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扩展青霉脂肪酶131/133位点的饱和突变及突变体L133M的性质

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扩展青霉脂肪酶131/133位点的饱和突变及突变体L133M的性质

作者：吴勤勤福建师范大学

学位级别：硕士

扩展青霉脂肪酶(Penicillium expansum Lipase,PEL)属于丝氨酸蛋白酶家族,活性中心为Ser-Asp-His,附近有一个保守五肽结构域-GXSXG-。该结构域中的S(Ser)与组成活性中心的Ser为同一个氨基酸,X、X这两个氨基酸在不同的脂肪酶中略有不同... 详细信息

扩展青霉脂肪酶(Penicillium expansum Lipase,PEL)属于丝氨酸蛋白酶家族,活性中心为Ser-Asp-His,附近有一个保守五肽结构域-GXSXG-。该结构域中的S(Ser)与组成活性中心的Ser为同一个氨基酸,X、X这两个氨基酸在不同的脂肪酶中略有不同。为了探究该结构域中X、X位点的氨基酸组成与PEL催化性质之间的关系,本文对PEL的131/133位点进行了饱和突变,并对筛选到的突变体和野生型脂肪酶的酶学性质进行了对比研究,其主要内容如下:1、131/133位点的饱和突变及突变体的筛选对扩展青霉脂肪酶的131/133位点进行定点饱和突变,构建酶的突变体库。通过筛选得到催化活性可能比野生型脂肪酶大的突变体L133M。2、突变体高表达菌株的构建及表达的诱导将突变体L133M的编码基因克隆到p AO815表达载体中,构建四拷贝重组质粒p AO815-m-4PEL-L133M,并电转至毕赤酵母GS115中。筛选得到能高效表达突变体L133M的酵母菌株。用2%甲醇对筛选出的酵母菌株进行诱导表达,结果发现:在获得的发酵液中,脂肪酶突变体L133M的浓度达到了9.015 g/L。与见诸报道的脂肪酶产酶菌株相比,其表达水平较高-------这说明本实验中采用的脂肪酶高产菌株的构建及诱导表达策略较为合理、有效。3、突变体L133M与野生型脂肪酶的催化性质比较研究对突变体L133M和野生型脂肪酶的催化性质进行比较研究,结果显示:(1)随着底物碳链长度的增加,两种脂肪酶对底物的水解能力也逐渐降低。突变体L133M与野生型脂肪酶显示出相同的偏好短链长脂肪酸底物的特点。在反应3-10 min时,突变体L133M的比活力与野生型脂肪酶相比明显下降。然而,经过较长时间(48 h)催化后,突变体L133M脂肪酶催化底物油脂水解的能力却是野生型脂肪酶的1.61倍(这一结果与平板筛选定性测定的结果是一致的)。(2)突变体脂肪酶热稳定性的变化趋势与野生型脂肪酶相似,二者之间没有明显的不同。这说明,并不是热稳定性的不同导致了野生型与突变体脂肪酶长时间(48h)与短时间(3-10 min)催化结果的巨大差异。(3)野生型脂肪酶在对硝基苯丁酸酯的浓度大于3 m M时表现出界面激活,而突变体L133M则要在更高的底物胶束浓度(对硝基苯丁酸酯的浓度大于5 m M)时才表现出界面激活,其激活过程似乎更为缓慢且困难。进一步利用生物信息学软件进行分析后可知,L133M突变体性质的变化不是由于氢键数目的改变或是氢键键长的变化引起的。133位点突变引入的甲硫氨酸与酶的盖子间产生了一个新的疏水相互作用,使得酶的界面激活的过程要克服的阻力增大,因此在酶活测定的3-10 min的短暂时间内,突变体表现出的活力均小于野生型脂肪酶。但是在酶被激活(开盖)后,突变体与底物三丁酸甘油酯分子间的结合能却反而更小,表现出更强的底物结合能力及催化活性,而这可能是突变体在催化底物反应48 h后表现比野生型脂肪酶更强的催化活力的原因。

