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作者：史明超南京医科大学

学位级别：硕士

肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)是一种快速进展、可累及上、下运动神经元的严重致死性神经系统变性病。研究发现,10%ALS为家族性的ALS(familial ALS,fALS),其中约20%fALS发病与超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase1,SOD1)基因突变有关。在SOD1基因上存在两种同一氨基酸位点上的不同突变SOD1 G41S和G41D,而携带这两种突变的患者临床表现明显不同,SOD1G41S突变型fALS患者病程进展迅速,平均生存期约为11.6个月;而SOD1 G41D突变型患者病程进展较为缓慢,平均生存期约为17年。自1993年Rosen等人发现SOD1基因突变和ALS发病有关后,研究者对此种ALS致病机制进行了一系列研究,但至今尚不清楚。目前认为,氧化应激、错误折叠蛋白聚集、线粒体功能障碍、谷氨酸盐兴奋毒性、轴索运输损害、非神经元细胞作用等都参与ALS的致病过程。另外,临床研究发现,ALS患者可出现轴突的高兴奋性,表现为持续性的钠电流增加,患者呈现出肌痉挛和肌束震颤;而先前也有研究发现在ALSG93A模型鼠原代脊髓运动神经元、ALS患者诱导多能干细胞来源的运动神经元及G93A模型鼠离体脑片中的运动神经元都出现过度兴奋的现象。电压门控性钠通道(voltage-gatedsodium channel,VGSC)是神经元的兴奋和动作电位产生、传导的重要元件,因此该通道电生理特性如果改变也将会影响神经元的兴奋性,从而导致疾病的发生。先前研究报道ALS SOD1 G93A模型鼠在疾病早期神经元VGSC电流出现异常。但是目前未有研究对SOD1 G41S和G41D突变的VGSC电生理特性进行探究。因此,为进一步探究SOD1 G41S和G41D突变在ALS中的致病机制,将本研究分为两个部分,首先构建过表达野生型(widetype,WT)SOD1、SOD1 G41S及 G41D 重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)载体;用上述rAAV感染小鼠神经瘤母细胞(N2a)以构建ALS细胞模型,并观察N2a细胞过量表达此两种突变蛋白后,对神经元VGSC电生理特性和凋亡分子表达的影响。第一部分SOD1WT、SOD1 G41S和SOD1 G41D rAAV载体的构建及鉴定目的构建过表达SOD1 WT、SOD1 G41S及SOD1 G41D重组腺相关病毒载体。方法首先,利用PCR扩增各目的基因片段,应用EcoRI和HindⅢ内切酶对pMT121(pAAV-hSyn-bGlobinintron-EGFP-pA)表达载体进行酶切后,回收纯化线性化表达载体。进而在无缝反应液作用下,将各目的片段与回收后的线性化表达载体进行同源重组后转化DH5α感受态细胞。利用菌落PCR鉴定转化子,阳性克隆送测序,测序无误后进行质粒提抽。最后目的质粒与辅助质粒共转染HEK293细胞进行病毒包装,经纯化、浓缩、RT-PCR滴度测定后保存备用。结果PCR结果显示,在约765 bp、792 bp、521 bp、175 bp、367 bp可见特异性 RFP、GFP、SOD1WT、5’SOD1G41S/G41D、3’SOD1G41S/G41D 条带;应用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ内切酶对表达载体pMT121进行双酶切,回收4470 bp的线性化载体片段;菌落PCR转化子鉴定结果显示,SOD1WT重组质粒阳性克隆得到711bp片段、SOD1G415和SOD1G41D阳性克隆得到721bp片段;测序结果正确;72 h后获得3种SOD1 WT、SOD1 G41S和G41D rAAV颗粒,经浓缩、纯化、测定滴度分别为 2.43×1012 v.g./mL、2.28×1012 v.g./mL、2.52×1012 v.g./mL后,分装保存于-80℃备用。结论成功构建过表达SOD1 WT、SOD1 G41S及SOD1 G41D rAAV载体,病毒纯化、浓缩、滴度皆满足后续实验要求。第二部分SOD1WT、SOD1G41S和SOD1G41DrAAV载体在ALS细胞模型中的作用探究目的探究ALS SOD1上G41S和G41D两种突变型所致神经元VGSC电生理特性的差异及其可能的分子机制。方法构建过表达SOD1 WT、SOD1 G41S及G41D rAAV载体后,体外感染N2a细胞,将实验组分为3组:SOD1WT组、SOD1G41S和SOD1G41D组,并以无目的基因rAAV感染的N2a细胞为阴性对照(Control)组。利用全细胞膜片钳技术分别记录四组细胞VGSC电流,绘制通道快速激活和稳态失活曲线后分析相关参数。比较各组细胞凋亡分子Cleaved caspase-3在病

关键词：家族性肌萎缩侧索硬化超氧化物歧化酶1 重组腺相关病毒全细胞膜片钳技术电压门控性钠通道剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸特异性蛋白水解酶

