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作者：吕文琼重庆医科大学

学位级别：硕士

第一部分儿童急性T淋巴细胞白血病中GPCRs表达紊乱目的:通过高通量RNA转录组测序(High through-put RNA sequencing,RNA-seq)检测儿童急性T淋巴细胞白血病(T cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)肿瘤细胞中差异表达的G蛋白偶联受... 详细信息

第一部分儿童急性T淋巴细胞白血病中GPCRs表达紊乱目的:通过高通量RNA转录组测序(High through-put RNA sequencing,RNA-seq)检测儿童急性T淋巴细胞白血病(T cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)肿瘤细胞中差异表达的G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors,GPCRs)基因。方法:收集13例初发儿童T-ALL骨髓样本,通过Ficoll淋巴细胞分离液分离T-ALL肿瘤细胞;收集4例健康儿童外周血样本,通过人T细胞提取试剂盒分离正常T细胞;提取T-ALL肿瘤细胞及正常T细胞RNA,进行RNA-seq,检测基因mRNA表达水平;通过R语言分析TALL肿瘤细胞及正常T细胞差异表达基因并绘制差异表达基因热图及火山图;通过Gene Ontology对差异表达基因进行GO分析。结果:RNA-seq分析结果显示,相对于健康儿童外周血正常T细胞,13例T-ALL患儿骨髓肿瘤细胞中存在大量肿瘤相关通路基因表达异常;大量GPCRs表达异常;差异表达GPCRs进行GO分析,存在其中鞘氨醇-1-磷酸盐(Sphingosine-1-Phosphate,S1P)信号通路相关基因富集。结论:儿童急性T淋巴细胞白血病骨髓细胞中存在大量异常表达的GPCRs基因,其中S1P信号通路相关基因异常富集。第二部分S1PR3在儿童急性T淋巴细胞白血病中表达增加目的:分析RNA-seq数据S1P信号通路相关基因表达情况;通过查询GEO数据库分析多组T-ALL研究数据S1P信号通路相关基因的表达;在T-ALL细胞系及病人样本中对S1P信号通路相关基因进行验证。方法:分析RNA-seq数据中S1P信号通路相关基因的表达情况。检索GEO数据库,分析多个研究组数据T-ALL中S1P信号通路相关基因表达情况。收集初发儿童T-ALL骨髓上清及非肿瘤患者骨髓,通过ELISA检测骨髓上清S1P及其运载体载脂蛋白M(Apolipoprotein M,Apo M)表达。通过GEO数据库,分析T-ALL细胞中S1P信号通路相关基因的表达情况。收集健康儿童外周血,人T细胞提取试剂盒提取正常T细胞;收集健康儿童胸腺组织,研磨、过滤后获得胸腺细胞;收集非肿瘤患者骨髓,Ficoll淋巴细胞分离液单个核细胞,进一步磁珠分选得CD34+骨髓细胞;收集初诊儿童T-ALL骨髓样本,Ficoll淋巴细胞分离液分离T-ALL肿瘤细胞;培养T-ALL各细胞系细胞;提取细胞RNA,通过Q-PCR检测正常T细胞、CD34+骨髓细胞及T-ALL细胞系中SPHK1、SPHK2及SGPL1的表达水平。通过Q-PCR检测正常T细胞、正常胸腺细胞、CD34+骨髓细胞及T-ALL细胞系中S1PR3的表达水平。通过流式细胞仪检测T-ALL细胞系细胞膜S1PR3的表达水平。通过Q-PCR检测外周血T细胞、临床T-ALL肿瘤细胞S1PR3表达情况。结果:RNA-seq发现与正常T细胞相比,S1P合成酶SPHK2在TALL肿瘤细胞中表达增加,S1P降解酶SGPL1表达下降,S1PR3在TALL肿瘤细胞中表达显著增加,S1PR1、S1PR2、S1PR4及S1PR5表达相对减少。GEO数据库多个T-ALL研究组数据显示,T-ALL肿瘤细胞S1PR3表达显著增加,SPHK1、SPHK2表达相对增加,S1PR1、S1PR2、S1PR4及S1PR5表达相对减少,SGPL1表达相对减少。ELISA检测结果显示T-ALL骨髓上清中S1P及Apo M表达无明显差异。GEO数据库分析及Q-PCR验证结果显示,与外周血T细胞、胸腺细胞、CD34+骨髓细胞相比,T-ALL细胞系S1PR3表达显著增加,SPHK2表达增加,SGPL1表达下降。流式细胞仪结果显示T-ALL细胞系中,JK细胞表面S1PR3表达最高,其次为CEM、MOLT4、CUTLL1。临床患者肿瘤细胞Q-PCR结果显示,T-ALL中S1PR3的表达水平显著增加。结论:分析GEO数据库T-ALL相关研究、同时在T-ALL细胞系及病人样本中进行验证,发现S1P信号通路相关基因在T-ALL差异表达,其中S1PR3表达显著增加。第三部分抑制S1PR3促进儿童急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡目的:检测S1PR3分子在体外对T-ALL细胞凋亡的作用方法:通过S1PR3特异性小分子抑制剂TY52156(0、1、3、7、10、15u M)、CAY10444(0、3、5、10、20、30u M)分别作用于T-ALL细胞系,通过Annexin V-APC/7-AAD染色,流式细胞仪检测细胞凋亡。收集并培养原代T-ALL病人肿瘤细胞,CAY10444(0、3、5、10、20、30u M)作用后Annexin V-

