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脂肪间充质干细胞在动物模型中的应用进展

中国实验动物学报 2019年第6期27卷 810-814页

作者：杜珍珍徐郑美司琳清曹立明刘庆鲁文赓黑龙江八一农垦大学动物科技学院

干细胞被称为医学界的"万能细胞"。随着医学技术的发展,治疗疾病的方法也在日益更新。基于脂肪间充质干细胞具有获取方便,且体外易扩增,伦理学争议小等优点,越来越多的研究人员将目光聚焦在脂肪间充质干细胞上,因此脂肪间充质干细胞在... 详细信息

干细胞被称为医学界的"万能细胞"。随着医学技术的发展,治疗疾病的方法也在日益更新。基于脂肪间充质干细胞具有获取方便,且体外易扩增,伦理学争议小等优点,越来越多的研究人员将目光聚焦在脂肪间充质干细胞上,因此脂肪间充质干细胞在动物模型上的应用也越来越多。本文通过介绍较为典型小鼠疾病模型的临床应用,分析了脂肪间充质干细胞对疾病的治疗作用,得出脂肪间充质干细胞可以通过分泌细胞因子、多向分化,以及免疫调节来发挥多种类型疾病的治疗作用,以期为脂肪间充质干细胞的临床研究与应用提供参考。

关键词：脂肪间充质干细胞小鼠疾病模型应用治疗

温中除湿祛衣汤对寒冷地区冬季奶牛胎衣不下的疗效

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黑龙江畜牧兽医 2020年第10期 116-120,154页

作者：范钊曹立明刘庆杜珍珍司琳清孙宏亮鲁文赓黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为了了解温中除湿祛衣汤对寒冷地区胎衣不下奶牛的疗效,试验通过小鼠最大给药量试验及子宫收缩试验(小鼠离体子宫收缩试验与小鼠在体子宫收缩试验)对该方剂的安全性进行验证,对给药后小鼠的体重、脏器系数、血液生化指标、组织的病理变... 详细信息

为了了解温中除湿祛衣汤对寒冷地区胎衣不下奶牛的疗效,试验通过小鼠最大给药量试验及子宫收缩试验(小鼠离体子宫收缩试验与小鼠在体子宫收缩试验)对该方剂的安全性进行验证,对给药后小鼠的体重、脏器系数、血液生化指标、组织的病理变化进行检测,根据结果确定最优的给药浓度,而后对胎衣不下奶牛进行临床治疗效果验证。结果表明:在本方剂最大给药量条件下,试验组小鼠的体重、脏器系数及各项血液生化指标均与对照组无显著差异(P>0.05),且试验组和对照组小鼠的各脏器组织均未见明显的病理变化;在子宫收缩试验中,本方剂可增强小鼠离体子宫收缩频率(P0.05),且温中除湿祛衣汤的最优浓度为0.078 g/mL;小鼠在体子宫收缩强度和收缩频率从给药后1~8 h逐渐增大,给药后第8小时最大,随后下降。在奶牛临床试验中,口服温中除湿祛衣汤奶牛与对照奶牛的胎衣排出情况有着明显差异,其中口服温中除湿祛衣汤奶牛在服药后胎衣平均排出时间为14.9 h,经产奶牛的治愈率为60.0%,初产奶牛治愈率为14.1%,总治愈率为33.3%。说明温中除湿祛衣汤对寒冷地区冬季奶牛胎衣不下具有良好的治疗效果。

关键词：寒湿邪气奶牛胎衣不下温中除湿祛衣汤子宫收缩试验最大给药量试验

酒炙车前子提取物对LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症的影响

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兽医导刊 2021年第6期 223-224页

作者：赵福江司琳清王玥杜洪峰杜珍珍袁思琦原冬伟鲁文赓黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163000

本试验旨在探讨酒炙车前子提取物对LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症反应的影响。本研究通过在LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症模型中添加不同浓度的酒炙车前子提取物,利用MTT法和荧光定量PCR检测其细胞毒性作用和炎性因子的表达... 详细信息

