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屎肠球菌类透明质酸酶基因突变株的构建及功能研究

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中华医学杂志 2007年第40期87卷 2852-2855页

作者：吴利先黄文祥罗涛孙小平重庆医科大学附属第一医院感染科重庆市传染病寄生虫病学重点实验室

目的构建屎肠球菌类透明质酸酶基因（hyl）突变株，研究hyl基因的功能。方法用自杀质粒pTx4577通过体内同源重组，筛选获得hyl基因的突变株，研究体外hyl基因缺失对突变株生长能力的影响。通过小鼠腹膜炎和兔心内膜炎模型研究体内突变... 详细信息

目的构建屎肠球菌类透明质酸酶基因（hyl）突变株，研究hyl基因的功能。方法用自杀质粒pTx4577通过体内同源重组，筛选获得hyl基因的突变株，研究体外hyl基因缺失对突变株生长能力的影响。通过小鼠腹膜炎和兔心内膜炎模型研究体内突变株的毒力情况。结果经同源重组，利用卡那霉素抗性筛选，PCR、脉冲场电泳和Southern印迹进行鉴定获得hyl基因突变株＋hyl，突变株在体外的生长能力低于野生株。小鼠腹膜炎模型中，在相同细菌感染浓度（3．7×10^9CFU／m1）下，野生株TX2466组小鼠在100h内的存活率为0，而＊hyl组小鼠的存活率为50％，差异有统计学意义（P〈0．01）。兔心内膜炎模型中，TX2466组主动脉瓣和壁性赘生物的菌落计数分别为（3．04±0．63）×10^6CFU／g和（6．87±0．58）×10^6CFU／g，而＊hyl组则分别为（0．21±0．06）×10^6CFU／g和（0．66±0．05）×10^6CFU／g，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论hyl基因突变株构建成功，hyl基因在屎肠球菌致病中起着重要的作用，可能是屎肠球菌的毒力因子之一。

关键词：肠球菌屎透明质酸葡糖胺酶突变模型动物

幽门螺杆菌vacA毒性片段与hpaA融合基因的原核表达

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世界华人消化杂志 2004年第5期12卷 1096-1099页

作者：刘淼杨致邦林珊珊吴利先重庆医科大学基础医学院微生物学教研室重庆市400016

目的:构建幽门螺杆菌vacA毒性片段(v)与hpaA融合基因的原核表达载体,并诱导表达,为制备具有治疗与预防作用的疫苗奠定基础. 方法:通过设计带有编码IL-3N端12个氨基酸引物,用PCR技术从pQE30-V质粒扩增出有接头的v基因,克隆至质粒pTrc99A-... 详细信息

目的:构建幽门螺杆菌vacA毒性片段(v)与hpaA融合基因的原核表达载体,并诱导表达,为制备具有治疗与预防作用的疫苗奠定基础. 方法:通过设计带有编码IL-3N端12个氨基酸引物,用PCR技术从pQE30-V质粒扩增出有接头的v基因,克隆至质粒pTrc99A-HpaA中与hpaA融合.将融合基因插入原核表达载体pQE30,再将pQE30-V-HpaA转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达结果, Western blotting鉴定其抗原性. 结果:融合蛋白的相对分子量约为65 000,能与幽门螺杆菌感染的人阳性血清发生抗原抗体反应. 结论:重组表达质粒pQE30-V-HpaA表达成功,为进一步研究其免疫学活性及制备疫苗提供了材料.

关键词：幽门螺杆菌 vacA毒性 hpaA融合基因原核表达氨基酸

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嗜血分枝杆菌病的研究进展

中国病原生物学杂志 2020年第5期15卷 605-608页

作者：陈越王国富吴利先大理大学基础医学院微生物与免疫学教研室云南大理671000

嗜血分枝杆菌属非结核分枝杆菌(Nontuberculous mycobacteria,NTM),主要感染免疫受损的成年人以及免疫功能正常的儿童。病变累及皮肤、淋巴结、四肢等部位。但至今对嗜血分枝杆菌的病原学检测、流行病学研究、诊断以及治疗标准等方面的... 详细信息

嗜血分枝杆菌属非结核分枝杆菌(Nontuberculous mycobacteria,NTM),主要感染免疫受损的成年人以及免疫功能正常的儿童。病变累及皮肤、淋巴结、四肢等部位。但至今对嗜血分枝杆菌的病原学检测、流行病学研究、诊断以及治疗标准等方面的认识仍存在缺陷,常导致临床的误诊、漏诊、延误治疗,为此对嗜血分枝杆菌做一综述。

