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新制癌菌素诱导小鼠海马神经元细胞DNA损伤的作用研究

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云南大学学报（自然科学版） 2018年第3期40卷 603-608页

作者：丁敬宾王志军司胜斌丁娟赵薇宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室宁夏医科大学生物化学与分子生物学系宁夏医科大学总医院肿瘤医院放射科宁夏医科大学颅脑疾病重点实验室宁夏银川750004

为了探索化学诱导物新制癌菌素(NCS)对小鼠海马神经元细胞株HT22 DNA损伤的影响,研究以9Gy X射线辐照为阳性对照组,通过CCK8试剂盒法检测绘制NCS作用下HT22细胞生长曲线以明确NCS处理细胞的最佳浓度,经Hoechst染色和TUNEL染色观察该剂量... 详细信息

为了探索化学诱导物新制癌菌素(NCS)对小鼠海马神经元细胞株HT22 DNA损伤的影响,研究以9Gy X射线辐照为阳性对照组,通过CCK8试剂盒法检测绘制NCS作用下HT22细胞生长曲线以明确NCS处理细胞的最佳浓度,经Hoechst染色和TUNEL染色观察该剂量NCS对细胞DNA损伤及凋亡的影响,用免疫荧光染色结合Western blot分析HT22细胞核中DNA损伤反应酶PARP1的表达变化.结果显示,NCS作用的终质量浓度为1 000 ng/m L时,从48 h起对HT22细胞增殖表现出显著的抑制作用;Hoechst染色可见NCS作用下HT22细胞DNA损伤加剧,TUNEL染色提示NCS能够诱导细胞凋亡;免疫荧光染色和Western-blot实验显示NCS能够促进细胞核内PARP1的表达.说明化学诱导剂NCS能够引起HT22细胞DNA损伤及凋亡以及上调DNA损伤反应酶PARP1的表达,可以用于模拟大剂量射线对细胞的辐射损伤效应.

关键词：新制癌菌素 DNA损伤多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1 HT22细胞株

环指蛋白146在Aβ诱导的C6细胞凋亡中的作用研究

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神经解剖学杂志 2019年第6期35卷 611-616页

作者：黄银魏慧玲王志军司胜斌张慧涛王银刘娟丁娟宁夏医科大学宁夏颅脑疾病重点实验室银川750004 宁夏医科大学基础医学院银川750004 宁夏医科大学总医院银川750004

目的:探讨环指蛋白146(RNF146)在Aβ诱导C6细胞的凋亡过程中的作用。方法:大鼠神经胶质瘤细胞株C6细胞分为对照组(control)和Aβ处理组(Aβ)。Annexin V-EGFP/PI染色法检测细胞凋亡,Western Blot方法检测C6细胞中RNF146的表达和凋亡诱... 详细信息

目的:探讨环指蛋白146(RNF146)在Aβ诱导C6细胞的凋亡过程中的作用。方法:大鼠神经胶质瘤细胞株C6细胞分为对照组(control)和Aβ处理组(Aβ)。Annexin V-EGFP/PI染色法检测细胞凋亡,Western Blot方法检测C6细胞中RNF146的表达和凋亡诱导因子(AIF)蛋白的表达和分布。结果:与对照组比较,Aβ处理能够促进细胞凋亡,同时减少细胞中RNF146的表达,并促进AIF核转位。结论:Aβ可导致C6细胞凋亡,其机制与RNF146表达下调并激活AIF核转位有关。

关键词： β-淀粉样肽环指蛋白146 凋亡诱导因子 C6细胞

氧化苦参碱对脓毒症大鼠肾组织NF-κB/TNF-a信号通路的影响

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宁夏医科大学学报 2017年第4期39卷 403-407,F0002页

作者：司胜斌董小艳杜先才张鸣号宁夏医科大学银川750004 宁夏医科大学基础医学院病理生理学系银川750004

目的观察氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)对脓毒症大鼠肾损伤的保护作用。方法采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制大鼠脓毒症模型,随机将48只SD大鼠分为正常对照(CON)组、OMT组、CLP组、CLP+OMT高、中、低(52、26、13 mg·kg-1)剂量组。光镜下观... 详细信息