本试验旨在探讨酒炙车前子提取物对LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症反应的影响。本研究通过在LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症模型中添加不同浓度的酒炙车前子提取物,利用MTT法和荧光定量PCR检测其细胞毒性作用和炎性因子的表达水平。结果显示酒炙车前子提取物对奶牛子宫内膜上皮细胞无毒性作用,在酒炙车前子提取物浓度为150μg/ml时,炎症模型中的炎性因子IL-6、TNF-α、IL-1β的表达水平显著降低。试验表明酒炙车前子提取物可以显著抑制LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎症反应。

关键词：酒炙车前子提取物奶牛 LPS 炎症

酒炙车前子防治奶牛胎衣不下中有效物质分离体系的确定

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中国兽医学报 2019年第1期39卷 126-130页

作者：鲁文赓邵立宇徐郑美许美花曹立明刘庆杜珍珍司琳清李婧申贵男黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 黑龙江八一农垦大学图书馆与信息中心黑龙江大庆163319 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163319

酒炙车前子防治奶牛胎衣不下是验方,本实验室验证酒炙车前子在防治奶牛胎衣不下方面有着显著的疗效,并确定了有效部位。但其防治奶牛胎衣不下的有效物质基础尚不明确。因此本试验目的是确定一个能够将其有效部位中所包括的化合物按照极... 详细信息

酒炙车前子防治奶牛胎衣不下是验方,本实验室验证酒炙车前子在防治奶牛胎衣不下方面有着显著的疗效,并确定了有效部位。但其防治奶牛胎衣不下的有效物质基础尚不明确。因此本试验目的是确定一个能够将其有效部位中所包括的化合物按照极性由低到高分离成三部分的体系。通过预实验确定了分离二氯甲烷部位和乙酸乙酯部位的洗脱剂和展开剂体系。使用相同内径的层析柱,其中硅胶的高度设置成3个梯度:15,25,35cm,使用洗脱剂进行梯度洗脱后,利用薄层色谱法进行检测,由色谱图观察化合物是否能成功分离成三部分。二氯甲烷部位和乙酸乙酯部位的结果显示,柱高15cm条件下无法有效地分离化合物,柱高25cm条件下化合物回收比例要高于柱高35cm条件下的化合物回收比例。因此确定了二氯甲烷部位分离化合物的洗脱剂体系:石油醚∶乙酸乙酯为1∶2;石油醚∶乙酸乙酯为1∶30;二氯甲烷∶甲醇为30∶1;展开剂体系:石油醚∶乙酸乙酯为4∶1;柱体高度为25cm。乙酸乙酯部位分离化合物的洗脱剂体系:石油醚∶乙酸乙酯为100∶1;石油醚∶乙酸乙酯30∶1;二氯甲烷∶甲醇为30∶1;展开剂体系:石油醚∶乙酸乙酯为10∶1;柱体高度为25cm。采用干法上样,上样量应适当增加。该分离体系的确定对研究酒炙车前子中防治奶牛胎衣不下的有效物质基础提供了技术支撑,也为研制高效、安全、廉价的防治奶牛胎衣不下的中药制剂奠定了基础。

关键词：车前子奶牛胎衣不下分离体系

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中性粒细胞胞外捕获网防御机制的研究进展

现代畜牧兽医 2022年第4期 93-96页

作者：谢何昕鲁文赓司琳清袁思琦周继伟姚旭东黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

中性粒细胞作为先天免疫的吞噬细胞,在免疫防御中起核心作用。中性粒细胞胞外捕获网(NETs)的发现使中性粒细胞再次成为研究热点。NETs通过其内含的抗菌肽和诸多的酶系统进行捕获、抑制和杀灭病原微生物。NETs参与炎症和多种自身免疫调... 详细信息

中性粒细胞作为先天免疫的吞噬细胞,在免疫防御中起核心作用。中性粒细胞胞外捕获网(NETs)的发现使中性粒细胞再次成为研究热点。NETs通过其内含的抗菌肽和诸多的酶系统进行捕获、抑制和杀灭病原微生物。NETs参与炎症和多种自身免疫调节疾病的发生发展。文章就NETs的形成机制以及NETs的宿主防御作用展开综述,以期为相关研究及应用提供参考。

