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温度和饥饿对布氏鲳鲹MSTN与MyoG基因表达的影响

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温度和饥饿对布氏鲳鲹MSTN与MyoG基因表达的影响

作者：叶恒振海南大学

学位级别：硕士

生物生长受到正、负调节系统的调控,肌肉生长调控中,肌细胞生成素和肌肉生成抑制素是重要的正负调控因子。为了研究布氏鲳鰺肌肉生长的模式,本研究首次在布氏鲳鰺中分离了 MSTN-1、MSTN-2与MyoG基因,比较分析了其系统进化关系,并通过qPC... 详细信息

生物生长受到正、负调节系统的调控,肌肉生长调控中,肌细胞生成素和肌肉生成抑制素是重要的正负调控因子。为了研究布氏鲳鰺肌肉生长的模式,本研究首次在布氏鲳鰺中分离了 MSTN-1、MSTN-2与MyoG基因,比较分析了其系统进化关系,并通过qPCR技术检测了 MSTN-1、MSTN-2与MyoG的组织分布水平,研究了在梯度饲养温度下三个基因在中脑和肌肉中的表达水平,并测定了在饥饿复投喂过程中三个基因在中脑和肌肉中的表达水平,取得以下实验结果:1.分离了布氏鲳鰺MSTN-1、MSTN-2和MyoG三个肌肉生长相关的功能基因,其中MSTN-1与MSTN-2 ORF长度分为1131 bp和1080 bp,分别编码376和359个氨基酸;MyoG ORF长度753bp,编码250个氨基酸。三个基因的结构与其他硬骨鱼类似。通过进化树比较,布氏鲳鰺MSTN-1和MSTN-2与银鲳亲缘同源性为94%,布氏鲳鰺MyoG与银鲳的亲缘同源性为96%。2.通过Real-time PCR显示,MSTN-1在布氏鲳鰺中的各个组织中均有表达,在肌肉和性腺中呈现高表达;MSTN-2在布氏鲳鰺的各个组织中均有表达,其中表达量最高的是脑部的5个组织,在中脑中的表达量高于其他组织;MyoG在布氏鲳鰺的各个组织中均有表达,其中在肌肉中呈现高表达。3.在温度实验中设置4个温度梯度（21℃,25℃,29℃,33℃）,MSTN-1在中脑中的表达规律表现为在低温时表达量高随着温度降低在29 ℃时表达量最低,MSTN-1mRNA表达水平上升,MSTN-1在肌肉中表达规律表现为在低温时表达量高随着温度升高降低在29 ℃时表达量最低,升温后,MSTN-1mRNA表达上升。MSTN-2在中脑中的表达规律则是在25 ℃和29 ℃表现出低表达,在21 ℃和33 ℃表现出高表达,在33℃时,MSTN-2在肌肉中表达水平最高,在21℃、25℃和29℃表现出低表达;在中脑和肌肉中,MyoG在25℃表达量最高,随着温度升高,MyoG表达水平逐渐降低,在33℃时表达量最低。4.在饥饿复投喂实验中,在中脑中,MSTN-1的表达量整个实验期间都没有明显变化,MSTN-2的表达量在饥饿开始后第四天显著降低直到饥饿结束,恢复投喂后迅速回到对照组水平,MyoG的表达量在饥饿降低,重新投喂后回到对照组水平。在肌肉中,MSTN-1在饥饿的第一天显著上升然后迅速回落到对照组水平,MyoG的表达量在饥饿后迅速升高,在饥饿的第七天MyoG表达水平降低,复投喂保持在对照组水平。MSTN-1的上调以及MyoG的下调会使肌肉生长受到抑制。

关键词：布氏鲳鲹肌细胞生成素肌肉生成抑制素温度饥饿复投喂

布氏鲳鲹超氧化物歧化酶基因的序列分析及组织分布

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基因组学与应用生物学 2021年第5期40卷 2020-2028页

作者：朱祎刘伊凡王怡叶恒振符丹凤骆剑海南大学海洋学院南海海洋资源利用国家重点实验室热带生物资源教育部重点实验室海口570228

超氧化物歧化酶(SOD)是通过歧化反应催化超氧化物转化为O_(2)和H_(2)O_(2)的酶,铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)和锰超氧化物歧化酶(MnSOD)是两种主要存在形式。本研究通过RACE法和RT-qPCR技术对布氏鲳鲹(Trachinotus blochii)的SOD-1、SO... 详细信息