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超氧化物歧化酶1突变基因G41S和G41D在小鼠内侧前额叶皮层过表达及对认知行为的影响

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中华行为医学与脑科学杂志 2020年第7期29卷 577-583页

作者：任曼丽史明超裘冯卓杨涛牛琦金庆文南京医科大学附属逸夫医院神经内科 211166 南京医科大学第一附属医院老年神经内科 210029

目的:探讨超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase1,SOD1)的两种突变类型G41S和G41D对小鼠认知行为的影响。方法:构建过表达人源性SOD1WT、SOD1G41S、SOD1G41D的重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)及不携带目的基因的空白病毒,立体定位注射到小鼠的双侧内侧前额叶皮层(medial prefrontal cortex,mPFC),根据注射病毒的不同,分为CONTROL组、SOD1WT组、SOD1G41S组及SOD1G41D组(均n=16)。1个月后,对小鼠进行旷场实验、Y迷宫自发交替实验、三箱社交实验、追踪条件恐惧实验,观察突变基因对小鼠认知行为的影响。结果:在旷场实验中,SOD1WT组[(39.67±6.04)m]的运动路程明显多于SOD1G41D组[(28.47±6.92)m,P=0.034];在Y迷宫自发交替实验中,SOD1WT组[(40.56±10.12)次,(32.63±8.19)次]及SOD1G41S组[(36.75±9.43)次,(29.06±8.32)次]的总进臂数和实际交替进臂数明显高于SOD1G41D组[(24.50±11.30)次,(18.38±9.09)次,均P0.05),SOD1WT组、SOD1G41S组表现为社交趋新障碍;在追踪条件恐惧实验的测试阶段,SOD1G41S组的僵直时间百分比明显高于其他实验组和CONTROL组(P<0.05)。结论:SOD1G41S和SOD1G41D对小鼠的认知行为产生了明显的改变,相同位点上的两种突变类型产生的认知行为改变存在明显差异。

关键词：超氧化物歧化酶1 基因突变内侧前额叶皮层认知障碍小鼠

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脑小血管病致血管性认知功能障碍患者血清UA、Hcy水平与MRI影像特征的相关性

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交通医学 2022年第4期36卷 418-421页

作者：应子璇史明超赵慧慧南通市通州区人民医院神经内科江苏226300 南京医科大学附属逸夫医院神经内科南京医科大学第一附属医院老年科

目的:分析脑小血管病(CSVD)致血管性认知功能障碍患者血清尿酸(UA)、同型半胱氨酸(Hcy)水平与磁共振成像(MRI)影像特征的关系。方法:回顾性分析97例CSVD患者资料,其中72例有血管性认知功能障碍为观察组,25例无血管性认知功能障碍为对照... 详细信息

目的:分析脑小血管病(CSVD)致血管性认知功能障碍患者血清尿酸(UA)、同型半胱氨酸(Hcy)水平与磁共振成像(MRI)影像特征的关系。方法:回顾性分析97例CSVD患者资料,其中72例有血管性认知功能障碍为观察组,25例无血管性认知功能障碍为对照组。所有患者于入院第二天早晨测定血清UA、Hcy水平,分析血清UA、Hcy水平与MRI影像特征的关系。结果:观察组血清Hcy、UA水平分别为18.63±3.16μmol/L和421.30±29.11μmol/L,高于对照组的13.25±2.21μmol/L和366.92±23.05μmol/L,差异均有统计学意义(P0.05)。受试者工作特征曲线(ROC)显示,血清UA、Hcy水平单独及联合鉴别诊断CSVD不同影像特征的曲线下面积(AUC)均>0.70,有一定的鉴别诊断价值,且以联合鉴别诊断的价值最佳。结论:血清UA、Hcy水平与脑小血管病致血管性认知功能障碍患者不同影像学特征有一定联系,有助于鉴别不同类型脑小血管病。

关键词：脑小血管病血管性认知功能障碍尿酸同型半胱氨酸磁共振成像影像特征

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过表达多巴胺脱羧酶、酪氨酸羟化酶和三磷酸鸟苷环化水解酶1重组慢病毒构建及其在帕金森病大鼠模型治疗作用的研究

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中国临床神经科学 2018年第2期26卷 133-144页

作者：赵慧慧史明超金庆文南京医科大学第一附属医院神经内科南京210029 南京医科大学附属逸夫医院神经内科南京211166

目的构建同时表达3种多巴胺(DA)合成相关酶的重组慢病毒(rLV),验证其在6-羟基多巴胺(6-OHDA)帕金森病(PD)大鼠模型中治疗作用,为PD临床基因治疗提供实验基础。方法构建过表达多巴胺脱羧酶(DDC)、酪氨酸羟化酶(TH)和三磷酸鸟苷环化水解酶... 详细信息