关键词：嗜血分枝杆菌非结核分枝杆菌综述

人类免疫缺陷病毒与结核分枝杆菌双重感染的研究进展

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中国病原生物学杂志 2016年第4期11卷 374-376页

作者：郝贤斌吴利先大理大学基础医学院微生物与免疫学教研室云南大理671000

人类免疫缺陷病毒和结核分枝杆菌双重感染是相互影响相互促进病变进展、恶化,迅速导致死亡的过程。因此,及时诊断结核分枝杆菌感染对人类免疫缺陷病毒感染者的临床诊治和降低病死率,对控制艾滋病和结核病的快速流行有着重要的意义。本文... 详细信息

人类免疫缺陷病毒和结核分枝杆菌双重感染是相互影响相互促进病变进展、恶化,迅速导致死亡的过程。因此,及时诊断结核分枝杆菌感染对人类免疫缺陷病毒感染者的临床诊治和降低病死率,对控制艾滋病和结核病的快速流行有着重要的意义。本文就HIV与MTB双重感染的流行情况、相互影响机制、实验室诊断、治疗与预防等方面的研究进展进行了综述。

关键词：人类免疫缺陷病毒结核分枝杆菌双重感染综述

解脲脲原体的耐药性分析及其耐氟喹诺酮的分子机制研究

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中国皮肤性病学杂志 2007年第8期21卷 487-489页

作者：吴利先王国富陶娅玲蔡涛大理学院基础医学院微生物学教研室云南大理671000 重庆医科大学附属第一医院妇产科重庆400016 重庆医科大学附属第一医院皮肤性病科重庆400016

目的检测128株临床分离解脲脲原体(UU)对9种药物的敏感性,并检测喹诺酮类耐药UU对5种喹诺酮药物的MIC以及gyrA和parC基因突变情况。方法应用支原体分离鉴定、计数药敏试剂盒检测UU对9种药物的敏感性,用微量肉汤稀释法检测耐药UU菌株对5... 详细信息

目的检测128株临床分离解脲脲原体(UU)对9种药物的敏感性,并检测喹诺酮类耐药UU对5种喹诺酮药物的MIC以及gyrA和parC基因突变情况。方法应用支原体分离鉴定、计数药敏试剂盒检测UU对9种药物的敏感性,用微量肉汤稀释法检测耐药UU菌株对5种喹诺酮类药物的MIC,用PCR和DNA测序及序列比较检测基因突变。结果UU对多西环素最敏感,其次为米诺环素、交沙霉素、司帕沙星及克林霉素,对大环内酯类药物阿奇霉素和罗红霉素高度耐药。而司帕沙星、加替沙星和左氧氟沙星的MIC范围在0.25～8μg/mL,抑制UU活性强于氧氟沙星和环丙沙星。10株喹诺酮类耐药UU中有3株只有parC基因第80位TCA→TTA的突变,氨基酸由丝氨酸→亮氨酸,1株GyrA基因第95位密码子GAC→GAA的突变,氨基酸由天冬氨酸→谷氨酸。6株两者同时存在。结论在UU治疗中可首选多西环素,其次为米诺环素和交沙霉素。gyrA基因95位密码子和parC基因80位的突变密码子与UU耐喹诺酮类药物密切相关。

关键词：解脲脲原体氟喹诺酮类药物耐药机制

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注射用法罗培南的体内抗菌活性

中国新药与临床杂志 2008年第3期27卷 183-186页

作者：罗涛黄文祥吴利先重庆医科大学附属第一医院感染科重庆市传染病寄生虫病重点实验室

目的评价注射用法罗培南的体内抗菌活性。方法建立小鼠腹膜炎模型,比较注射用法罗培南及厄他培南对产酶的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌、耐万古霉素的粪肠球菌感染小鼠的体内抗菌活性。结果注射用法罗培... 详细信息

目的评价注射用法罗培南的体内抗菌活性。方法建立小鼠腹膜炎模型,比较注射用法罗培南及厄他培南对产酶的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌、耐万古霉素的粪肠球菌感染小鼠的体内抗菌活性。结果注射用法罗培南对产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌有较强的体内和体外抗菌活性,其ED_(50)分别为10.96、9.12和7.07 mg·kg^(-1),厄他培南则为14.84、12.58和10.16 mg·kg^(-1)。法罗培南对耐万古霉素的粪肠球菌体外敏感,而厄他培南显示耐药。法罗培南对耐万古霉素的粪肠球菌的ED_(50)比厄他培南低66.77%,分别为10.75和32.35 mg·kg^(-1)。结论注射用法罗培南和厄他培南对产ESBLs的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌有较强的体内和体外抗菌活性,两者作用相似。法罗培南对耐万古霉素的粪肠球菌感染可能有治疗作用,效果优于厄他培南。