超氧化物歧化酶(SOD)是通过歧化反应催化超氧化物转化为O_(2)和H_(2)O_(2)的酶,铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)和锰超氧化物歧化酶(MnSOD)是两种主要存在形式。本研究通过RACE法和RT-qPCR技术对布氏鲳鲹(Trachinotus blochii)的SOD-1、SOD-2进行基因克隆、序列分析和组织分布的研究。结果显示,布氏鲳鲹SOD-1(icCuZnSOD)基因的ORF长486 bp,编码161个氨基酸,分子量为16.676 kD,蛋白结构预测无信号肽,含有1个SOD-CU结构域。布氏鲳鲹SOD-2(mMnSOD)基因的ORF长657 bp,编码218个氨基酸,分子量为24.261 k D,蛋白结构预测无信号肽,含有1个SOD-FE蛋白结构域。氨基酸序列同源比对结果表明,布氏鲳鲹SOD-1有1段与其他鱼类显著差异的精氨酸-天冬酰胺-丝氨酸-丙氨酸-半胱氨酸-谷氨酰胺-异亮氨酸序列,且与鲈形目点带石斑鱼(Epinephelus coioides)、斜带石斑鱼(Epinephelus malabaricus)CuZnSOD同源性较高;SOD-2与鲈形目的红甘鲹(Seriola dumerili)MnSOD同源性较高且聚为一支。组织分布结果表明,SOD-1和SOD-2在布氏鲳鲹的心脏和肝脏中表达量最高,其次在脑和鳃表达量相对较高,表明SOD-1和SOD-2可能在免疫反应和维持新陈代谢方面有重要作用。本研究为今后布氏鲳鲹的抗逆、免疫的研究提供了研究依据。

关键词：布氏鲳鲹(Trachinotus blochii) 超氧化物歧化酶序列分析组织分布

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布氏鲳鲹VEGFA基因克隆与组织表达分析

基因组学与应用生物学 2020年第3期39卷 1020-1027页

作者：李岩强郭辰浩叶恒振朱凡王茜周智骆剑海南大学海洋学院南海海洋资源利用国家重点实验室热带生物资源教育部重点实验室海口570228

血管内皮生长因子A (vascular endothelial growth factor A, VEGFA)主要生理功能是增加小静脉血管与微血管的通透性,是血管生成过程最重要的正向调控因子。本研究采用RACE技术克隆布氏鲳鲹VEGFA基因和实时荧光定量PCR方法对该基因进行... 详细信息

血管内皮生长因子A (vascular endothelial growth factor A, VEGFA)主要生理功能是增加小静脉血管与微血管的通透性,是血管生成过程最重要的正向调控因子。本研究采用RACE技术克隆布氏鲳鲹VEGFA基因和实时荧光定量PCR方法对该基因进行组织分布表达分析。结果显示,该VEGFA基因cDNA序列全长1 470 bp,5’UTR、3’UTR长度分别为617 bp和208 bp,ORF为645 bp,共编码214个氨基酸,其中包括一个信号肽和两个N-糖基化位点。理论分子量为25.23 kD,等电点为8.91。同源性分析结果表明,布氏鲳鲹VEGFA基因与同属鲈形目鱼类高体鰤的同源性最高(96.1%)。荧光定量PCR分析显示,VEGFA在布氏鲳鲹组织中均有表达,其中肝脏表达水平最高,其次是心脏,在小脑、胃、肠表达较低,在肾脏组织中的表达量最低,说明布氏鲳鲹VEGFA基因在生理代谢以及血管生成过程中可能发挥重要调节作用。本研究结果为深入研究布氏鲳鲹VEGFA基因的生理代谢调控功能提供理论依据。

关键词：布氏鲳鲹 VEGFA 基因克隆组织表达

水相Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)对豹纹鳃棘鲈(Plectropomu leopardus)肝脏抗氧化指标影响

