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油茶内生真菌分离及次生代谢物生物活性分析

分子植物育种 2024年

作者：刘德穗谢晴宜张军锋吴友根赵友兴海南大学三亚南繁研究院海南省崖州湾种子实验室海南大学化学化工学院中国热带农业科学院热带生物技术研究所海口市热带天然产物研究与利用重点实验室

为了解油茶的次生代谢产物是否与油茶内生菌的多样性有关，本研究首先从油茶的茎、叶等组织中分离内生真菌，了解其多样性，再用自由基清除法和2倍稀释法分别评价这些内生真菌的DPPH·清除能力与抗菌活性的潜力。结果表明：从油茶茎、... 详细信息

为了解油茶的次生代谢产物是否与油茶内生菌的多样性有关，本研究首先从油茶的茎、叶等组织中分离内生真菌，了解其多样性，再用自由基清除法和2倍稀释法分别评价这些内生真菌的DPPH·清除能力与抗菌活性的潜力。结果表明：从油茶茎、叶中共获得83株内生真菌，分布在7个属19个种中，其中间座壳属与刺盘孢属的数量最多，而毛双孢属是首次在油茶中分离得到。自由基清除实验显示19个真菌Ⅱ号粗提物中仅有菌株M4、M6、M13的活性大于80%，它们的IC50值分别为79.18、7.68、196.50 μg/mL，而大米粗提物中仅M5的活性大于80%，其IC50值为40.72 μg/mL。抗菌实验则显示19个PDB粗提物中仅有菌株M4与M13对金黄色葡萄球菌有抑制效果，抑菌圈分别为11.18、10.00 mm，而大米粗提物中仅M9对大肠杆菌有抑制效果，抑菌圈为10.33 mm。这些结果表明油茶内生真菌资源丰富，M4与M13同时具有抗氧化与抗菌活性，M6具有极强的抗氧化活性，可将这3株内生真菌作为重点研究目标，对这三株菌的粗提物进行化合物分离，期望从中找到与油茶相关的物质，以进一步揭示油茶中次生代谢产物与油茶内生菌有关，从而促进油茶产业的发展。

关键词：油茶内生真菌抗氧化活性抗菌活性

广藿香内生真菌Fusarium falciforme R16次生代谢产物及其抗菌活性

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分子植物育种 2024年第12期22卷 4009-4017页

作者：袁怡悦马青云谢晴宜吴友根赵友兴海南大学园艺学院海口570228 中国热带农业科学院热带生物技术研究所海口571101

广藿香是具有广泛应用价值的重要南药,为了探究其内生真菌的代谢属性及其抗菌作用,本研究采用组织培养法从广藿香植物花组织中分离和鉴定内生真菌,采用硅胶柱和半制备高效液相色谱等多种柱色谱分离方法对广藿香内生真菌Fusarium falcifo... 详细信息

广藿香是具有广泛应用价值的重要南药,为了探究其内生真菌的代谢属性及其抗菌作用,本研究采用组织培养法从广藿香植物花组织中分离和鉴定内生真菌,采用硅胶柱和半制备高效液相色谱等多种柱色谱分离方法对广藿香内生真菌Fusarium falciforme R16的次生代谢产物进行分离纯化,运用NMR和MS等波谱方法鉴定化合物结构,对单体化合物进行抗菌活性测试。结果从内生真菌Fusarium falciforme R16发酵产物中分离得到12个化合物,分别鉴定为对羟基苯乙醇(1)、2-羟乙基-联二苯(2)、4-甲基-5,6-2H-吡喃-2-酮(3)、苯乙酸乙酯(4)、苯甲醚(5)、4-bromostilbene-O-methyl isopropionate(6)、2-甲基-1,4-苯二酚(7)、N-(4-羟苯乙基)-2-苯乙酰胺(8)、乙酸-4-戊烯酯(9)、2-(4-甲氧基苯)-2-丙醇(10)、4-methylideneoxane(11)和2-四氢萘酚(12)。抗菌活性结果显示化合物5,7和10对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌具有一定抑制活性,化合物11和12对金黄色葡萄球菌具有弱的抑制活性,本研究结果为真菌抗菌活性物质发掘提供参考依据。

