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牛诱导多能干细胞的建立及应用研究进展

生物技术通报 2023年第5期39卷 130-141页

作者：曾虹曾睿琳付伟吉文汇兰道亮西南民族大学畜牧兽医学院成都610041 青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室成都610041 青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室成都610041

诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)是指通过导入特定的转录因子将终末分化的体细胞重编程为可以无限增殖更新并具有分化为三胚层多种细胞类型的一类干细胞系。目前对人与小鼠的iPSCs研究已经取得了很多重要成果,... 详细信息

诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)是指通过导入特定的转录因子将终末分化的体细胞重编程为可以无限增殖更新并具有分化为三胚层多种细胞类型的一类干细胞系。目前对人与小鼠的iPSCs研究已经取得了很多重要成果,但其他动物,如牛等经济型有蹄类家畜iPSCs的研究始终没有突破性的进展。如何将外源转录因子通过重编程载体高效安全地导入体细胞中并持续表达是生产牛诱导多能干细胞(bovine induced pluripotent stem cells,biPSCs)的主要瓶颈。本文就biPSCs建立中重编程系统的选择、诱导因子的选择、小分子化合物的添加等方面进行综述,以期为进一步完善biPSCs及牛胚胎干细胞系的建立提供参考。

关键词：牛诱导多能干细胞体细胞重编程培养体系小分子化合物

维生素A对牦牛卵母细胞体外成熟及后续胚胎发育能力的影响

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中国畜牧兽医 2022年第12期49卷 1607-1614页

作者：吉文汇王玉玲何翃闳付伟兰道亮西南民族大学畜牧兽医学院成都610065 青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室成都610065

【目的】探究维生素A对牦牛卵母细胞体外成熟及后续胚胎发育能力的影响。【方法】以牦牛卵母细胞为研究对象,在其体外成熟培养液中分别添加0(对照组)、2、5、10和20μmol/L维生素A,体外培养24 h统计第一极体排出率;对成熟后各组卵母细... 详细信息

【目的】探究维生素A对牦牛卵母细胞体外成熟及后续胚胎发育能力的影响。【方法】以牦牛卵母细胞为研究对象,在其体外成熟培养液中分别添加0(对照组)、2、5、10和20μmol/L维生素A,体外培养24 h统计第一极体排出率;对成熟后各组卵母细胞进行孤雌激活,在孤雌激活胚胎培养的第2和8天分别统计卵裂率和囊胚率;用实时荧光定量PCR检测各组MⅡ期卵母细胞中维生素A调控卵母细胞成熟典型信号通路中的节点基因RARα、RARβ、RARγ、RXRα、RXRβ、RXRγ、STRA8及非典型信号通路中的节点基因MEK和ERK1的相对表达量,筛选最佳维生素A处理浓度。在体外成熟培养液中添加最佳浓度维生素A,成熟6和24 h分别收集MⅠ和MⅡ期卵母细胞,将部分MⅡ期卵母细胞进行孤雌激活,收集激活8 d的囊胚,用实时荧光定量PCR检测GV、MⅠ和MⅡ期卵母细胞及孤雌激活囊胚中RARα、RXRα、STRA8基因的相对表达量。【结果】与对照组相比,2、5和10μmol/L维生素A组第一极体排出率和卵裂率均显著提高(P0.05)。【结论】在体外成熟过程中,添加2μmol/L维生素A可以促进牦牛卵母细胞的成熟,能够显著提高孤雌激活胚胎的卵裂率,且维生素A主要通过典型信号通路调控牦牛卵母细胞的成熟。

关键词：维生素A 卵母细胞孤雌激活典型信号通路

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仔猪亚硝酸盐急性中毒致死剂量的探究

四川畜牧兽医 2023年第1期50卷 19-21页

作者：陈德纯吉文汇黄坚汤承西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 动物医学四川省高校重点实验室四川成都610041