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水产学杂志 2023年第2期36卷 28-34,66页

作者：李钰叶恒振李争可许悦韦露郭志强海南大学生命科学学院南海海洋资源利用国家重点实验室海南海口570228

将体质量(16.5±2.1)g的豹纹鳃棘鲈(Plectropomus leopardus)幼鱼驯养在实验室0.8 m×0.6 m×0.6 m水族箱后,暴露于水相Cr(Ⅲ)(氯化铬CrCl_(3)·6H_(2)O,纯度≥99%)和Cr(Ⅵ)(重铬酸钾K_(2)Cr_(2)O_(7),纯度≥99.5%)14d和21 d,浓度分别为对照组、0.05 mg/L、0.1 mg/L和0.2 mg/L,测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)活性和谷胱甘肽(GSH)含量,采用半静态法研究了水相Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)对豹纹鳃棘鲈肝脏抗氧化指标的影响。结果显示,14 d时,Cr(Ⅲ)处理下,SOD和CAT活性显著低于对照组(P0.05);14 d和21 d时,POD活性和GSH含量都显著高于对照组(P<0.05),且随着Cr(Ⅲ)浓度的升高而升高。14 d和21 d时,Cr(Ⅵ)处理下,SOD和CAT活性被显著抑制(P<0.05),尤其是CAT活性随着处理浓度的升高而显著下降(P<0.05);14 d和21 d时,0.2 mg/L浓度下POD活性和GSH含量显著低于对照组(P<0.05)。Cr(Ⅲ)与Cr(Ⅵ)处理组相比,SOD、CAT、POD活性和GSH含量大多高于Cr(Ⅵ)处理下的活性,特别是在21 d时0.2 mg/L浓度组差异极显著(P<0.01)。结果表明,14 d时,0.05 mg/L、0.1 mg/L和0.2mg/L浓度暴露下Cr(Ⅲ)和Cr(Ⅵ)都会抑制肝脏抗氧化能力,但是,21 d时,0.05 mg/L、0.1 mg/L和0.2 mg/L浓度暴露下Cr(Ⅲ)增强了肝脏抗氧化能力,Cr(Ⅵ)仍为抑制作用且在较低的浓度下也会对豹纹鳃棘鲈幼鱼肝脏抗氧化能力产生一定程度的抑制影响,其毒性大于Cr(Ⅲ)。本研究结果可为准确评价不同价态水相铬对水生生物的毒性生理影响提供一定的理论基础。

关键词：三价铬六价铬豹纹鳃棘鲈幼鱼抗氧化酶活性肝脏

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布氏鲳鲹CCK基因的克隆及表达分析

基因组学与应用生物学 2019年第1期38卷 7-13页

作者：欧阳冬冬骆剑严耿杰叶恒振周智陈国华王茜海南大学南海海洋资源利用国家重点实验室热带生物资源教育部重点实验室海口570228

缩胆囊素(cholecystokinin, CCK)已被证实是生物体中一类能抑制食欲的重要的细胞因子,为进一步补充鱼类CCK基因相关的生物信息,本研究利用RACE技术和PCR方法对布氏鲳鲹(Trachinotus blochii)CCK基因进行了克隆和组织表达模式研究。结果... 详细信息

缩胆囊素(cholecystokinin, CCK)已被证实是生物体中一类能抑制食欲的重要的细胞因子,为进一步补充鱼类CCK基因相关的生物信息,本研究利用RACE技术和PCR方法对布氏鲳鲹(Trachinotus blochii)CCK基因进行了克隆和组织表达模式研究。结果表明:布氏鲳鲹CCK基因cDNA序列全长822 bp,5'端、3'端非翻译区(untranslated regions, UTR)长度分别为70 bp和340 bp,开放阅读框(open reading frame, ORF)412 bp,共编码137个氨基酸,其中包括一个信号肽和一个CCK-8肽。预测的蛋白分子量为14.79 kD,理论等电点是5.89。氨基酸序列同源性比对及系统进化树表明,布氏鲳鲹CCK基因与其与同属鲈形目的鰤鱼的同源性最高(91.9%),并且与其聚为一支。实时荧光定量PCR (real time-PCR, RT-PCR)分析显示CCK在布氏鲳鲹的端脑高表达,垂体、肌肉和下丘脑相对表达丰富,肾脏、脾脏、肠和脂肪中低表达,证实了CCK在布氏鲳鲹的神经和消化系统中可能具有重要的调节功能。本研究结果可为今后进一步探讨布氏鲳鲹CCK基因的摄食调控功能提供理论参考。

关键词：布氏鲳鲹缩胆囊素基因克隆表达分析

布氏鲳鲹GHRH基因克隆、组织和胚胎表达模式

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基因组学与应用生物学 2019年第5期38卷 1969-1976页