关键词：脂肪酶活性中心饱和突变酶学性质

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化学-电喷双模推进系统的研究现状及展望

中国空间科学技术 2021年第1期41卷 1-12页

作者：吴勤勤刘欣宇邓涵文康小明上海交通大学机械与动力工程学院上海200240

传统的化学推进和电推进拥有不同的特点及适用范围。化学推进可以产生毫牛级至牛级推力,相比于电推进,推力大,推力范围宽;电推进比冲高达上千秒,最小可以产生微牛级推力。但两种模式单独执行任务有一定的局限性,难以完成较为复杂的航天... 详细信息

传统的化学推进和电推进拥有不同的特点及适用范围。化学推进可以产生毫牛级至牛级推力,相比于电推进,推力大,推力范围宽;电推进比冲高达上千秒,最小可以产生微牛级推力。但两种模式单独执行任务有一定的局限性,难以完成较为复杂的航天任务。化学推进与电推进相结合的双模推进系统,同时拥有高比冲和较宽的推力范围,为航天器提供了更高的任务灵活性,其中单组元液体火箭发动机-离子液体电喷推力器双模推进系统近年来受到广泛关注。简述了单组元-电喷双模推进系统的工作原理和特点,重点总结了国内外关于双模推进的研究现状,并对目前面临的问题与挑战进行分析。

关键词：双模推进化学推进电喷推进双模推进剂离子液体

Mn掺杂PZT与P(VDF-TrFE)复合膜热释电器件

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Mn掺杂PZT与P(VDF-TrFE)复合膜热释电器件

作者：吴勤勤电子科技大学

学位级别：硕士

基于陶瓷/聚合物的复合材料厚膜是当前热释电材料研究的热点之一。它热释电系数高、介电性能优良、且柔韧性好、机械强度高,可以任意的弯曲折叠;并且制备工艺简单,成本低廉,制备温度低,能够很好的兼容读出电路(ROIC),无论是在单元热释... 详细信息

基于陶瓷/聚合物的复合材料厚膜是当前热释电材料研究的热点之一。它热释电系数高、介电性能优良、且柔韧性好、机械强度高,可以任意的弯曲折叠;并且制备工艺简单,成本低廉,制备温度低,能够很好的兼容读出电路(ROIC),无论是在单元热释电器件还是在多元热释电器件领域里,它都有很好的应用前景。研究者对PZT/P(VDF-TrFE)复合材料进行了许多研究,由于PZT/P(VDF-TrFE)复合材料性能的限制,基于PZT/P(VDF-TrFE)的多元器件发展一直很缓慢。本文中采用Mn掺杂PZT与P(VDF-TrFE)制备复合膜,使得复合材料的性能大大提高。通过控制Mn掺杂PZT陶瓷与P(VDF-TrFE)聚合物的质量比制备复合厚膜,研究PZTM与P(VDF-TrFE)的质量比对复合膜热释电系数、介电常数、损耗角正切、体积比热等参数的影响,并通过这些参数计算复合厚膜的探测优质FD,以及测定不同质量比的复合膜的红外吸收性能,从而研究PZTM与P(VDF-Tr FE)的质量比对器件性能的影响。本文还以单元器件为基础,设计了基于复合膜的多元器件及其读出电路,并且制作了、测试了相应实际电路。1文中采用Mn掺杂PZT为陶瓷相,以P(VDF-TrFE)为基质,以流延法制备了复合厚膜,采用Ni、Cr合金为靶材为厚膜制备电极,并采用金属极板夹持法极化厚膜。2通过控制复合材料中PZTM与P(VDF-Tr FE)的质量比,制备了四种陶瓷相与基质不同质量比的厚膜、敏感元;随着复合膜中陶瓷相的增加,陶瓷相与基质的接触面积增大,从而导致复合膜中孔隙增加。文中测试了各样品的热释电系数、介电常数、损耗角正切以及体积比热;研究了Mn掺杂PZT与P(VDF-Tr FE)的质量比对复合材料性能的影响。并通过这些参数计算了探测优值以及测定了各样品厚膜的红外吸收能力,研究了Mn掺杂PZT与P(VDF-TrFE)的质量比对探测器性能的影响。通过实验数据比较得到了最佳质量配比为PZTM:P(VDF-TrFE)=0.7:1。3对单元探测器电路进行改进,删除了电路中的大电阻Rg,删除电阻Rg后,器件的上电时间会有所增加,但输出信号稳定后信号波形较好。并在器件信号输出端串联滤波电容以滤除信号中的直流分量。4以单元器件为基础,制备多元热释电红外探测器。利用复合材料柔韧性强可任意弯曲的特点,采用黏贴法将复合膜敏感元与PCB板形成电气连接。器件绝热结构采用衬底掏空式结构;由于PCB板焊盘及银浆的支撑而形成绝热结构5采用晶体管的开关特性,设计了单元选读电路;选读电路主要包括开关模块和跟随模块,开关模块的主体是开关管,跟随模块的跟随管隔绝了开关模块与敏感元之间的连接,使得开关管的切换不会影响到敏感元的正常工作;并用Multisim仿真软件对单元选读电路进行了仿真,验证了其可行性。随后拓展了单元选读电路,对两路选读电路进行了仿真,得到了两路分时读出的正弦信号;文章中还以微控制器设计并制作了控制电路,该控制电路能够产生控制选读电路开断的信号。最后将器件与控制电路,选读电路连接,并用电性能测试平台测试了其电性能,得到了分时输出的两路正弦信号。