关键词：法罗培南抗生素类动物实验

不同毒力Mtb感染对巨噬细胞凋亡的影响研究

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中国病原生物学杂志 2017年第11期12卷 1035-1038页

作者：郝贤斌吴利先大理大学基础医学院云南大理671000

目的建立结核分枝杆菌(Mtb)感染巨噬细胞Ana-1株模型,探讨不同毒力Mtb对巨噬细胞凋亡的影响及相关分子机制,为阐明结核病(TB)的发病机制提供依据。方法用结核分枝杆菌标准减毒株(H37Ra株)和大理临床分离株(D11)分别感染巨噬细胞Ana-1株... 详细信息

目的建立结核分枝杆菌(Mtb)感染巨噬细胞Ana-1株模型,探讨不同毒力Mtb对巨噬细胞凋亡的影响及相关分子机制,为阐明结核病(TB)的发病机制提供依据。方法用结核分枝杆菌标准减毒株(H37Ra株)和大理临床分离株(D11)分别感染巨噬细胞Ana-1株感染后1、3、6、12及24h用流式细胞技术(FCM)检测各组感染巨噬细胞的凋亡率并分析其变化。实验设空白对照。结果与空白对照组比较,H37Ra组和D11组巨噬细胞Ana-1凋亡率显著升高(P0.05)。结论不同毒力的Mtb感染巨噬细胞后诱导不同程度的细胞凋亡,凋亡率与菌株毒力呈负相关。

关键词：结核分枝杆菌巨噬细胞细胞凋亡流式细胞术

幽门螺杆菌重组Bb-hpaA-vacA疫苗的构建

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中国人兽共患病学报 2012年第2期28卷 131-134页

作者：王国富高峰吴利先云南省大理学院基础医学院微生物学教研室大理671000

目的构建幽门螺杆菌(Hp)重组双歧杆菌(Bb)Bb-hpaA-vacA疫苗。方法通过PCR分别扩增hpaA和va-cA抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接hpaA和vacA,得到hpaA-vacA融合基因;将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达... 详细信息

目的构建幽门螺杆菌(Hp)重组双歧杆菌(Bb)Bb-hpaA-vacA疫苗。方法通过PCR分别扩增hpaA和va-cA抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接hpaA和vacA,得到hpaA-vacA融合基因;将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-hpaA-vacA,电穿孔法将该质粒导入Bb,构建幽门螺杆菌重组hpaA-vacA疫苗,然后用SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达的重组蛋白。结果 PCR成功扩增出分子量约为1 500bp的hpaA-vacA融合基因,双酶切证实hpaA-vacA融合基因成功插入pGEX-1λT中,并成功转化入双歧杆菌,而且重组蛋白能在双岐杆菌中得到正确表达,Western blotting显示重组蛋白具有免疫原性。结论成功构建螺杆菌rBb-hpaA-vacA疫苗,为该疫苗的进一步研究奠定了基础。

关键词：幽门螺杆菌双歧杆菌重组hpaA-vacA疫苗构建

分枝杆菌诱导宿主免疫细胞凋亡机制的研究进展

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中国病原生物学杂志 2022年第12期17卷 1480-1483页

作者：丁寿鹏王国富吴利先大理大学基础医学院医学微生物与免疫教研室云南大理671000

鸟结核分枝杆菌(Mycobacterium avium tuberculosis,MAV)是引起严重机会性肺病的重要病原体之一。对于免疫功能低下的患者,例如合并HIV感染者,MAV是严重的晚期并发症。目前,MAV与免疫细胞间作用机制尚不清楚。MAV主要寄生于巨噬细胞中,... 详细信息

鸟结核分枝杆菌(Mycobacterium avium tuberculosis,MAV)是引起严重机会性肺病的重要病原体之一。对于免疫功能低下的患者,例如合并HIV感染者,MAV是严重的晚期并发症。目前,MAV与免疫细胞间作用机制尚不清楚。MAV主要寄生于巨噬细胞中,因此了解其对巨噬凋亡的诱导机制极其上游调控基因对未来寻找有效的治疗手段尤为重要。本文将对MAV诱导巨噬细胞及其他免疫细胞凋亡的机制进行综述。

关键词： MAV 巨噬细胞免疫细胞细胞因子综述