氨基酸缺失，缺失氨基酸分别位于481位、532～560位。氨基酸序列同源性分析可见：分离株与VR2332株、MLV株的同源性很低，在60．3％至68．6％之间；与国内疫苗株CH-1a的同源性为83．1％～83．7％；与国内分离的变异株JXAI株、HUN4株、HB-1（sh）／2002株同源性很高，为91．2％～98．5％；同时4株分离株之间的同源性很高，为99．3％～100．0％。系统发育树表明：分离的4个毒株与JXAI毒株和HUN4株有较近的亲缘关系，与其他株的亲缘关系较远。动物回归试验表明，4株病毒均可以引起仔猪明显的临床高热症状。

关键词：高热综合征猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒分离鉴定

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刚地弓形虫NT株P30基因的克隆与表达

江苏农业学报 2009年第1期25卷 147-150页

作者：张理航刘茂军吕芳李贺侠吴叙苏冯志新邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 金陵科技学院江苏南京211169

参考Genbank登录的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)P30全基因序列,设计合成1对引物,通过PCR在刚地弓形虫的基因组DNA中扩增出P30基因片段,然后构建重组表达质粒pET-32 a(+)/P30,用IPTG诱导,在表达菌BL21(DE3)表达出分子量为4.83×104的... 详细信息

参考Genbank登录的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)P30全基因序列,设计合成1对引物,通过PCR在刚地弓形虫的基因组DNA中扩增出P30基因片段,然后构建重组表达质粒pET-32 a(+)/P30,用IPTG诱导,在表达菌BL21(DE3)表达出分子量为4.83×104的融合蛋白,经W estern-b lotting鉴定目的蛋白具有良好的免疫学活性,为刚地弓形虫疫苗的制备及猪弓形虫抗体ELISA检测方法的建立奠定了基础。

关键词：刚地弓形虫 P30基因克隆表达

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副猪嗜血杆菌培养特性及致病性研究

金陵科技学院学报 2009年第4期25卷 80-83页

作者：王海燕刘茂军冯志新甘源吴叙苏邵国青江苏省农业科学院兽医研究所.农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室.国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014

将副猪嗜血杆菌5型分离菌株HE5分别接种于LB、TSA等固体培养基上,接种12 h后通过观察菌落大小,筛选出最适副猪嗜血杆菌生长的TSA固体培养基。同时,将HE5接种于LB、TSB等液体培养基上,通过平板活菌计数,筛选出最佳液体培养基TSB。小鼠感... 详细信息

将副猪嗜血杆菌5型分离菌株HE5分别接种于LB、TSA等固体培养基上,接种12 h后通过观察菌落大小,筛选出最适副猪嗜血杆菌生长的TSA固体培养基。同时,将HE5接种于LB、TSB等液体培养基上,通过平板活菌计数,筛选出最佳液体培养基TSB。小鼠感染试验结果表明,培养12-16 h的活菌数最多,对小鼠的致死性最大,为副猪嗜血杆菌感染小动物提供依据。

关键词：副猪嗜血杆菌培养特性致病性

猪肺炎支原体黏附因子P97R1、膜蛋白P46单抗制备

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猪肺炎支原体黏附因子P97R1、膜蛋白P46单抗制备

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：冯志新刘茂军王海燕甘源吴叙苏邵国青江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏省生物兽药筛选服务中心

目的P46蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白,且与其它支原体无交叉反应,常作为猪肺炎支原体检测的耙蛋白或靶基因.P97蛋白是猪肺炎支原体的黏附因子,与病原的感染与致病机制相关,其中R1区是P97蛋白的主要抗原决定簇.制备针对该两种... 详细信息

目的P46蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白,且与其它支原体无交叉反应,常作为猪肺炎支原体检测的耙蛋白或靶基因.P97蛋白是猪肺炎支原体的黏附因子,与病原的感染与致病机制相关,其中R1区是P97蛋白的主要抗原决定簇.制备针对该两种蛋白的特异性单抗能为猪肺炎支原体的检测及机理研究提供有效的资源.方法本研究用猪肺炎支原体全菌抗原免疫小鼠,分别利用大肠杆菌表达的P46蛋白和P97R1蛋白作为筛选抗原制备P46与P97R1的单克隆抗体.结果本研究成功制备了两株针时P46的特异性单克隆抗体IA4和3C11以及三株针对P97R1的特异性单克隆抗体2A10,6C4和6C5.两株P46单抗最高ELISA效价可达1:64000,且均能与原核表达的P46蛋白及猪肺炎支原体全菌蛋白中46KD大小的蛋白发生特异性反应.但配对试验表明,该两株P46单抗是针时同一表位的单抗.三株P97R1单抗中,2A10与6C5两株滴度较高,ELISA效价达1:32000.配对试验表明该三株单抗分别针对P97R1蛋白的不同表位.Western-blot结果表明,三株P97R1单抗均能与原核表达的P97R1蛋白及猪肺炎支原体全菌蛋白中80-120KD之间的两蛋白发生特异性反应.本研究制备的五株杂交瘤细胞株经三个月冻存或连续传代三个月均能保持较高的滴度.结论本研究分别成功制备了两株针对猪肺炎支原体P46蛋白以及三株针对P97R1蛋白的特异、稳定且高滴度的单克隆抗体.

关键词：猪肺炎支原体 P46蛋白 P97R1蛋白单克隆抗体

来源： cnki会议评论

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4株PRRSV变异株的分离与鉴定

4株PRRSV变异株的分离与鉴定