关键词：急性T淋巴细胞白血病 RNA转录组测序 G蛋白偶联受体鞘氨醇-1-磷酸盐鞘氨醇-1-磷酸盐受体3 细胞凋亡

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hsa＿circ＿0004123绝对定量PCR方法的建立及验证

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解放军医学杂志 2019年第11期44卷 906-911页

作者：付立芳张航吕文琼韩星邹琳重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心/儿童发育疾病研究教育部重点实验室/国家儿童健康与疾病临床医学研究中心/儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地/重庆市干细胞治疗工程技术研究中心重庆400014 四川省雅安市人民医院检验科四川雅安625000 成都市第三人民医院实验医学科临床检验部成都610000 四川大学华西第二医院小儿血液肿瘤科成都610000 西安市儿童医院检验科西安710004

目的建立能精确定量hsa_circ_0004123的绝对反转录荧光定量PCR(RT-qPCR)方法,并在白血病细胞系中验证hsa_circ_0004123的拷贝数。方法提取B淋巴母细胞系***总RNA,反转录合成cDNA。以cDNA为模板,扩增包含hsa_circ_0004123反向剪接位点的2... 详细信息

目的建立能精确定量hsa_circ_0004123的绝对反转录荧光定量PCR(RT-qPCR)方法,并在白血病细胞系中验证hsa_circ_0004123的拷贝数。方法提取B淋巴母细胞系***总RNA,反转录合成cDNA。以cDNA为模板,扩增包含hsa_circ_0004123反向剪接位点的236 bp特征片段,克隆到pGM-T载体中,并对重组质粒进行测序鉴定。以梯度稀释的重组质粒为标准品,采用SYBR荧光染料法进行RT-qPCR并建立标准曲线,在4种白血病细胞系(***、Jurkat、Raji、K562)中验证hsa_circ_0004123的拷贝数。结果建立了能精确定量hsa_circ_0004123拷贝数的绝对RT-qPCR方法,其线性范围为(9.63×10^3~9.63×10^9)拷贝/μl,灵敏度为(4528±516)拷贝/μl,批内变异系数(CV)为0.30%~1.86%,批间CV为1.40%~2.30%,且熔解曲线为单一峰值曲线。对4种白血病细胞系(***、Jurkat、Raji、K562)中hsa_circ_0004123的拷贝数分别用本法进行检测,结果显示,hsa_circ_0004123在4种白血病细胞系中的表达差异有统计学意义(P<0.001)。结论建立的检测hsa_circ_0004123的绝对RT-qPCR方法具有线性范围广,灵敏度、特异性高,重复性好等特点,可为hsa_circ_0004123在白血病中的精确定量提供技术支持。

关键词： hsa_circ_0004123 绝对荧光定量PCR 白血病

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认知行为干预联合针对性康复训练对冠心病患者运动恐惧的影响

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中文科技期刊数据库（文摘版）医药卫生 2022年第4期 239-241页

作者：吕文琼溧阳市人民医院心内科江苏常州213300

探讨认知行为干预联合针对性康复训练对冠心病患者运动恐惧的影响。方法:纳入2021年1月~2021年12月我院心内科收治的冠心病患者88例,随机分为两组。对照组44例予常规冠心病护理,观察组44例则在对照组基础上实施认知行为干预联合针对性... 详细信息