关键词： PZTM/P(VDF-TrFE)复合材料红外热释电器件读出电路

基于Java EE的应用业务系统权限管理研究与应用

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基于Java EE的应用业务系统权限管理研究与应用

作者：吴勤勤北京邮电大学

学位级别：硕士

计算机网络及通信技术的高速发展推动了企事业单位应用业务系统的蓬勃发展。权限管理是保障应用业务系统安全的核心机制。访问控制模型为实现权限管理提供了科学的理论依据。RBAC模型是学术界在访问控制领域研究的热点,当它应用于业务... 详细信息

计算机网络及通信技术的高速发展推动了企事业单位应用业务系统的蓬勃发展。权限管理是保障应用业务系统安全的核心机制。访问控制模型为实现权限管理提供了科学的理论依据。RBAC模型是学术界在访问控制领域研究的热点,当它应用于业务逻辑复杂、组织机构庞大、用户角色数量众多的应用业务系统时,暴露出了管理效率低、授权复杂、权限泄漏等诸多不容忽视的问题。本论文针对RBAC模型在应用业务系统的权限管理机制中表现的不足,研究了经典的访问控制模型,特别是RBAC模型及扩展模型。分析了应用业务系统访问控制机制的内在特征,引入了树型结构和约束域的概念,提出了适用于应用业务系统权限管理的树型结构的ARBAC模型,并设计了相应的访问控制体系结构。设计并实现了B/S架构下基于树型结构的ARBAC模型的应用业务系统的权限管理系统。通过对权限管理系统的测试和分析,验证了树型结构的ARBAC模型的正确性、安全性和便捷性。本文主要研究内容及创新点如下：（1）研究并提出了树型结构的RBAC模型。在实际的应用场景中,繁多的角色不便于管理,复杂的继承关系给应用业务系统带来了安全隐患。树型结构的RBAC模型用岗位代替传统的角色,将岗位作为结点引入树型组织机构中,岗位间为扁平化关系。该模型使岗位层次清晰、授权简单、直观理解性好,极大的降低了权限管理的难度,消除了角色继承引入的安全隐患。（2）在树型结构的RBAC模型的基础上,提出了适用于应用业务系统权限管理的树型结构的ARBAC模型,实现了用岗位管理岗位的机制。它完善了ARBAC02模型中“组织机构”的概念,从整体上规定了管理员的管理范围。管理员在树型结构中的位置确定了管理员可管理的组织机构、岗位、用户及管理员间的树型关系,从而简化了管理员对约束域的管理。（3）分析并设计了基于安全IP域的静态口令和动态口令结合的身份认证机制。该机制保留了静态口令的便捷性,又引入了动态口令的安全性,既简单又安全。（4）设计并实现了Java EE架构下基于树型结构的ARBAC模型的权限管理系统。该系统包括了访问控制执行、访问控制决策、访问控制策略制定等模块。在具体实现中,采用了上述身份认证机制,并结合了SHA-256加密算法、HTTPS加密通信、密码复杂度检查、密码定期更新等安全机制,进一步保障了系统的安全。评测结果表明本论文设计并实现的权限管理基本达到了预期的目标。本论文提出了适用于业务逻辑复杂、组织机构庞大、用户角色数量众多的应用业务系统的树型结构的ARBAC模型,设计了该模型的访问控制体系结构,采用了优秀的S2SH开源集成框架实现了基于Java EE的应用业务系统的权限管理。通过评测验证了改进模型、访问控制体系结构、基于树型结构的ARBAC模型的权限管理的正确性、有效性和直观性。

