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幽门螺杆菌HpaA-CtxB融合蛋白的研制及免疫原性研究

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幽门螺杆菌HpaA-CtxB融合蛋白的研制及免疫原性研究

作者：吴利先重庆医科大学

学位级别：硕士

目的：用基因工程技术克隆和表达*** 的hpaA基因，以纯化的重组蛋白为抗原，建立检测血清HpaA抗体的间接ELISA法，探讨以重组蛋白作为抗原在诊断***感染中的价值。方法：用PCR方法从*** DNA中扩增hpaA基因片段。插入原核表达载体pQE30... 详细信息

目的：用基因工程技术克隆和表达*** 的hpaA基因，以纯化的重组蛋白为抗原，建立检测血清HpaA抗体的间接ELISA法，探讨以重组蛋白作为抗原在诊断***感染中的价值。方法：用PCR方法从*** DNA中扩增hpaA基因片段。插入原核表达载体pQE30，转化受体菌DH5a，克隆及序列分析后在大肠杆菌中进行高效表达，表达产物经纯化和Western blot鉴定后，作为抗原,建立检测血清*** HpaA抗体的间接ELISA法，与科研诊断标准比较评价其应用的可行性。结果： 1.重组表达质粒pQE30-hpaA构建成功,序列分析所得序列完整，插入的基因片段全长783bp，与基因文库中的hpaA基因同源性达97.3%;2. SDS-PAGE显示表达产物相对分子量为30 000，表达量占全菌总量的31.67%;3. Western blot显示该蛋白可被病人血清所识别;***-PAGE分析表达形式，蛋白主要存在于细菌裂解液上清中，部分存在于包涵体中,经Ni2+-NTA树脂对上清进行纯化后，可得到纯度90%以上的蛋白质;5.重组蛋白免疫兔后的免疫血清双扩

关键词：幽门螺杆菌粘附素原核表达酶联免疫吸附试验

结核分枝杆菌特异性蛋白抗原研究进展及其应用策略探讨

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中国病原生物学杂志 2014年第2期9卷 180-182,187页

作者：聂恒吴利先大理学院基础医学院微生物学与免疫学教研室云南大理671000

结核病是当今世界主要的致死疾病之一,早期诊断是控制结核病的关键,血清学实验是结核诊断的重要依据。随着科学技术的进步,新的结核诊断用抗原不断被发现。本文概述了38ku蛋白、Ag85复合体、MPT64蛋白、ESAT-6蛋白、CFP-10蛋白、16ku蛋... 详细信息

结核病是当今世界主要的致死疾病之一,早期诊断是控制结核病的关键,血清学实验是结核诊断的重要依据。随着科学技术的进步,新的结核诊断用抗原不断被发现。本文概述了38ku蛋白、Ag85复合体、MPT64蛋白、ESAT-6蛋白、CFP-10蛋白、16ku蛋白、MTB81、MTB84和U1蛋白等9种结核分枝杆菌重要抗原的研究进展,并对其应用策略进行了探讨。

关键词：结核分枝杆菌蛋白抗原诊断综述

艾滋病与结核病双重感染的流行及相互作用机制的研究进展

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中国病原生物学杂志 2013年第8期8卷 756-758页

作者：王超吴利先云南省大理学院基础医学院微生物学教研室云南大理671000

艾滋病与结核病双重感染已成为严重的公共卫生问题,艾滋病和结核病相互促进,加速HIV感染发展为艾滋病的进程,增高了结核病的死亡率。只有弄清HIV与结核分枝杆菌相互作用机制,才有可能找到有效的治疗措施。本文综述了艾滋病合并结核病双... 详细信息

艾滋病与结核病双重感染已成为严重的公共卫生问题,艾滋病和结核病相互促进,加速HIV感染发展为艾滋病的进程,增高了结核病的死亡率。只有弄清HIV与结核分枝杆菌相互作用机制,才有可能找到有效的治疗措施。本文综述了艾滋病合并结核病双重感染的流行现状以及艾滋病与结核病的相互影响机制研究进展。