为探讨仔猪亚硝酸盐急性中毒的致死剂量,采用经口灌服不同剂量的亚硝酸钠复制仔猪亚硝酸盐中毒模型,结果发现:试验组高低剂量组的仔猪均出现黏膜发绀、呼吸困难、强直性痉挛等症状,最后窒息而死;低剂量组可被亚甲蓝救治成功,高剂量组发... 详细信息

为探讨仔猪亚硝酸盐急性中毒的致死剂量,采用经口灌服不同剂量的亚硝酸钠复制仔猪亚硝酸盐中毒模型,结果发现:试验组高低剂量组的仔猪均出现黏膜发绀、呼吸困难、强直性痉挛等症状,最后窒息而死;低剂量组可被亚甲蓝救治成功,高剂量组发病较快难以解救。本研究表明,0.25 g/kg的亚硝酸钠即可导致仔猪急性中毒和死亡。

关键词：仔猪亚硝酸盐中毒亚甲蓝诊疗

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牛多能干细胞研究进展

中国草食动物科学 2023年第2期43卷 47-54页

作者：欧丹丹吉文汇付伟兰道亮西南民族大学青藏高原研究院成都610041 西南民族大学畜牧兽医学院成都610041 西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室成都610041

多能干细胞(PSCs)是一类能够无限自我更新的细胞,能够分化成各种类型的组织,促进基因编辑和再生领域发展。牛作为最常见的家养有蹄类动物之一,具有很高的经济价值和遗传潜力,因此衍生稳定的牛多能干细胞对理解牛胚胎发育分子机制有着积... 详细信息

多能干细胞(PSCs)是一类能够无限自我更新的细胞,能够分化成各种类型的组织,促进基因编辑和再生领域发展。牛作为最常见的家养有蹄类动物之一,具有很高的经济价值和遗传潜力,因此衍生稳定的牛多能干细胞对理解牛胚胎发育分子机制有着积极作用。目前,人们已在牛胚胎干细胞(bESCs)和诱导多能干细胞(biPSCs)方面做了诸多研究,但建立与小鼠和人类相当的bESC仍具有挑战性。文章重点综述了牛胚胎干细胞的各种衍生方式以及多能性维持的内部信号通路和外部微环境的相互作用,并介绍了诱导多能干细胞、扩展潜能干细胞的特点,以期为牛干细胞的相关领域提供参考。

关键词：牛多能干细胞胚胎干细胞诱导多能干细胞扩展潜能干细胞

远震剪切波分裂研究华南西南部上地幔各向异性特征

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地球物理学报 2024年第3期67卷 829-842页

作者：王祎然滕吉文田小波中国科学院地质与地球物理研究所岩石圈演化国家重点实验室北京100029 中国科学院大学北京100049 中国科学院地球科学研究院北京100029

华南板块由扬子克拉通和华夏地块在新元古代碰撞拼合形成,其西南部的缝合带位置存在强烈争议.本文基于一条南北向宽频带流动台阵天然地震数据,利用SKS波分裂研究华南西南部上地幔各向异性特征的南北向变化.分裂测量结果显示,26°N以南... 详细信息

华南板块由扬子克拉通和华夏地块在新元古代碰撞拼合形成,其西南部的缝合带位置存在强烈争议.本文基于一条南北向宽频带流动台阵天然地震数据,利用SKS波分裂研究华南西南部上地幔各向异性特征的南北向变化.分裂测量结果显示,26°N以南的右江盆地快波偏振方向为E-W或NEE-SWW方向,分裂时差为0.5~2.5 s,变化范围较大;川东褶皱带存在较多空解,快波偏振方向以近东西向为主,分裂时差在0.5~1.5 s范围内变化;在右江盆地北缘和川东褶皱带的过渡区域(约26°N附近)各向异性明显较弱.结合前人的上地幔速度成像结果,我们认为川东褶皱带与右江盆地过渡带是扬子克拉通的南边界,在其下方北侧的川东褶皱带巨厚的岩石圈向南转变成较薄的岩石圈,陡变的岩石圈边界引起了软流圈上涌,软流圈的垂向运动导致其水平方位各向异性较弱.