关键词：权限管理访问控制身份认证 ARBAC

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基于热释电红外探测器的人体定位技术

红外与毫米波学报 2020年第2期39卷 228-234页

作者：吴勤勤李希才王元庆任舒平南京大学电子科学与工程学院江苏南京210023 南京大学智能光感知与调控技术教育部重点实验室江苏南京210023 江西省科学院江西南昌330000

提出了一种热释电红外探测器视场调制策略。此策略能够提高人体定位分辨率,并且不会降低探测器的探测距离。对于此策略,热释电红外探测器的视场被遮光板调制,且调制后的探测器视场相互重叠交错形成一些采样区域。为了验证此策略,制作了... 详细信息

提出了一种热释电红外探测器视场调制策略。此策略能够提高人体定位分辨率,并且不会降低探测器的探测距离。对于此策略,热释电红外探测器的视场被遮光板调制,且调制后的探测器视场相互重叠交错形成一些采样区域。为了验证此策略,制作了包含九个热释电红外探测器的人体定位节点,节点中所有调制后的探测器视场角均为36°,每一个采样区域的角度均为4°。如果受测者在一个采样区域中运动,对应的热释电红外探测器将被触发,至少需要两个人体定位节点才能实现人体定位。根据节点中热释电红外探测器的状态,能够估计人体的位置。实验中,在600 cm×600 cm的方形区域内设置两个人体定位节点,使用最小二乘法估计理论误差,其最大理论误差为70 c m。实验中估计了八个人体位置,将所有的估计位置点连接起来形成估计路径。估计路径与预设路径十分接近。实验中的最小和最大定位误差分别为4.42 cm和16.91 cm。

关键词：热释电红外探测器人体定位最小二乘法

基于响应面模型的航空发动机管路振动设计方法

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基于响应面模型的航空发动机管路振动设计方法

第六届中国航空科学技术大会

作者：杨婧李俊吴勤勤屠恒瑞中国航发商用航空发动机有限责任公司

管路系统振动设计是航空发动机设计过程中的重要环节。由于管路系统具有数量众多,设计过程繁琐,迭代时间成本高的特点,在振动设计过程中引入数字化技术的构建及应用,以提升设计效率与质量。将管路系统设计过程向可视化、自动化、智能化... 详细信息

管路系统振动设计是航空发动机设计过程中的重要环节。由于管路系统具有数量众多,设计过程繁琐,迭代时间成本高的特点,在振动设计过程中引入数字化技术的构建及应用,以提升设计效率与质量。将管路系统设计过程向可视化、自动化、智能化转型,是航空发动机发展的必然趋势。本文提出基于响应面方法建立数值模型,对比传统的经验设计与有限元分析,其具有准确度高、效率高的优点。基于管路振动数值模型,在设计阶段数字化地量化出合适设计域,显著提升设计过程能效,加快设计效率、并降低后期分析及试验成本,缩短设计周期。