目的观察氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)对脓毒症大鼠肾损伤的保护作用。方法采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制大鼠脓毒症模型,随机将48只SD大鼠分为正常对照(CON)组、OMT组、CLP组、CLP+OMT高、中、低(52、26、13 mg·kg-1)剂量组。光镜下观察肾组织病理学改变,采用脲酶比色法测定血清尿素氮(BUN)含量,RT-PCR法测定肾组织NF-κB(P65)m RNA表达;Western blot法测定肾组织NF-κB(P65)及p Ik B-α的表达;放射免疫分析法(RIA)测定肾组织匀浆中肿瘤坏死因子-a(TNF-a)及白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白含量的改变。结果不同剂量的OMT能抑制肾组织NF-κB(P65)m RNA的表达(P<0.05),减少NF-κB(P65)及p Ik B-α的蛋白表达(P<0.05),降低肾组织匀浆中TNF-α及IL-1β的含量(P<0.05),降低血清BUN含量(P<0.05),改善肾组织充血、水肿和炎性细胞浸润。结论 OMT能通过抑制NF-κB/TNF-a信号通路的活化,减少肾脏促炎因子TNF-a、IL-1β的表达,进而对脓毒症大鼠肾脏发挥保护作用。

关键词：氧化苦参碱脓毒症肾损伤 NF-κB

卵巢癌细胞外泌体抑制外周单个核细胞源性树突状细胞成熟的机制研究

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中华肿瘤防治杂志 2023年第9期30卷 520-526页

作者：董育清王怡李丽华司胜斌汤业珍董晓微盛青松赵薇宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系宁夏银川750001 宁夏回族自治区人民医院中心实验室宁夏银川750011 中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院妇产科福建福州350001

目的探究卵巢癌细胞源性外泌体对人外周血树突状细胞(DCs)成熟的影响。方法从健康人外周血中分离单个核细胞(PBMC),利用免疫磁珠从中分选出CD14^(+)的细胞;采用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白介素-4(rhIL-4)联... 详细信息

目的探究卵巢癌细胞源性外泌体对人外周血树突状细胞(DCs)成熟的影响。方法从健康人外周血中分离单个核细胞(PBMC),利用免疫磁珠从中分选出CD14^(+)的细胞;采用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白介素-4(rhIL-4)联合刺激的办法诱导CD14^(+)/PBMC分化为未成熟树突状细胞(iDCs),光镜确认细胞形态;超速离心提取卵巢癌顺铂耐药细胞外泌体(A2780cis-外泌体),蛋白质印迹法检测其特征性蛋白标志物,透射电镜(TEM)观察外泌体形态,纳米颗粒跟踪分析仪(NTA)检测外泌体粒径分布;iDCs与A2780cis-外泌体共培养后给予重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)诱导,流式细胞术检测CD83^(+)/HLA-DR^(+)/CD1a^(+)细胞比例变化。结果超速离心提取的卵巢癌顺铂耐药细胞外泌体,TEM下可检测到直径约为60 nm的“杯盏状”外泌体颗粒。蛋白质印迹法结果显示A2780cis细胞各蛋白表达均为1,A2780cis-外泌体中CD9、CD81和CD63相对表达量分别为1.08±0.07、0.67±0.04和1.78±0.19,t值分别为2.928、13.760和7.900,P值分别为0.043、<0.001和0.001;但A2780cis-外泌体无Calnexin表达。NTA检测显示,外泌体粒径范围主要集中于(56.80±1.60)nm。经流式细胞术检测CD14磁珠分选前后CD14^(+)/PBMC比例分别为(10.20±0.53)%和(97.60±0.26)%,t=255.900,P<0.001。rhGM-CSF和rhIL-4联合诱导的CD14^(+)/PBMC,细胞胞体变大,伸出半圆形、梭形、星形等毛刺状突起,形态不规则,表现为iDCs形态特征;rhTNF-α刺激iDCs后,细胞毛刺状突起明显增多,细胞贴壁能力增强,而A2780cis-外泌体与iDCs共培养组接受rhTNF-α刺激后,细胞毛刺状突起较少,细胞贴壁能力减弱。流式细胞术检测结果显示,rhTNF-α诱导前细胞CD86、CD40、HLA-DR、CD1a和CD83比例分别为(86.27±2.25)%、(67.43±0.64)%、(69.50±0.46)%、(68.20±0.46)%和(5.87±0.55)%,符合iDCs抗原表型特征;TNF-α诱导48 h后,CD86、CD40、HLA-DR、CD1a和CD83比例分别为(93.00±2.72)%、(72.67±0.50)%、(75.17±0.55)%、(74.87±0.21)%和(67.23±0.59)%,t值分别为3.300、11.100、13.700、22.940和132.200,CD86组P=0.030,其他组均为P<0.001,符合成熟DCs分化特征。iDCs接受rhTNF-α刺激后CD83、HLA-DR和CD1a比例分别为(67.23±0.59)%、(75.17±0.55)%和(74.87±0.21)%,A2780cis-外泌体共刺激后分别为(37.07±0.15)%、(71.43±0.38)%和(70.30±0.90)%,t值分别为86.290,9.675和8.563,均P<0.001。结论卵巢癌细胞源性外泌体对体外培养的iDCs成熟具有抑制作用。