关键词：剪切波分裂方位各向异性上地幔变形扬子克拉通边界

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牦牛心脏原代成纤维细胞系的建立及鉴定

西南民族大学学报（自然科学版） 2022年第2期48卷 119-124页

作者：王玉玲张露露周珊蒋涛兰道亮吉文汇西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室四川成都610041

旨在建立牦牛胚胎心脏原代成纤维细胞系并对其进行鉴定.以牦牛胚胎心脏组织块为研究对象,运用组织块法对其进行分离培养获得原代细胞,使用胰酶消化法对原代细胞进行传代培养,通过MTT法检测细胞增殖活性,利用HE染色法及秋水仙素处理染色... 详细信息

旨在建立牦牛胚胎心脏原代成纤维细胞系并对其进行鉴定.以牦牛胚胎心脏组织块为研究对象,运用组织块法对其进行分离培养获得原代细胞,使用胰酶消化法对原代细胞进行传代培养,通过MTT法检测细胞增殖活性,利用HE染色法及秋水仙素处理染色体鉴定细胞外形,选取4个成纤维标志性基因TGF-β、FSP-1、S100A4、Vimentin,通过RT-qPCR技术对基因的表达情况进行鉴定.结果显示成功将原代分离培养的成纤维细胞传代至11代;通过外型的一系列检测方法发现其符合成纤维细胞的外形,该细胞活力充足,生长规律符合“S”型生长曲线;荧光定量检测以上四种成纤维细胞特征性基因在不同代数中均表达且相对稳定,结果证实分离培养出的细胞符合成纤维细胞系的分子表达特征.本研究成功建立了牦牛胚胎心脏原代成纤维细胞系,集成了该细胞系的鉴定流程,为今后牦牛进一步研究提供相关的细胞系平台.

关键词：牦牛心脏成纤维细胞原代细胞系分离培养鉴定

GPR50在小鼠卵母细胞体外成熟进程中的表达及亚细胞定位

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西南民族大学学报（自然科学版） 2023年第3期49卷 245-254页

作者：王甜黄显朋朱洪阳吉文汇付伟殷实兰道亮西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室四川成都610041

旨在探究GPR50在小鼠卵母细胞体外成熟进程中的表达规律及亚细胞定位.通过卵母细胞体外培养技术、qPCR技术及免疫荧光技术测定GPR50在小鼠不同时期卵母细胞的转录水平及亚细胞定位.结果表明,所建立的qPCR方法敏感性高、特异性强、重复... 详细信息

旨在探究GPR50在小鼠卵母细胞体外成熟进程中的表达规律及亚细胞定位.通过卵母细胞体外培养技术、qPCR技术及免疫荧光技术测定GPR50在小鼠不同时期卵母细胞的转录水平及亚细胞定位.结果表明,所建立的qPCR方法敏感性高、特异性强、重复性好且检测效率高,可用于测定GPR50在小鼠卵母细胞中转录水平的表达;GPR50在不同阶段小鼠卵母细胞中均有表达,生发泡破裂(GVBD)后,GPR50的表达量显著高于GV期(P<0.05);随着卵母细胞的发育,其表达量不断增高,到MII期达到顶峰,极显著高于GV、GVBD及MI期(P<0.01).随着卵母细胞的发育,GPR50大量表达于细胞质和细胞膜,但在成熟卵母细胞中,GPR50主要集中分布于细胞膜.以上结果说明,GPR50在小鼠卵母细胞体外成熟中发挥重要的作用,为解析GPR50在哺乳动物卵母细胞体外成熟进程的分子机制奠定了基础.