探讨认知行为干预联合针对性康复训练对冠心病患者运动恐惧的影响。方法:纳入2021年1月~2021年12月我院心内科收治的冠心病患者88例,随机分为两组。对照组44例予常规冠心病护理,观察组44例则在对照组基础上实施认知行为干预联合针对性康复训练。两组患者干预前后运动恐惧水平的评价和比较采用心脏病患者运动恐惧量表(TSK-SV Heart),两组患者应对方式的评价和比较采用医学应对方式量表(MCMQ)。结果:两组患者干预前运动恐惧评分相似,差异无统计学意义(P>0.05);实施认知行为干预联合针对性康复训练后,与对照组相比,观察组患者运动恐惧水平显著为高,有统计学意义(P<0.05);观察组患者应对方式中面对评分显著高于对照组,回避、屈服维度显著低于对照组,有统计学意义(P<0.05)。结论:认知行为干预联合针对性康复训练通过对冠心病患者进行运动相关知识的宣教和针对性的康复训练,有效纠正了患者对运动的错误、片面认知,降低了患者的运动恐惧水平,对促使患者以积极方式应对疾病、提高其生活质量有着积极意义。

关键词：认知行为干预针对性康复训练冠心病运动恐惧应对方式

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β-arrestin 1促进急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞衰老

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中国实验血液学杂志 2019年第3期27卷 777-784页

作者：郭维刘姗刘海燕陈燕华张航吕文琼邹琳重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室重庆市(儿童发育重大疾病诊治与预防)国际科技合作基地

目的:探讨β-arrestin1对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞衰老的作用及其可能机制。方法:收集T-ALL患者骨髓样本和对照样本,应用RT-PCR和Western blot检测β-arrestin1在T-ALL患者中的表达,统计分析β-arrestin1的表达与T-ALL患者临床... 详细信息

目的:探讨β-arrestin1对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞衰老的作用及其可能机制。方法:收集T-ALL患者骨髓样本和对照样本,应用RT-PCR和Western blot检测β-arrestin1在T-ALL患者中的表达,统计分析β-arrestin1的表达与T-ALL患者临床病理特征及预后的关系。构建稳定敲低或过表达β-arrestin1 Jurkat细胞株,应用CCK-8检测Jurkat细胞数,β-半乳糖苷酶染色(SA-β-gal)法检测β-arrestin1对Jurkat细胞衰老的作用,应用RNA-Seq与KEGG数据交叉分析筛选可能的信号通路,Western blot验证信号通路关键位点。结果:β-arrestin1在T-ALL患者样本中表达降低(P <0.01),且β-arrestin1的表达与外周血白细胞数(r=-0.601)、外周血原始细胞数(r=-0.516)和髓外浸润(r=-0.359)呈负相关,与化疗敏感性(r=0.393)呈正相关。利用敲低或过表达β-arrestin1的稳定Jurkat细胞株发现,β-arrestin1降低Jurkat细胞数(P <0.05),促进Jurkat细胞衰老(P<0.05)。RNA-Seq与KEGG数据交叉分析发现,T-ALL患者中β-arrestin1可能通过Ras-p16-pRb-E2F1调控细胞衰老。经Western blot验证发现,β-arrestin1促进Ras和p16的表达,抑制pRB和E2F1的表达(P <0.05)。结论:β-arrestin1可能通过Ras-p16-pRb-E2F1促进T-ALL细胞衰老,延缓T-ALL疾病进程,这为阐释T-ALL新的发病机制提供理论依据。

关键词：急性T淋巴细胞白血病 β-arrestin 1 Jurkat细胞衰老

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GPR183慢病毒载体的构建及对Cutll1细胞凋亡的影响

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中国细胞生物学学报 2019年第3期41卷 423-430页

作者：张航舒逸吕文琼张佳张虹洋唐诗邹琳重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地重庆400014

该文旨在构建过表达人GPR183的慢病毒载体,研究GPR183对急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphocytic leukemia, T-ALL)细胞Cutll1凋亡的影响。通过PCR法扩增人GPR183序列片段,并连接到慢病毒表达载体质粒pEZ-Lv201上,构建过表达GPR18... 详细信息