关键词：广藿香内生真菌次级代谢产物抗金黄色葡萄球菌活性抗枯草芽孢杆菌活性

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高产三萜灵芝新菌株‘沪农灵芝5号’的选育

食用菌学报 2024年第2期31卷 34-41页

作者：杨宝珠张劲松冯杰周帅冯娜刘艳芳吴友根唐传红海南大学南繁学院(三亚南繁研究院) 海南三亚572025 上海市农业科学院食用菌研究所农业农村部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室上海201403 海南大学热带农林学院海南儋州571737

为选育高产三萜灵芝(Ganoderma lucidum)新品种,以抗杂菌能力强、生物学效率高的‘沪农灵芝1号’(H 1)和三萜含量高、抗杂菌能力弱的‘灵芝G 8’(G 8)为亲本,将原生质体单核菌株进行杂交,从130个杂交组合中筛选出菌丝长势较好的25个杂... 详细信息

为选育高产三萜灵芝(Ganoderma lucidum)新品种,以抗杂菌能力强、生物学效率高的‘沪农灵芝1号’(H 1)和三萜含量高、抗杂菌能力弱的‘灵芝G 8’(G 8)为亲本,将原生质体单核菌株进行杂交,从130个杂交组合中筛选出菌丝长势较好的25个杂交菌株,并对其进行栽培试验,考察菌包成品率、生物学效率等农艺性状及子实体三萜含量,从中筛选出杂交菌株Z18。与亲本G8相比,Z18菌包成品率提高66.67%、生物学效率提高22.54%;与亲本H1相比,Z18子实体中三萜含量提高51.26%。ERIC-PCR分析结果显示,Z18与亲本存在遗传差异。Z18达到新品种审定标准,已通过上海市非主要农作物品种认定,定名为‘沪农灵芝5号’。

关键词：灵芝单核菌株杂交三萜含量单产

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不同溶剂提取油茶籽油的品质比较

分子植物育种 2024年第11期22卷 3705-3714页

作者：谢书奥申帅帅于靖姚广龙刘亚杨东梅杨华庚吴友根海南大学园艺学院海口570228 海南大学热带作物学院海口570228

为探究不同溶剂提取方法对海南油茶籽油品质的影响,本试验以海南岛主栽品种的油茶籽为材料,使用不同溶剂(石油醚,正己烷,丙酮,乙醇和乙酸乙酯)萃取油茶籽油,对油茶籽油的生理生化、次生代谢产物和脂肪酸含量进行测定,分析溶剂对茶油质... 详细信息

为探究不同溶剂提取方法对海南油茶籽油品质的影响,本试验以海南岛主栽品种的油茶籽为材料,使用不同溶剂(石油醚,正己烷,丙酮,乙醇和乙酸乙酯)萃取油茶籽油,对油茶籽油的生理生化、次生代谢产物和脂肪酸含量进行测定,分析溶剂对茶油质量的影响。结果表明,5种溶剂所得油茶籽油的生理生化参数和代谢产物存在显著差异,脂肪酸组成基本相同,UFA含量达到85%,其中油酸是主要成分。利用PCA和隶属函数平均分析法组合分析,石油醚和乙酸乙酯提取的茶油品质得分最高,乙醇提取的茶油品质得分最低。综上所述,不同溶剂对茶油品质有一定的影响,该研究成果丰富了油茶品质的相关研究,为海南省油茶产业发展提供参考。

关键词：油茶籽溶剂茶油脂肪酸品质

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不同种质油茶的比较转录组分析

分子植物育种 2023年第11期21卷 3523-3533页

作者：李杨严和琴于靖郑蔚吴友根海南大学园艺学院海南省热带园艺作物品质调控重点实验室海口570228

本研究采用高通量Illumina转录组测序技术对‘万海4号’(WH4)、‘博白大果’(BBDG)、‘长林40’(CL40)、‘岑软’(CR)和‘红花油茶’(HH)五个不同种质的油茶进行转录组测序并进行差异比较分析。结果表明,WH4、BBDG、CL40、CR以及HH通过... 详细信息