关键词：管路振动响应面数值模型

来源： cnki会议评论

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哺乳动物牙齿微痕分析方法的发展与应用

科学通报 2021年第12期66卷 1456-1468页

作者：史勤勤中国科学院古脊椎动物与古人类研究所中国科学院脊椎动物演化与人类起源重点实验室北京100044 中国科学院生物演化与环境卓越创新中心北京100044 现代古生物学和地层学国家重点实验室中国科学院南京地质古生物研究所南京210008

哺乳动物牙齿微痕分析方法是一种通过分析牙齿表面微痕纹理,推测其可能食性的研究方法,广泛应用于哺乳动物食性判断和古环境重建等研究领域.牙齿微痕分析方法最初借助扫描电子显微镜拍照观察,到21世纪初发展出4种定量分析牙齿微痕特征... 详细信息

哺乳动物牙齿微痕分析方法是一种通过分析牙齿表面微痕纹理,推测其可能食性的研究方法,广泛应用于哺乳动物食性判断和古环境重建等研究领域.牙齿微痕分析方法最初借助扫描电子显微镜拍照观察,到21世纪初发展出4种定量分析牙齿微痕特征的研究体系,通过不同的技术手段及参数选择,达到区分哺乳动物食性的目的.哺乳动物牙齿微痕分析方法不仅可以判断化石动物的食物来源,复原某一化石点的古环境和古生态,还可以分析气候事件与季节变化对哺乳动物食性的影响,或区分同一地点相近物种的食性生态位差异.尽管牙齿微痕分析方法的磨损物来源以及如何产生磨痕在理论上有待完善,但是随着越来越多的研究人员参与讨论,这一方法将得到更多的发展和应用.

关键词：牙齿微痕分析哺乳动物食性古环境

“∴”的思维模式——方以智“均的哲学”方法论的思维基础

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学术界 2023年第12期 60-68页

作者：周勤勤中国社会科学院大学哲学院北京102488

考察方以智《东西均》《一贯问答》《周易时论合编·图像几表》和《易余》对于“∴”的论说,可以推断出“∴说”的大致内容和“∴”的思维模式内涵,即公因反因观、“尽天地古今皆二”的辩证法思想、“三为约法”和集大成的方法论。“∴... 详细信息

考察方以智《东西均》《一贯问答》《周易时论合编·图像几表》和《易余》对于“∴”的论说,可以推断出“∴说”的大致内容和“∴”的思维模式内涵,即公因反因观、“尽天地古今皆二”的辩证法思想、“三为约法”和集大成的方法论。“∴”的思维模式是方以智“均的哲学”方法论的思维基础。

关键词： “∴” 《东西均》《一贯问答》《周易时论合编》《易余》

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表演与错位:德龄《清宫二年记》在晚清民国

文艺研究 2024年第2期 70-84页

作者：马勤勤中国社会科学院文学研究所

德龄是近代中国女性写作的一个特殊案例,以民族国家为中心的文学史框架无法为其英语写作提供合适的位置。《清宫二年记》出版于1911年,1914年前后出现文言、白话两种中译本。白话译本更符合中国人的文化心理和阅读习惯,也更流行。原作... 详细信息

德龄是近代中国女性写作的一个特殊案例,以民族国家为中心的文学史框架无法为其英语写作提供合适的位置。《清宫二年记》出版于1911年,1914年前后出现文言、白话两种中译本。白话译本更符合中国人的文化心理和阅读习惯,也更流行。原作与译本的罅隙造成了读者的错位,恰好方便德龄自由穿梭于中西之间,借助舞台、报刊等公共空间,全心全意地表演“德龄公主”的形象,建构自己讲述中国故事的权威。《清宫二年记》是德龄毕生文学事业的起点,不仅可以充实有关近代中国女性小说乃至现代文学发生的全景图画,也为我们重新思考中国文学与世界文学的关系提供了新契机。

关键词：女性写作中国女性小说文学事业晚清民国德龄公共空间现代文学中国文学与世界文学