该文旨在构建过表达人GPR183的慢病毒载体,研究GPR183对急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphocytic leukemia, T-ALL)细胞Cutll1凋亡的影响。通过PCR法扩增人GPR183序列片段,并连接到慢病毒表达载体质粒pEZ-Lv201上,构建过表达GPR183慢病毒质粒,包装病毒,感染T-ALL Cutll1细胞, q-PCR及Western blot检测细胞GPR183表达水平;检测GPR183对Cutll1细胞生长、周期及凋亡影响。质粒PCR及测序结果显示,成功构建GPR183过表达慢病毒载体。感染Cutll1细胞后荧光显微镜下观察到绿色荧光,过表达组GPR183 mRNA及蛋白表达水平较对照组明显上升(P<0.01),成功构建过表达GPR183的Cutll1细胞株,过表达GPR183的Cutll1细胞生长明显受到抑制(P<0.001),凋亡水平较对照组显著升高(P<0.01),但不影响细胞周期。初步显示, GPR183能明显抑制T-ALL Cutll1细胞增长,促进细胞凋亡,为后续研究奠定基础。

关键词： GPR183 T-ALL 细胞凋亡

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Arrb1基因敲除对小鼠T淋巴细胞发育的影响

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中国细胞生物学学报 2018年第3期40卷 373-380页

作者：陈燕华蒋光洁郭维张航吕文琼邹琳重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地重庆400014

该文旨在研究Arrb1(β-arrestin1)基因敲除对小鼠T细胞发育的影响,进一步探讨急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphocytic leukemia,T-ALL)发病机制。该文使用q-PCR、Western blot分别检测Arrb1基因敲除的C57BL/6J小鼠中Arrb1的m RNA和蛋白质水平;流式细胞术检测Arrb1基因敲除小鼠及野生型小鼠的胸腺、外周血、淋巴结的T细胞比例。结果显示,与野生型相比,Arrb1基因敲除小鼠的胸腺CD4CD8双阴(double negative,DN)细胞比例明显增加,DN1期细胞比例增加最为显著(P<0.05),而DN4期细胞比例减少(P<0.05);CD4CD8双阳(double positive,DP)细胞比例显著减少(P<0.05)。外周血CD4阳性T细胞比例减少(P<0.05),淋巴结CD4阳性T细胞比例以及CD4/CD8阳性T细胞比值减少(P<0.05)。研究结果证明,Arrb1基因敲除显著影响小鼠T细胞发育,使T细胞发育阻滞在DN期,从而可能成为影响T-ALL发病的重要因素。

关键词： Arrb1 T细胞发育胸腺细胞

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造血干细胞Hdac3基因促进鼠淋巴细胞分化

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第三军医大学学报 2019年第9期41卷 844-850页

作者：吕文琼舒逸杨碧洁张航张佳张虹洋周永杰石毓君邹琳张鹏辉重庆医科大学附属儿童医院临床检验中心临床分子医学中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地重庆400014 四川大学华西医院卫生部移植工程与移植免疫重点实验室成都610041

目的建立造血干细胞特异性Hdac3条件性敲除小鼠模型,探讨Hdac3基因对小鼠造血发育的影响。方法 Hdac3^(fl/fl)小鼠与Mx1-Cre小鼠杂交获得Hdac3^(fl/fl)Mx1-Cre小鼠,PCR鉴定小鼠基因型。连续注射poly(I:C),诱导Cre表达,得到造血干细胞Hd... 详细信息

目的建立造血干细胞特异性Hdac3条件性敲除小鼠模型,探讨Hdac3基因对小鼠造血发育的影响。方法 Hdac3^(fl/fl)小鼠与Mx1-Cre小鼠杂交获得Hdac3^(fl/fl)Mx1-Cre小鼠,PCR鉴定小鼠基因型。连续注射poly(I:C),诱导Cre表达,得到造血干细胞Hdac3敲除鼠Hdac3^(fl/fl)Mx1-Cre^+(CKO)及对照组小鼠Hdac3^(+/+)Mx1-Cre^+(WT),Q-PCR分析Hdac3 mRNA表达水平。流式细胞术检测小鼠外周血淋巴细胞数量及比例。HE染色观察小鼠胸腺、脾脏形态学改变。流式细胞术检测小鼠外周血CD3^+、B220^+细胞比例。克隆形成实验分析小鼠造血干/祖(LSK)细胞的分化能力。结果成功建立造血干细胞Hdac3^(fl/fl)Mx1-Cre^+(CKO)小鼠模型。与对照组相比,CKO小鼠外周血淋巴细胞绝对数量(P<0.001)及比例(P<0.01)均显著降低;细胞亚群分析显示,CKO小鼠外周血CD3^+淋巴细胞及B220^+淋巴细胞显著减少(P<0.01,P<0.001),CD11b^+髓系细胞比例显著增加(P<0.01)。HE染色结果显示,实验组鼠胸腺和脾淋巴细胞数减少。克隆形成实验显示,实验组小鼠粒系克隆数无差异,前B细胞样克隆缺失。结论造血干细胞中Hdac3基因促进造血干细胞向淋巴细胞分化。