本研究采用高通量Illumina转录组测序技术对‘万海4号’(WH4)、‘博白大果’(BBDG)、‘长林40’(CL40)、‘岑软’(CR)和‘红花油茶’(HH)五个不同种质的油茶进行转录组测序并进行差异比较分析。结果表明,WH4、BBDG、CL40、CR以及HH通过组装分别获得了71 852、111 693、75 436、15 899和96 205个Unigenes,将所有Unigenes与公共数据库(Nr, Swiss-Prot, KOG, KEGG)进行相似性比对并注释,五种油茶注释基因所占百分比依次为65.51%、46.41%、60.57%、91.94%、54.98%;KEGG富集分析表明WH4、BBDG、CL40和HH中基因丰度最高的都是核糖体途径,而CR中基因丰度最高的是碳代谢途径;GO富集分析显示,WH4、BBDG、CL40、CR和HH基因分布结果一致。结合KEGG、GO和KOG富集分析,绘制出了油茶三萜皂苷生物合成途径通路图,筛选出该途径中的关键酶及相关基因,并对其进行了差异分析。该研究结果完善了油茶三萜皂苷生物合成途径相关基因的表达特征,可为油茶三萜皂苷的生物合成提供科学依据。

关键词：油茶(Camellia oleifera) 比较转录组三萜皂苷

‘热科1号’白木香内生真菌Diaporthe sp. BMX12次生代谢产物

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分子植物育种 2023年

作者：王启杨理马青云谢晴宜戴好富吴友根赵友兴中国热带农业科学院热带生物技术研究所海口市热带天然产物研究与利用重点实验室海南热带农业资源研究院海南大学园艺学院海南大学三亚南繁研究院海南省崖州湾种子实验室

对‘热科1号’白木香内生真菌进行分离鉴定并对其次生代谢产物进行研究。采用组织切块法分离内生真菌，通过真菌ITS序列的系统进化分析进行鉴定。采用硅胶、凝胶等柱色谱、半制备高效液相色谱等对内生真菌发酵产物的化学成分进行分离纯... 详细信息

对‘热科1号’白木香内生真菌进行分离鉴定并对其次生代谢产物进行研究。采用组织切块法分离内生真菌，通过真菌ITS序列的系统进化分析进行鉴定。采用硅胶、凝胶等柱色谱、半制备高效液相色谱等对内生真菌发酵产物的化学成分进行分离纯化，并根据核磁共振谱、质谱、圆二色谱(electronic circular dichroism， ECD)等方法鉴定化合物的结构。通过OD值法测定化合物对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制活性。从‘热科1号’白木香中分离鉴定了内生真菌Diaporthe sp. BMX12，从其发酵产物中分离得到14 个化合物，包括1个新化合物，结构分别鉴定为: diaporthone H (1)、diaporthone B (2)、diaporthone D (3)、cis-hydroxyscytalone (4)、内黄素(5)、4，6-二羟基-1(3H)-异苯并呋喃(6)、monodictyphenone (7)、diaporphasine A (8)、citreorosein (9)、4，6-dihydroxy-1H-isoindole-1，3(2H)-dione (10)、1，3，8-trihydroxyanthraquinone (11)、dicerandrol B (12)、dicerandrol A (13)、12-O-deacetyl-phomoxanthone A (14)。化合物1为聚酮类新化合物，化合物12-14对金黄色葡萄球菌ATCC 6538和枯草芽孢杆菌ATCC 6533的抑制率大于50%。

关键词： ‘热科1号’白木香内生真菌次生代谢产物聚酮类成分抑菌活性

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吴友根作品

老年教育(书画艺术) 2018年第7期 53-53页

作者：吴友根苏州市老年大学

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越南油茶HMGCR基因的克隆及表达分析

分子植物育种 2022年第13期20卷 4296-4304页

作者：郑蔚代佳妮严和琴于靖王勇吴友根海南大学园艺学院海南省热带园艺作物品质调控重点实验室海口570228 海南师范大学生命科学学院海口571158

为研究越南油茶(Camellia vietnamensis T.C.Huang ex Hu)中HMGCR(3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶)基因的分子作用机制,本研究采用同源克隆得到HMGCR基因全长并命名为CvHMGCR,对其进行生物信息学分析及表达模式研究。结果表明,CvHMGCR... 详细信息

