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海南槟榔黄化病病原物的分子鉴定

热带作物学报 2010年第1期31卷 83-87页

作者：车海彦吴翠婷符瑞益温衍生叶莎冰罗大全中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南儋州571737 海南大学环境与植物保护学院海南儋州571737

槟榔黄化病是槟榔上的一种重要病害,如何快速检测该病原菌是防治该病的重要基础。利用植原体16SrDNA通用引物对海南感染黄化病的槟榔花苞总DNA进行巢式PCR扩增,获得约1.2kb的特异片段,并对扩增产物进行核苷酸序列测定。通过BLAST程序比... 详细信息

槟榔黄化病是槟榔上的一种重要病害,如何快速检测该病原菌是防治该病的重要基础。利用植原体16SrDNA通用引物对海南感染黄化病的槟榔花苞总DNA进行巢式PCR扩增,获得约1.2kb的特异片段,并对扩增产物进行核苷酸序列测定。通过BLAST程序比较、系统进化树构建及iPhyClassifier分析表明,引起海南槟榔黄化病病原植原体属于翠菊黄化植原体组(16SrⅠ组),且为该组中一个新的亚组,即G亚组,现将其暂命名槟榔黄化植原体(Arecanut yellow leaf phytoplasma,AYL)。

关键词：槟榔黄化病植原体 16SrDNA 分子鉴定

海南长春花黄化病植原体的16S rDNA序列分析研究

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植物病理学报 2009年第2期39卷 212-216页

作者：车海彦罗大全符瑞益叶莎冰吴云锋西北农林科技大学植物保护学院陕西省农业分子生物学重点实验室杨凌712100 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所儋州571737

Periwinkle(Catharanthus roseus) yellows is a common disease in Hainan. Periwinkle′s leaf tissue with symptoms was assayed for phytoplasma infection by using PCR assay employing phytoplasma universal 16S rRNA gene primers (Rl6mF2/Rl6mR1). A PCR product (about 1.4 kb) was amplified from periwinkle showed yellows. Nucleotide sequencing and phylogenetic tree analysis showed that the amplified 16S rDNA contained 1 432 nucleotides, the most homology was 98.1% with the members of elm yellows group (16S r Ⅴ) and clustered in the same clade, while it was under 96.1% with other phytoplasma groups. Our results suggested that the phytoplasma sample belonged to 16S rⅤgroup and was tentatively named as Hainan periwinkle yellows phytoplasma (PY-Hn). This is the first report of existence of 16S r Ⅴ group phytoplasma in naturally infected periwinkle.

关键词： rDNA序列分析植原体长春花黄化病多年生草本植物 16S aster 海南

海南苦楝丛枝病植原体核糖体蛋白基因片段序列分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2008年第12期36卷 83-87页

作者：车海彦刘先宝符瑞益叶莎冰罗大全中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南儋州571737

【目的】利用分子生物学方法分析采自海南儋州的苦楝丛枝病植原体核糖体蛋白(rp)基因,从亚组水平上确定苦楝丛枝病植原体的分类地位。【方法】利用植原体核糖体蛋白基因通用引物对rpF1/rpR1,应用PCR技术对苦楝丛枝病植原体的核糖体蛋白... 详细信息

【目的】利用分子生物学方法分析采自海南儋州的苦楝丛枝病植原体核糖体蛋白(rp)基因,从亚组水平上确定苦楝丛枝病植原体的分类地位。【方法】利用植原体核糖体蛋白基因通用引物对rpF1/rpR1,应用PCR技术对苦楝丛枝病植原体的核糖体蛋白基因进行扩增,对其核苷酸序列进行测定并分析。【结果】通过PCR扩增得到约1.2 kb的特异片段,测序结果表明该片段长1 240 bp,包括rps19基因的3′区域,rpl22和rps3基因的全部区域。进一步分析发现,该片段与苦楝丛枝病贵州株系(Chinaberry witches'-broom,CWB-GZh)的亲缘关系最近,核苷酸同源性达99.9%。基于核糖体蛋白基因核苷酸序列,构建了海南苦楝丛枝病植原体与其他18个已知分类地位植原体的系统分类树状图,结果表明,引起海南苦楝丛枝病的植原体与16SrⅠ-B亚组植原体越南苦楝黄化、苦楝丛枝贵州株系和苦楝丛枝云南株系在同一条进化枝上。【结论】报道了海南苦楝丛枝病植原体的核糖体蛋白基因序列,海南苦楝丛枝病植原体属于16SrⅠ-B。