关键词：中性粒细胞防御机制中性粒细胞胞外捕获网

灌服酒炙车前子活性组分的胎衣不下奶牛血清代谢产物LC-MS/MS法分析

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黑龙江八一农垦大学学报 2023年第2期35卷 29-36,136页

作者：鲁文赓周继伟田春雨司琳清袁思琦谢何昕申贵男黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319 吉林省榆树市农业综合行政执法大队黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院

早期研究过程中发现活性组分Ⅲ和Ⅵ为治疗奶牛胎衣不下的有效物质,并已阐明其化学成分,但尚未鉴定活性组分在体内的代谢产物,因此研究旨在利用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)对活性组分Ⅲ和Ⅵ的血清样品进行分析。以ACQUITY UPLC HSS T3(2... 详细信息

早期研究过程中发现活性组分Ⅲ和Ⅵ为治疗奶牛胎衣不下的有效物质,并已阐明其化学成分,但尚未鉴定活性组分在体内的代谢产物,因此研究旨在利用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)对活性组分Ⅲ和Ⅵ的血清样品进行分析。以ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)为色谱柱条件,流动相以水(含0.05%甲酸)-乙腈进行梯度洗脱,采用ESI电喷雾离子源,正、负离子模式下收集活性组分Ⅲ和Ⅵ的血清样品的质谱数据,并根据碎片离子以及相对分子质量等信息与网络数据库以及相关参考文献进行比对。活性组分Ⅲ发现包括胺类、脂类在内的共24个化合物,活性组分Ⅵ包括酚类、烷类等共26个化合物,为研制高效、经济和便捷的防治奶牛胎衣不下的中药针剂提供了新方向。

关键词：酒炙车前子胎衣不下液相色谱-串联质谱代谢产物奶牛

基于LC-MS/MS分析酒炙车前子治疗奶牛胎衣不下活性组分的化学成分

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中国兽医学报 2020年第8期40卷 1590-1597页

作者：鲁文赓曹立明许美花罗英花原冬伟徐郑美刘庆杜珍珍司琳清金吉东付世新李婧申贵男黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 黑龙江八一农垦大学图书馆黑龙江大庆163319 科菲特饲料(长春)有限公司吉林长春130062 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163319

采用液相串联质谱法(LC-MS/MS)对酒炙车前子治疗奶牛胎衣不下活性组分Ⅲ和Ⅵ的化学成分进行分析和鉴定。以Hyper gold C18(100.0 mm×2.1 mm,1.9μm)为色谱柱,水(含0.1%甲酸,5%乙腈)-乙腈(含0.1%甲酸)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL... 详细信息

采用液相串联质谱法(LC-MS/MS)对酒炙车前子治疗奶牛胎衣不下活性组分Ⅲ和Ⅵ的化学成分进行分析和鉴定。以Hyper gold C18(100.0 mm×2.1 mm,1.9μm)为色谱柱,水(含0.1%甲酸,5%乙腈)-乙腈(含0.1%甲酸)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为40℃;采用ESI离子源,正、负离子模式下采集活性组分Ⅲ和Ⅵ的一级和二级质谱数据。根据碎片离子与精确相对分子质量信息同Metlin、HMDB、MassBank、PubChem数据库比对,活性组分Ⅲ在正、负离子模式下共鉴定31个化合物,主要包括胺类、酰胺类、有机酸、生物碱、苯甲酸盐等化合物;而活性组分Ⅵ在正、负离子模式下鉴定34个化合物,主要包括有机酸、酰胺类、酚类、生物碱、苯甲酸盐等化合物。本试验结果为研制高效、安全和廉价的防治奶牛胎衣不下的中药制剂奠定基础。

关键词：车前子 LC-MS/MS 胎衣不下奶牛

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两种奶牛真皮成纤维细胞分离培养方法的比较

黑龙江八一农垦大学学报 2023年第1期35卷 41-45页

作者：鲁文赓袁思琦司琳清田春雨谢何昕周继伟金吉东黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319 吉林省榆树市农业综合行政执法大队科菲特饲料(长春)有限公司