关键词：艾滋病结核病双重感染作用机制综述

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多位点测序技术在病原菌核型分析中的应用

中华检验医学杂志 2006年第3期29卷 278-281页

作者：吴利先黄文祥重庆医科大学附属第一医院感染科重庆市传染病寄生虫病学重点实验室 400016

随着分子生物学研究技术的发展,有人说在未来5～10年中,对人类健康做出贡献的最关键生物技术是传染病的分子诊断技术。

关键词：核型分析测序技术分子生物学研究病原菌位点分子诊断技术核酸分析遗传相关性脉冲场电泳生物技术

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幽门螺杆菌活载体疫苗的研究进展

中国人兽共患病学报 2011年第5期27卷 447-449页

作者：罗夙医吴利先大理学院基础医学院微生物学及免疫学教研室大理671000

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,HP）被公认为是慢性活动性胃炎、消化性溃疡等疾病发生的主要病因,并与胃腺癌、胃淋巴瘤的发生密切相关,是一级致癌因子[1]。虽然HP确切的致病机制尚未完全阐明,但HP必须首先定植于胃粘膜,然后再进一... 详细信息

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,HP）被公认为是慢性活动性胃炎、消化性溃疡等疾病发生的主要病因,并与胃腺癌、胃淋巴瘤的发生密切相关,是一级致癌因子[1]。虽然HP确切的致病机制尚未完全阐明,但HP必须首先定植于胃粘膜,然后再进一步侵入宿主防御系统,由其毒素的直接作用和诱导的炎症反应等间接作用损伤组织而致病。流行病学调查研究显示，我国幽门螺旋杆菌感染率约为40％～60％，儿童也有相当高的感染率。

关键词：幽门螺杆菌活载体疫苗慢性活动性胃炎宿主防御系统流行病学调查幽门螺旋杆菌致病机制消化性溃疡

结核分枝杆菌重组Mtb8.1蛋白自诱导表达与抗原性分析

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中国人兽共患病学报 2014年第5期30卷 535-537页

作者：聂恒吴利先大理学院基础医学院微生物学与免疫学教研室大理671000

目的通过自诱导表达系统重组表达结核分枝杆菌H37Rv菌株可溶性蛋白抗原Mtb8.1,并对其抗原性进行分析。方法应用PCR技术扩增结核分枝杆菌H37Rv菌株Mtb81蛋白抗原编码序列,将其插入克隆载体pMD18-T,酶切后插入表达载体PET28a,通过优化培... 详细信息

目的通过自诱导表达系统重组表达结核分枝杆菌H37Rv菌株可溶性蛋白抗原Mtb8.1,并对其抗原性进行分析。方法应用PCR技术扩增结核分枝杆菌H37Rv菌株Mtb81蛋白抗原编码序列,将其插入克隆载体pMD18-T,酶切后插入表达载体PET28a,通过优化培养基和发酵工艺,摸索出一条高效的可溶表达方法,以间接ELISA法研究其免疫学特性。结果与结论重组的Mtb81高效可溶性表达,纯化后纯度达95%以上;用纯化的重组蛋白抗原作为包被抗原建立的间接ELISA法检测200份血清样本,阳性率达34.0%,阴性率达91.0%,,符合率达62.5%。

关键词：结核分枝杆菌 Mtb8 1 可溶性表达抗原性

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屎肠球菌类毒力基因hyl的致病性研究

生物医学工程学杂志 2009年第3期26卷 601-605页

作者：吴利先黄文祥王国富孙小平大理学院基础医学部微生物学教研室大理671000 重庆医科大学附属第一医院重庆400016

采用菌落杂交法检测364株不同脉冲场电泳(PFGE)型的屎肠球菌中透明质酸酶(hyl)基因的分布。用自杀质粒pTX4577通过体内同源重组,筛选获得hyl基因的突变株,体外研究hyl基因缺失对突变株生长能力的影响。采用小鼠腹膜炎模型体内研究hyl基... 详细信息