关键词：苦楝丛枝病植原体核糖体蛋白基因序列分析

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海南菜豆上粉虱传双生病毒的分子检测

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2007年第8期35卷 139-142页

作者：车海彦罗大全杨旭光符瑞益叶莎冰中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南儋州571737

为了解粉虱传双生病毒在海南的发生情况,从海南儋州采集了3个菜豆病样,症状表现为花叶、皱缩、叶背部叶脉突起,根据粉虱传双生病毒基因组DNA基因间隔区及外壳蛋白基因保守序列设计的简并引物,对这3个样品进行了PCR检测,从其中两个样品... 详细信息

为了解粉虱传双生病毒在海南的发生情况,从海南儋州采集了3个菜豆病样,症状表现为花叶、皱缩、叶背部叶脉突起,根据粉虱传双生病毒基因组DNA基因间隔区及外壳蛋白基因保守序列设计的简并引物,对这3个样品进行了PCR检测,从其中两个样品中扩增到预期大小为522 bp的DNA片段。PCR产物经克隆后进行序列测定,BLAST分析结果表明,该序列与与印度绿豆黄花叶病毒豇豆分离物(GenBank登录号:AF481865)的同源性最高,为65.9%,说明海南菜豆中存在着粉虱传双生病毒的侵染。

关键词：菜豆粉虱传双生病毒分子检测

苦楝丛枝病植原体海南株系SecY基因序列分析及亚组分类

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热带作物学报 2008年第6期29卷 799-802页

作者：罗大全车海彦刘先宝符瑞益叶莎冰中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南儋州571737 海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南儋州571737

利用植原体16S rⅠ组通用引物对secYF1/secYR1,应用PCR技术从采自海南省儋州地区的表现典型丛枝症状的苦楝植株总DNA中扩增到约1.4 kb的特异片段,将此片段克隆后进行序列测定,序列分析及系统关系树构建的结果表明,该片段长1 358 bp,苦... 详细信息

利用植原体16S rⅠ组通用引物对secYF1/secYR1,应用PCR技术从采自海南省儋州地区的表现典型丛枝症状的苦楝植株总DNA中扩增到约1.4 kb的特异片段,将此片段克隆后进行序列测定,序列分析及系统关系树构建的结果表明,该片段长1 358 bp,苦楝丛枝病海南株系(Chinaberry witches'-broom phytoplasma strain Hainan,CWB-Hn)与玉米丛矮(Maize bushy stunt,MBS)植原体聚类在同一条进化枝上;AluⅠ,MseⅠ和Tsp509Ⅰ这3种酶的电子酶切图谱表明,CWB-Hn与MBS的酶切图谱一致,故初步判定苦楝丛枝病植原体海南株系属于secY-L亚组,在亚组水平上进一步明确了苦楝丛枝病植原体海南株系的分类地位。

关键词：苦楝丛枝病植原体海南株系 secY 亚组分类

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橡胶树褐皮病综合防治技术的应用推广

橡胶树褐皮病综合防治技术的应用推广

中国热带作物学会2005年学术（青年学术）研讨会

作者：罗大全陈慕容叶莎冰符瑞益中国热带农业科学院环境与植物保护研究所中国热带农业科学院环境与植物保护研究所中国热带农业科学院环境与植物保护研究所中国热带农业科学院环境与植物保护研究所