关键词：顺铂耐药卵巢癌细胞株外泌体体外培养树突状细胞流式细胞术

精子特异性锌指蛋白146条件性敲除小鼠的构建及鉴定

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宁夏医科大学学报 2020年第7期42卷 664-668,677页

作者：司胜斌程建华丁敬宾戈锐裴秀英赵薇宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室银川750004 宁夏医科大学研究生院银川750004

目的探讨构建精子特异性RNF146敲除小鼠及其鉴定方法。方法从NCBI网站上检索小鼠RNF146的基因序列,分析外显子与各剪接体的关系以及起始密码子和终止密码子所在区域,选择条件性基因敲除片段。构建基于Cre/Lox P系统的RNF146条件性敲除... 详细信息

目的探讨构建精子特异性RNF146敲除小鼠及其鉴定方法。方法从NCBI网站上检索小鼠RNF146的基因序列,分析外显子与各剪接体的关系以及起始密码子和终止密码子所在区域,选择条件性基因敲除片段。构建基于Cre/Lox P系统的RNF146条件性敲除杂合子(RNF146^(flox/+))小鼠(F1代)。取F1代RNF146^(flox/)+杂合子小鼠自交,PCR鉴定其后代基因型,挑选RNF146纯合子敲除(RNF146^(flox/flox))雌鼠与精子特异性Cre转基因雄鼠AQP2-Cre进行杂交。PCR检测其后代基因型,选取AQP2-Cre阳性的RNF146杂合子雄鼠(AQP2-Cre;RNF146^(flox/+))与RNF146纯合子(RNF146^(flox/flox))雌鼠回交后筛选AQP2-Cre阳性的RNF146纯合子小鼠(AQP2-Cre;RNF146^(flox/flox))即为精子特异性RNF146敲除小鼠。选取9~10周龄(体成熟)的精子特异性RNF146敲除小鼠,从附睾和输精管中分离精子,以AQP2-Cre;RNF146^(flox/+)小鼠为对照,Real-time PCR及Western blot分析精子中RNF146表达水平确认敲减效率。结果RNF146基因四号外显子被选为敲除区域来构建基于Cre/Lox P系统的条件性敲除小鼠。F1代杂合子(RNF146^(flox/+))小鼠自交后代中约1/4个体为RNF146^(flox/flox);AQP2-Cre转基因工具鼠与纯合子(RNF146^(flox/flox))雌鼠交配后代中具有AQP2-Cre;RNF146^(flox/+)基因型的小鼠约占1/2;AQP2-Cre;RNF146^(flox/+)雄鼠和RNF146^(flox/flox)雌鼠交配后代中近1/4为AQP2-Cre;RNF146^(flox/flox)小鼠。成年AQP2-Cre;RNF146^(flox/flox)小鼠精子中RNF146 m RNA(Real-time PCR)和蛋白表达水平(Western blot)分别降低77.3%(P<0.001)和89.2%(P<0.001)。结论成功构建精子特异性RNF146条件性敲除小鼠AQP2-Cre;RNF146^(flox/flox)。

关键词：锌指蛋白146 条件性敲除小鼠精子

锌指蛋白146下调对荧光素酶标记的胶质瘤细胞GL261-luc活性的影响

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宁夏医科大学学报 2021年第6期43卷 562-568页

作者：戈锐司胜斌宋江董育清赵薇王志军宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室银川750004 宁夏医科大学银川750004 宁夏医科大学总医院放射科银川750004

目的观察DNA损伤修复蛋白——锌指蛋白146(RNF146)下调对荧光素酶稳转胶质瘤细胞株GL261-luc活性的影响。方法通过干涉慢病毒感染的方法,下调荧光素酶稳转胶质瘤细胞株GL261-luc中RNF146的表达,经实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和... 详细信息