为研究越南油茶(Camellia vietnamensis T.C.Huang ex Hu)中HMGCR(3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶)基因的分子作用机制,本研究采用同源克隆得到HMGCR基因全长并命名为CvHMGCR,对其进行生物信息学分析及表达模式研究。结果表明,CvHMGCR全长1800 bp,包括一个1770 bp完整的开放阅读框,编码589个氨基酸,与茶树(Camellia sinensis)、毛柄连蕊茶(Camellia fraterna)、喜树(Camptotheca acuminata)、风铃辣椒(Capsicum baccatum)和三七(Panax notoginseng)的HMGCR蛋白序列相似度均在75%以上,系统发育树显示Cv HMGCR与茶树(Camellia sinensis)、毛柄连蕊茶(Camellia fraterna)和喜树(Camptotheca acuminata)的HMGCR蛋白序列聚为一支。预测其蛋白分子质量为63.1kD,理论等电点为6.37,有两个跨膜螺旋区,属于不稳定疏水性蛋白。序列比对分析表明,CvHMGCR有4个典型的HMGCR保守基序,即2个HMG-CoA结合基序和2个NADP(H)结合基序。CvHMGCR基因在种子不同成熟期及植株根叶中均有表达,其中种子在九月的表达量显著高于其他月份;而对于不同组织部位中,叶的表达量最高。本研究结果为越南油茶次生代谢产物合成研究提供理论依据。

关键词：越南油茶 HMGCR基因克隆生物信息学分析

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越南油茶环阿屯醇合酶基因的克隆及表达分析

分子植物育种 2022年第7期20卷 2188-2195页

作者：郑蔚代佳妮严和琴于靖王勇吴友根海南大学园艺学院海南省热带园艺作物品质调控重点实验室海口570228 海南师范大学生命科学学院海口571158

为研究越南油茶(Camellia vietnamensis T.C.Huang ex Hu)中环阿屯醇合酶(cycloartenol synthase,CAS)基因的分子作用机制,本研究采用同源克隆的方法克隆得到环阿屯醇合酶基因全长并命名为CvCAS,对其进行生物信息学分析及表达模式研究... 详细信息

为研究越南油茶(Camellia vietnamensis T.C.Huang ex Hu)中环阿屯醇合酶(cycloartenol synthase,CAS)基因的分子作用机制,本研究采用同源克隆的方法克隆得到环阿屯醇合酶基因全长并命名为CvCAS,对其进行生物信息学分析及表达模式研究。结果表明,CvCAS全长2411 bp,包括一个2277 bp完整的开放阅读框,编码758个氨基酸,与茶(Camellia sinensis)、中华猕猴桃(Actinidia chinensis var.chinensis),刺楸(Kalopanax septemlobus)和人参(Panax ginseng)的CAS蛋白序列相似度均在85%以上,系统发育树分析显示CvCAS与茶(Camellia sinensis)和向日葵(Helianthus annuus)的CAS蛋白序列聚为一支。预测其蛋白分子质量为86.6 kD,理论等电点为6.20,无跨膜螺旋区,属于不稳定亲水性蛋白。序列比对分析表明,CvCAS具有氧化鲨烯环化酶(OSCs)超家族典型结构位点(DCTAE),三萜合成酶高度保守结构位点(DGSWYGSWGVCFTYG)和OSCs稳定结构保守位点(QW)。CvCAS基因在种子不同成熟期及植株不同组织部位均有表达,其中种子的表达量最高,且在九月与十月的表达量显著高于其他月份。本研究结果为越南油茶三萜皂苷等活性成分合成研究提供理论依据。

关键词：越南油茶阿屯醇合酶基因克隆表达分析