为了比较两种体外分离和培养奶牛真皮成纤维细胞方法,采集奶牛蹄部真皮组织,通过组织块贴壁法和双酶消化法(胰蛋白酶-Ⅰ型胶原酶)分离原代奶牛真皮成纤维细胞,通过传代培养进一步纯化并扩增。利用显微镜观察细胞形态及生长特性,MTT法用... 详细信息

为了比较两种体外分离和培养奶牛真皮成纤维细胞方法,采集奶牛蹄部真皮组织,通过组织块贴壁法和双酶消化法(胰蛋白酶-Ⅰ型胶原酶)分离原代奶牛真皮成纤维细胞,通过传代培养进一步纯化并扩增。利用显微镜观察细胞形态及生长特性,MTT法用于绘制细胞生长曲线,利用细胞免疫荧光技术检测其表面标志物,鉴定细胞纯度。倒置显微镜下观察,贴壁后第6天有细胞爬出,形态多呈长梭形,排列紧密呈漩涡状或束状;双酶消化组第2天有长梭形细胞生长,混杂少量上皮细胞生长。生长曲线图表示,组织块贴壁组细胞生长速度较快。免疫化学荧光检测第四代奶牛真皮成纤维细胞,波形蛋白呈阳性表达,角蛋白-18呈阴性表达,表示细胞纯度较高。两种方法均能分离出奶牛真皮成纤维细胞,与双酶消化法相比,组织块贴壁法分离的细胞纯度更高,活性更佳,增殖周期更短,提示组织块贴壁法是分离培养奶牛真皮成纤维细胞的首选方法。

关键词：奶牛蹄叶炎真皮成纤维细胞组织块贴壁法双酶消化法

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脂肪间充质干细胞对奶牛蹄叶炎的疗效

畜牧与兽医 2020年第11期52卷 123-127页

作者：鲁文赓刘庆徐郑美原冬伟李维龙毛莹莹冯琳杜珍珍曹立明司琳清金吉东刘丽丽付世新韩英浩黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163319 科菲特饲料(长春)有限公司吉林长春130012 四川省水产学校四川成都401520

本试验对患蹄叶炎的奶牛通过蹄部注射牛脂肪间充质干细胞(bovine adipose-derived mesenchymal stem cells,bAD-MSCs)制剂进行疗效观察。将原代bAD-MSCs复苏传代并收集细胞与上清液,进行细胞超声破碎浓缩制作成bAD-MSCs制剂;利用小鼠和... 详细信息

本试验对患蹄叶炎的奶牛通过蹄部注射牛脂肪间充质干细胞(bovine adipose-derived mesenchymal stem cells,bAD-MSCs)制剂进行疗效观察。将原代bAD-MSCs复苏传代并收集细胞与上清液,进行细胞超声破碎浓缩制作成bAD-MSCs制剂;利用小鼠和家兔对bAD-MSCs制剂进行安全性试验,然后对奶牛进行临床治疗试验,通过监测奶牛的体温、呼吸数以及跛行评分变化等评价其临床疗效。bAd-MSCs制剂对小鼠体重与主要脏器无影响(P>0.05);家兔体温升高均低于0.6℃,并且3只家兔体温升高总和低于1.3℃。在奶牛在体试验中,治疗组与对照组相比,试验前后的呼吸数与体温变化无显著差异(P>0.05)。但在跛行程度上,给药6 h后治疗组奶牛的跛行程度开始变轻(表现出治疗效果),在注射后48 h奶牛的跛行评分在治疗组和对照组分别是3.25±0.25和4.5±0.29,治疗效果明显(P<0.05);而在注射后(14 d)奶牛的跛行评分在治疗组和对照组分别是1.75±0.25和4.75±0.25,其治疗效果表现出极显著差异(P<0.001)。结果表明:bAD-MSCs制剂是无毒性、无热原性和无刺激性的制剂,患病奶牛在注射该制剂后48 h显著地降低了跛行评分,对奶牛蹄叶炎具有较好的治疗效果。本试验为防治奶牛蹄叶炎提供了新的研究方向。

关键词：牛脂肪间充质干细胞蹄叶炎跛行评分奶牛