作者：朱凡王茜李岩强周智王海洋叶恒振骆剑陈国华海南大学热带生物资源教育部重点实验室南海海洋资源利用国家重点实验室

促生长激素释放激素(growth hormone releasing hormone, GHRH)主要生物学功能是刺激垂体细胞分泌生长激素,已被证实是动物体生长轴的重要调控因子之一,布氏鲳鲹是一种生长快速的海洋鱼类,为了揭示其代谢旺盛的调节机制,本研究从GHRH入... 详细信息

促生长激素释放激素(growth hormone releasing hormone, GHRH)主要生物学功能是刺激垂体细胞分泌生长激素,已被证实是动物体生长轴的重要调控因子之一,布氏鲳鲹是一种生长快速的海洋鱼类,为了揭示其代谢旺盛的调节机制,本研究从GHRH入手,利用RACE技术和qPCR方法对布氏鲳鲹GHRH基因进行了克隆、组织和胚胎表达模式研究。实验结果显示,布氏鲳鲹GHRH基因cDNA序列全长1019bp,5’UTR、3’UTR长度分别为327 bp和164 bp,开放阅读框528 bp,共编码175个氨基酸;同源性分析结果表明,布氏鲳鲹GHRH基因与其它鲈形目鱼类的同源性在91%以上。布氏鲳鲹GHRH基因的表达区域大多都集中在中枢系统,其中下丘脑表达量最高;GHRH在受精卵期到后续发育过程中均检测到表达,其表达水平在仔鱼期达到最高。序列分析、组织及胚胎表达的结果表明,布氏鲳鲹GHRH的调节模式仍然可能通过下丘脑调节垂体释放GH,GHRH在个体发育的较早阶段即开始发挥作用。本研究掌握了布氏鲳鲹GHRH基因的基本规律,为进一步研究生长轴的调控提供了理论参考。

关键词：布氏鲳鲹 GHRH基因基因克隆组织表达胚胎表达

禁食及进餐前后对布氏鲳鲹缩胆囊素表达的影响

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基因组学与应用生物学 2019年第8期38卷 3506-3510页

作者：叶恒振欧阳冬冬王海洋严耿杰王茜骆剑陈国华海南大学海洋学院南海海洋资源利用国家重点实验室热带生物资源教育部重点实验室

缩胆囊素(cholecystokinin, CCK)是生物体中抑制生物食欲的饱食信号因子,布氏鲳鲹属于摄食代谢十分旺盛的鱼类,揭示其CCK的表达规律能够进一步揭示鲳鲹的代谢机制。本研究开展了布氏鲳鲹禁食及餐前餐后养殖实验,并利用荧光定量PCR技术... 详细信息

缩胆囊素(cholecystokinin, CCK)是生物体中抑制生物食欲的饱食信号因子,布氏鲳鲹属于摄食代谢十分旺盛的鱼类,揭示其CCK的表达规律能够进一步揭示鲳鲹的代谢机制。本研究开展了布氏鲳鲹禁食及餐前餐后养殖实验,并利用荧光定量PCR技术对布氏鲳鲹的缩胆囊素的表达模式进行了分析。在餐前餐后实验中,结果表明布氏鲳鲹下丘脑中的CCK的表达量在餐后0 h迅速上升达到峰值,随后在餐后1 h、3 h逐渐下降,并在+3 h下降至对照组水平。在禁食实验中,下丘脑中CCK的表达量在禁食阶段逐渐降低并在第5天下降至显著低于对照组,复投喂后在第7天又上升到对照组水平并保持至第11天。布氏鲳鲹CCK的表达对于饱食的信号反馈非常迅速,CCK的高表达与鲳鲹食欲控制相关。本研究结果可以为进一步研究布氏鲳鲹CCK基因的功能及调控提供理论参考。