采用菌落杂交法检测364株不同脉冲场电泳(PFGE)型的屎肠球菌中透明质酸酶(hyl)基因的分布。用自杀质粒pTX4577通过体内同源重组,筛选获得hyl基因的突变株,体外研究hyl基因缺失对突变株生长能力的影响。采用小鼠腹膜炎模型体内研究hyl基因突变株的毒力下降情况。结果显示,在临床分离菌株中hyl基因阳性率为32.76%,明显高于非临床分离菌株(5.30%)。经同源重组,利用卡那霉素抗性筛选,PCR、PFGE和Southern印迹进行鉴定获得hyl基因突变株,命名为*hyl。突变株在体外的生长能力低于野生株。小鼠腹膜炎模型中,在相同细菌感染浓度(3.7×109cfu)下,野生株TX2466组小鼠的存活率为0,而*hyl组小鼠的存活率为50%,差异有显著性。hyl基因主要出现于临床感染的屎肠球菌中,在屎肠球菌致病中起着重要的作用,可能是屎肠球菌的毒力因子之一。

关键词：屎肠球菌毒力基因透明质酸酶致病性

注射用法罗培南钠对金葡菌的体内外抗菌活性研究

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中国抗生素杂志 2008年第5期33卷 289-292页

作者：罗涛黄文祥吴利先重庆医科大学附属第一医院重庆市传染病寄生虫病重点实验室重庆400016

目的研究注射用法罗培南钠对临床分离的金葡菌的体内外抗菌活性。方法用头孢西丁纸片法在近年来本室保存的临床分离金葡菌中筛选耐甲氧西林的金葡菌(methicillin resistant staphylococcus aureus,MRSA),用琼脂平板稀释法测定法罗培南... 详细信息

目的研究注射用法罗培南钠对临床分离的金葡菌的体内外抗菌活性。方法用头孢西丁纸片法在近年来本室保存的临床分离金葡菌中筛选耐甲氧西林的金葡菌(methicillin resistant staphylococcus aureus,MRSA),用琼脂平板稀释法测定法罗培南和万古霉素对甲氧西林敏感的金葡菌(methicillin sensitive staphylococcus aureus,MSSA)和MRSA菌株的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)。根据MIC选择对法罗培南敏感、中度和高度耐药的MRSA菌株及1株MSSA建立小鼠腹膜炎模型,以注射用法罗培南钠及万古霉素通过静脉注射进行感染动物的治疗,评价对感染小鼠的保护作用。结果151株金葡菌中共分离出65株MRSA,阳性率为43%;体外试验法罗培南和万古霉素对86株MSSA均敏感。65株MRSA对法罗培南敏感者10株,其余均耐药;对万古霉素均敏感。注射用法罗培南钠对4株菌的ED_(50)分别为38.3、38.6、71.9和7.07mg/kg;万古霉素则为2.25、10.18、20.85和1.77mg/kg。结论注射用法罗培南钠对MSSA有良好的体内和体外抗菌活性;注射用法罗培南钠对MRSA无效,即使体外敏感。

关键词：法罗培南钠金葡菌体外抗菌活性体内抗菌活性

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结核分枝杆菌与树突状细胞相互作用研究进展

中国病原生物学杂志 2017年第4期12卷 381-383页

作者：李萍吴利先大理大学基础医学院微生物与免疫学教研室云南大理671000

结核病仍是严重危害人类健康的慢性传染性疾病。树突细胞是体内作用最强大的专职抗原呈递细胞,也是机体联系固有免疫和适应性免疫的重要桥梁细胞。树突细胞与结核分枝杆菌的相互作用是抗结核感染中的重要途径。本文就近年树突细胞与结... 详细信息

结核病仍是严重危害人类健康的慢性传染性疾病。树突细胞是体内作用最强大的专职抗原呈递细胞,也是机体联系固有免疫和适应性免疫的重要桥梁细胞。树突细胞与结核分枝杆菌的相互作用是抗结核感染中的重要途径。本文就近年树突细胞与结核分枝杆菌的相互作用研究进展作一综述。

关键词：结核分枝杆菌树突状细胞免疫应答综述