来源： cnki会议评论

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海南苦楝丛枝病植原体的分子鉴定

热带作物学报 2008年第4期29卷 522-524页

作者：罗大全车海彦刘先宝符瑞益叶莎冰中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南儋州571737

利用植原体16S rDNA通用引物对Rl6mF2/Rl6mR1,通过PCR技术从表现典型丛枝症状的苦楝植株总DNA扩增到约1.4 kb的特异片段,将此片段克隆后进行序列测定、分析及系统关系树构建。结果表明,该片段与16Sr I组中的各植原体同源率均达到99%以上... 详细信息

利用植原体16S rDNA通用引物对Rl6mF2/Rl6mR1,通过PCR技术从表现典型丛枝症状的苦楝植株总DNA扩增到约1.4 kb的特异片段,将此片段克隆后进行序列测定、分析及系统关系树构建。结果表明,该片段与16Sr I组中的各植原体同源率均达到99%以上,其中与16Sr I中的白蜡树丛枝(Ash witches'-broom,AWB,AY566302),柳叶菜变叶(Epilobium phyllody,EP,AY101386)和苦楝丛枝江西株系(Chinaberry witches'-broom,CWB-JX,AY859543)的同源率最高,达到100%,而与其它组的植原体16S rDNA序列的同源率均低于97%。引起我国海南苦楝丛枝病的植原体应归属于16SrⅠ组,将其暂命名苦楝丛枝植原体海南株系。

关键词：苦楝丛枝病植原体 16S rDNA 序列分析

海南长春花小叶病植原体16S rDNA基因片段的比较分析

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热带作物学报 2008年第3期29卷 380-384页

作者：车海彦刘先宝符瑞益叶莎冰罗大全中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南省热带农业有害生物检测监控重点实验室海南儋州571737

从海南儋州地区的长春花上采集了表现小叶症状,疑似植原体感染的病样,利用植原体16S rDNA通用引物对Rl6mF2/Rl6mR1,应用PCR技术从该样品的总DNA提取物中扩增到预期大小的特异片段(约1.4kb),该片段的序列分析及系统关系树构建的结果表明... 详细信息

从海南儋州地区的长春花上采集了表现小叶症状,疑似植原体感染的病样,利用植原体16S rDNA通用引物对Rl6mF2/Rl6mR1,应用PCR技术从该样品的总DNA提取物中扩增到预期大小的特异片段(约1.4kb),该片段的序列分析及系统关系树构建的结果表明,该片段与16Sr I组中的植原体同源率均达到99%以上,而与其它组的植原体16S rDNA序列的同源率均低于96%,与16SrⅠ组植原体缬草黄化、翠菊黄化、桑萎缩和玉米丛矮等在同一条进化枝上。故初步认为引起海南长春花小叶病的植原体应归属于16Sr I组,将其暂命名为长春花小叶植原体海南株系(Periwinkle little leaf phytopla smastrain Hainan,PLL-Hn)。

关键词：长春花小叶病植原体 16S rDNA 序列分析

海南岛番木瓜和扶桑上粉虱传双生病毒的检测及序列分析

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中国病毒学 2005年第5期20卷 543-545页

作者：车海彦罗大全杨旭光符瑞益叶莎冰中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南儋州571737

Three virus-infected Carica papaya samples showing mosaic,leaf roll symptoms and three virus-infected Hibiscus rosa-sinensis samples showing chlorosis and distortion symptoms were collected in Danzhou of Hainan Province.A pair of degenerate primers was designed according to the conserved sequence of CP gene and intergenic spacer of Whitefly-transmittal geminiviruses(WTGV),PCR product of expected size was amplified from six *** specific fragments were cloned and sequenced,and sequence analysis showed that PCR product had a geminiviral gene origin,which was demonstrated by *** DNA-A between P1 and H2 shared only 66% nucleotide sequence *** analysis with DNA-A of P1 and H2 from other 16 WTG,P1 was most closely related to LAYVV,H2 differed from those of other geminiviruses and constitute a new evolutionary branch.

关键词：粉虱传双生病毒海南 PCR 序列分析