关键词：组蛋白去乙酰化酶3 造血干细胞分化淋巴细胞发育

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激励失灵：基层公务员晋升的现实逻辑及其后果——基于中部A省某区直单位“关系消解激励”的观察

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暨南学报(哲学社会科学版) 2024年第07期 88-103页

作者：陈文琼中南大学公共管理学院

自上而下为调动基层公务员积极性，做了很多正向激励的努力，如职级并行、考核奖励、“制造流动”等等，但基层公务员工作积极性不高的问题仍然普遍存在，基层公务员存在激励困境，本文旨在探讨该困境生成的内在机理。基于中部A省某区... 详细信息

自上而下为调动基层公务员积极性，做了很多正向激励的努力，如职级并行、考核奖励、“制造流动”等等，但基层公务员工作积极性不高的问题仍然普遍存在，基层公务员存在激励困境，本文旨在探讨该困境生成的内在机理。基于中部A省某区直单位为期6年的观察发现，首先，体制内激励基层公务员的办法通常有精神奖励、物质奖励以及晋升激励。这三种奖励办法可以归结为两种不同的类型，即以晋升为奖励手段的内核激励，以及以物质和精神奖励为手段的边缘奖励。其次，由于奖励资源的稀缺性，实施奖励就必须具有程序上的公平依据，因此，考核是实施激励的重要补充。但吊诡的是，现实中考核往往并不是激励的依据，而是相反。再次，实施内核激励的真实依据是由基层公务员在体制内外关系资源的强弱建构的隐性晋升秩序，而边缘奖励则对该秩序中的弱势群体提供，作为一种平衡。因此基层普遍存在年度优秀公务员和晋升者不一致，以及晋升者的领导评价和同事风评不一致的现象。最后，隐形晋升秩序让内核激励和边缘激励效果出现了双降，本文将其总结为“关系消解激励”,并且当前的分配型体制正在强化县域的关系属性。

关键词：关系消解激励公务员晋升隐性晋升秩序分配型体制公务员考核

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油茶农林复合经营对紫色土土壤团聚体及其有机碳含量的影响

油茶农林复合经营对紫色土土壤团聚体及其有机碳含量的影响

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作者：蒋文琼中南林业科技大学

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风险制造与风险规避:基层政府的行为逻辑

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华南农业大学学报（社会科学版） 2024年第3期23卷 132-140页

作者：陈文琼中南大学公共管理学院湖南长沙410083

通过对Z省S县和H省X县的田野调查,发现基层政府存在一定的制造风险的行为,主要表现为逾越上级政府对其行为所设定的规范或要求,其背后的动机往往是为了增加财政可支配收入或扩大对基层有限财政的支配权,从而缓解财政供需之间的矛盾;该... 详细信息

通过对Z省S县和H省X县的田野调查,发现基层政府存在一定的制造风险的行为,主要表现为逾越上级政府对其行为所设定的规范或要求,其背后的动机往往是为了增加财政可支配收入或扩大对基层有限财政的支配权,从而缓解财政供需之间的矛盾;该行为生成于县域财政资金匮乏与横向竞争结构下政绩压力的双重挤压,由于“资源密集型”政绩的路径依赖,政府产生了大量的财政资源诉求,然而这种需求却难以通过当前匮乏的财政资源得到满足;为了将制造的风险限定在可控的范围之内,迎检、维稳和精英俘获都是基层转而采取的风险规避行为策略。

关键词：风险制造风险规避财政收入 “资源密集型”政绩

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