目的观察DNA损伤修复蛋白——锌指蛋白146(RNF146)下调对荧光素酶稳转胶质瘤细胞株GL261-luc活性的影响。方法通过干涉慢病毒感染的方法,下调荧光素酶稳转胶质瘤细胞株GL261-luc中RNF146的表达,经实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western blot检测GL261-luc细胞中RNF146的敲减效率。Western blot检测RNF146下调后GL261-luc细胞中荧光素酶蛋白的表达水平。比较第1代、第15代和第30代GL261-luc细胞中荧光素酶活性。结果RNF146干涉慢病毒感染能够下调GL261-luc细胞中RNF146基因表达约为85.7%(P0.05)。结论用慢病毒感染下调GL261-luc细胞RNF146表达,不影响荧光素酶的表达、活性及稳定性,能够用于后续小动物体内成瘤后的活体成像研究。

关键词： GL261-luc细胞荧光素酶锌指蛋白146

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姜皮中三个新化合物的分离与鉴定

药学学报 2025年

作者：牛惠莹方鸿斌司盈盈郑玉忠王彦志河南中医药大学药学院韩山师范学院食品工程与生物技术学院广东省粤东药食资源功能物质与治未病研究重点实验室

运用MCI Gel CHP-20、Sephadex LH-20和ODS等柱色谱结合半制备高效液相色谱等方法，从姜皮正丁醇部位中分离得到3个新化合物。结合1D-NMR、2D-NMR、HR-ESI-MS、圆二色谱 (CD) 和计算CD (ECD) 等方法鉴定其结构分别为dendranthemoside C... 详细信息

运用MCI Gel CHP-20、Sephadex LH-20和ODS等柱色谱结合半制备高效液相色谱等方法，从姜皮正丁醇部位中分离得到3个新化合物。结合1D-NMR、2D-NMR、HR-ESI-MS、圆二色谱 (CD) 和计算CD (ECD) 等方法鉴定其结构分别为dendranthemoside C (1)、zingpyranoside E (2)、zingpyranoside F (3)。

关键词：姜皮化学成分倍半萜二苯庚烷苷分离鉴定

中医药调控TGF-β1/Smads通路治疗咳嗽变异性哮喘的研究进展

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世界中医药 2025年

作者：史梦迪王超刘璐佳司秀影杨阳谷胜男王有鹏黑龙江中医药大学黑龙江中医药大学附属第二医院长春市儿童医院

咳嗽变异性哮喘（CVA）是支气管哮喘的一种特殊类型,以咳嗽为主要临床表现。TGF-β1/Smads信号通路被证实可以调控气道高反应性、气道重塑与气道纤维化,参与CVA的发生和发展。中医药治疗CVA具有显著优势,其作用机制亦多涉及TGF-β1/Smad... 详细信息

咳嗽变异性哮喘（CVA）是支气管哮喘的一种特殊类型,以咳嗽为主要临床表现。TGF-β1/Smads信号通路被证实可以调控气道高反应性、气道重塑与气道纤维化,参与CVA的发生和发展。中医药治疗CVA具有显著优势,其作用机制亦多涉及TGF-β1/Smads信号通路,但内容分散、缺乏梳理。

关键词：中医药 TGF-β /Smads信号通路气道高反应性气道重塑气道纤维化咳嗽变异性哮喘研究进展

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核心素养的个性发展难题

西北师大学报(社会科学版) 2025年 66-74页

作者：高德胜华东师范大学课程与教学研究所

核心素养是当下教育的热点话题,但其所自带的个性发展难题并未受到重视。个性既是人的事实,也是价值追求,培养个性是教育的一项重要使命。从个性的视角去审视核心素养就可以发现,核心素养是关于人的“什么”(what),是对人的能力与品质... 详细信息

核心素养是当下教育的热点话题,但其所自带的个性发展难题并未受到重视。个性既是人的事实,也是价值追求,培养个性是教育的一项重要使命。从个性的视角去审视核心素养就可以发现,核心素养是关于人的“什么”(what),是对人的能力与品质的客观化描述,不能标识一个人是“谁”;核心素养对学生来说是一种“外在规定性”,它所理解的教育过程是“装配”过程。这些都是核心素养内含的个性发展难题,是很难得到辩护的。未来的探索,不是以核心素养为主导去培养个性,而是以个性发展为主导去统领和改进核心素养。

关键词：核心素养个性个性发展个性发展难题辩护