关键词： GPR50 小鼠卵母细胞体外成熟转录水平表达亚细胞定位

Stx2噬菌体溶原对大肠杆菌运动性及其相关基因表达的影响

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微生物学报 2014年第7期54卷 737-745页

作者：曹冬梅吉文汇严亚贤王恒安孙建和陆承平上海交通大学农业与生物学院、上海市兽医生物技术重点实验室上海200240 南京农业大学动物医学院、农业部动物疫病诊断与免疫开放重点实验室江苏南京210095

【目的】通过基因缺失和噬菌体溶原转换研究大肠杆菌运动相关基因flhDC、fliA、fliD和fliE对Stx2噬菌体ΦMin27溶原菌的影响。【方法】本实验利用Red重组酶系统,构建了大肠杆菌MG1655的缺失株MG1655△flhDC、MG1655△fliA、MG1655△fliD... 详细信息

【目的】通过基因缺失和噬菌体溶原转换研究大肠杆菌运动相关基因flhDC、fliA、fliD和fliE对Stx2噬菌体ΦMin27溶原菌的影响。【方法】本实验利用Red重组酶系统,构建了大肠杆菌MG1655的缺失株MG1655△flhDC、MG1655△fliA、MG1655△fliD及MG1655△fliE,并将flhDC片段、fliA片段、fliD片段和fliE片段连接pUC18后分别转化相应的突变株,得到相应的互补菌株。通过Stx2噬菌体ΦMin27的感染获得各缺失株的溶原株MG1655△flhDCФMin27、MG1655△fliAФMin27、MG1655△fliDФMin27及MG1655△fliEФMin27。随后测定了野生株、缺失株、互补株和溶原株的运动能力,并通过荧光定量PCR分析了flhDC缺失前后野生株和溶原株其他运动相关基因表达量的变化。【结果】Stx2噬菌体ФMin27溶原感染可促进MG1655的fliA和fliD基因的表达,增强宿主菌MG1655的运动特性;MG1655在flhDC基因缺失的状态下,fliA和fliD基因的表达同步出现上调,但运动性未发生变化,而MG1655△flhDC溶原菌丧失了运动特性,基因转录水平检测发现MG1655△flhDCФMin27与MG1655△flhDC相比,fliA和fliD基因的表达同步出现显著下调,而对fliE基因的表达几乎没有影响。fliA、fliD和fliE单个基因的缺失对大肠杆菌MG1655和Stx2噬菌体ΦMin27溶原菌的运动性几乎没有影响。【结论】提示fliA和fliD基因共同参与了鞭毛运动的调控,flhDC基因可影响噬菌体溶原菌株的运动性,为进一步研究噬菌体溶原与宿主基因之间的相互调节作用提供理论依据。

关键词：大肠杆菌 Stx2噬菌体溶原菌 flhDC 运动性

华东部分地区猪群中猪萨佩罗病毒分子流行病学调查

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动物医学进展 2012年第12期33卷 116-121页

作者：兰道亮吉文汇王长松孙焕陈莫林崔立童光志华修国上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室上海200240 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

为了解华东地区猪群中猪萨佩罗病毒(Porcine sapelovirus,PSV)感染流行情况,通过RT-PCR方法对该地区15个规模化养猪场960份猪粪便样本进行了检测。结果表明,所检测的15个养殖场均存在PSV感染,总体平均阳性率为17.2%,其中10周龄～20周龄... 详细信息

为了解华东地区猪群中猪萨佩罗病毒(Porcine sapelovirus,PSV)感染流行情况,通过RT-PCR方法对该地区15个规模化养猪场960份猪粪便样本进行了检测。结果表明,所检测的15个养殖场均存在PSV感染,总体平均阳性率为17.2%,其中10周龄～20周龄的猪PSV最易感。进一步系统进化分析表明,所检阳性毒株同源性较高,不同地区的毒株交错分布在一起,不存在明显的地区差异,但大体可分为3个亚群,而且已有的国外PSV株均包括在这3个亚群中,这提示PSV可能至少存在3种不同的抗原亚型。

关键词：猪萨佩罗病毒分子流行病学调查