关键词：布氏鲳鲹(Trachinotus blochii) 缩胆囊素禁食进餐前后

不同温度对布氏鲳鯵幼鱼的生长及GHRHR基因表达影响

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不同温度对布氏鲳鯵幼鱼的生长及GHRHR基因表达影响

六价铬在斜带石斑鱼胚胎中的生物累积及其对igf2、glut2和pparg基因表达的影响

2017年中国水产学会学术年会

作者：朱凡叶恒振王海洋周智骆剑陈国华海南大学南海海洋资源利用国家重点实验室热带生物资源教育部重点实验室

温度对于鱼类来说是最重要的外界环境因素,在前期实验中发现,在温度差异条件下,布氏鲳鯵表现出生长差异,同时其GHRHR基因在多组织中呈现显著的差异。为研究不同温度对布氏鲳鯵生长的影响,本实验设计四个温度梯度,水温分别为21℃、25℃... 详细信息

温度对于鱼类来说是最重要的外界环境因素,在前期实验中发现,在温度差异条件下,布氏鲳鯵表现出生长差异,同时其GHRHR基因在多组织中呈现显著的差异。为研究不同温度对布氏鲳鯵生长的影响,本实验设计四个温度梯度,水温分别为21℃、25℃、29℃、33℃。实验结果表明,不同水温环境条件下的幼鱼有不同的生长速度,在21℃-33℃的范围内,随着温度升高,幼鱼特定生长率(SGR)随之升高,利用二次方程拟合SGR和温度的关系:SGR=(-0.019)T2+1.245T-15.51(P<0.05,R=0.997),计算得到SGR在32.76℃达到最大值;饵料系数(FC)随着温度升高而显著降低,利用二次方程拟合FC和温度的关系:FC=(0.004)T2-0.255T+5.046(P<0.05,R=0.999)计算得到FC在31.86℃达到最小值;摄食率(FR)随着温度的升高而升高,回归曲线表明在33.75℃达到最大值。采用荧光实时定量PCR检测了GHRHR转录本的组织分布及其在不同温度下的表达变化。布氏鲳鲹GHRHR基因的表达区域大多都在中枢神经系统,肝脏、肠和性腺也有表达,其中性腺表达量最高,其他组织中没有检测到GHRHR基因的表达。在不同温度下,GHRHR m RNA的表达受到了影响,低温组21℃和高温组33℃时GHRHR基因的表达量最低,在温度组29℃表达量最高(P<0.05)。温度影响着布氏鲳鯵幼鱼的生长和摄食,同样也影响GHRHR的表达变化。本实验为进一步研究GHRHR基因与鱼类的生长关系提供理论基础。

关键词：布氏鲳鲹生长 GHRHR 实时荧光定量PCR 组织表达

来源： cnki会议评论

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水生生物学报 2020年第6期44卷 1191-1198页

作者：周小芳张鹏飞曾会玲叶恒振冯浩李慧莹靳方方梁智策郭志强海南大学海洋学院南海海洋资源利用国家重点实验室海口570228 海南大学生命科学与药学院热带生物资源教育部重点实验室海口570228

以斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)为研究对象,探讨了水中不同浓度梯度六价铬(0、0.20、0.60、1、5、10、20、40、60和80 mg/L)在胚胎发育不同阶段(桑葚期、囊胚期、原肠末期、脑泡形成期和心脏跳动期)的生物累积及其对细胞生长基因i... 详细信息

以斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)为研究对象,探讨了水中不同浓度梯度六价铬(0、0.20、0.60、1、5、10、20、40、60和80 mg/L)在胚胎发育不同阶段(桑葚期、囊胚期、原肠末期、脑泡形成期和心脏跳动期)的生物累积及其对细胞生长基因igf2和营养代谢基因glut2、pparg的mRNA表达的影响。结果表明,胚胎中Cr6+生物累积量和吸收率随暴露浓度的增加而增加,且吸收率随胚胎发育时期的延伸而降低。在桑葚期时,斜带石斑鱼胚胎吸收Cr6+能力最强,是心脏跳动期的20倍。在桑葚期、囊胚期和原肠末期,Cr6+对胚胎中igf2和glut2基因mRNA表达水平有显著促进作用(P<0.05),但对pparg基因mRNA表达水平有显著抑制作用(P<0.05)。在原肠末期和脑泡形成期,Cr6+对胚胎中pparg基因mRNA表达水平有显著促进作用(P<0.05)。研究表明水中Cr6+暴露在斜带石斑鱼胚胎发育过程中有明显的生物累积,且对细胞生长水平和营养代谢有明显的影响,研究为斜带石斑鱼早期生活史阶段适宜生境和资源保护提供了理论基础。

关键词：六价铬生物累积斜带石斑鱼胚胎 igf2 glut2 pparg