目的构建同时表达3种多巴胺(DA)合成相关酶的重组慢病毒(rLV),验证其在6-羟基多巴胺(6-OHDA)帕金森病(PD)大鼠模型中治疗作用,为PD临床基因治疗提供实验基础。方法构建过表达多巴胺脱羧酶(DDC)、酪氨酸羟化酶(TH)和三磷酸鸟苷环化水解酶1(GCH1)rLV及对照rLV。6-OHDA制备的PD模型大鼠,随机分为生理盐水组(n=6)、阴性病毒组(n=6)和阳性病毒组(n=12),分别经立体定向向大鼠纹状体注射生理盐水、对照rLV和DDC+TH+GCH1-rLV。观察构建病毒对PD大鼠旋转行为的影响,免疫荧光法检测病毒转染情况,同时使用高效液相色谱-串联质谱联用法(HPLC-MS/MS)检测纹状体内DA及其代谢产物改变情况。结果 PD大鼠纹状体注射后,阳性病毒组行为改变与生理盐水组、阴性病毒组比较,差异有显著统计学意义(P<0.01);阳性病毒组呈现显著的旋转行为改善。免疫荧光显示阳性病毒转染表达有TH活性的阳性细胞。阳性病毒组纹状体内DA及其代谢产物与生理盐水组、阴性病毒组比较,显著增高(P<0.01)。结论成功构建过表达DDC+TH+GCH1-rLV,并且在PD模型大鼠中呈现显著的行为改善及DA水平增加,为PD的基因治疗提供实验基础。

关键词：帕金森病多巴胺脱羧酶酪氨酸羟化酶三磷酸鸟苷环化水解酶1 重组慢病毒基因治疗高效液相色谱-串联质谱联用法

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过表达SOD_1 G41S和G41D的重组腺相关病毒载体构建及其在体外N2a细胞中的作用研究

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中国临床神经科学 2017年第2期25卷 125-134页

作者：史明超赵慧慧牛琦金庆文南京医科大学第一附属医院神经内科 210029 南京医科大学附属逸夫医院神经内科 211166

目的研究家族性肌萎缩侧索硬化(fALS)超氧化物歧化酶1(SOD_1)上G41S和G41D两种突变型所致神经元电压门控性钠通道(Na_v)电生理特性的差异及其可能的分子机制。方法构建过表达SOD_1野生型(WT)、SOD_1G41S及SOD_1G41D重组腺相关病毒(rAAV... 详细信息

目的研究家族性肌萎缩侧索硬化(fALS)超氧化物歧化酶1(SOD_1)上G41S和G41D两种突变型所致神经元电压门控性钠通道(Na_v)电生理特性的差异及其可能的分子机制。方法构建过表达SOD_1野生型(WT)、SOD_1G41S及SOD_1G41D重组腺相关病毒(rAAV)载体后,体外感染小鼠神经瘤母细胞(N2a),并分为3个实验组:SOD_1WT组、SOD_1G41S和SOD_1G41D组,并以无目的基因rAAV感染的N2a细胞为阴性对照组。利用全细胞膜片钳技术分别记录4组细胞Na_v电流,绘制通道快速激活和稳态失活曲线后分析相关参数。比较各组细胞凋亡分子cleaved caspase-3在感染后24、48和72 h不同时间点的表达情况。结果与对照组和SOD_1WT组比较,感染过表达SOD_1G41S组、SOD_1G41D组rAAV的细胞峰值电流显著增加(P0.05);各组激活、失活曲线斜率差异无显著性(P>0.05)。虽然24和48h,SOD_1WT、SOD_1G41 S、SOD_1G41D组cleaved caspase-3表达量差异无显著性;但转染72 h后,SOD_1G41S组和SOD_1G41D组cleaved caspase-3表达量高于SOD1WT组,且SOD_1G41S组高于SOD_1G41D组。结论SOD_1G41S和SOD_1G41D突变通过加快Na_v快速激活和抑制失活过程提高神经元活性,SOD_1G41S突变Na_v活性显著高于SOD_1G41D。SOD_1G41S突变导致cleaved caspase-3表达水平高于SOD_1G41D突变。

关键词：家族性肌萎缩侧索硬化超氧化物歧化酶1 重组腺相关病毒全细胞膜片钳技术电压门控性钠通道剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸特异性蛋白水解酶

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自体外周单核细胞治疗肌萎缩侧索硬化疗效及外周淋巴细胞变化观察

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南京医科大学学报（自然科学版） 2023年第5期43卷 701-707页

作者：赵舒怡裘冯卓史明超康悦杨涛许迅李军荣李圣华李冠宇金庆文南京医科大学附属逸夫医院神经内科江苏南京211166 宁波市杭州湾医院神经内科浙江宁波315336 南京医科大学附属江宁医院神经内科江苏南京211100 南京中医药大学附属南京医院神经内科江苏南京210003

目的:探讨体外扩增的自体外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)对肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)患者的治疗作用,以及外周血淋巴细胞亚群分类与症状改善之间的关系。方法:收集2019年10月—2021... 详细信息

目的:探讨体外扩增的自体外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)对肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)患者的治疗作用,以及外周血淋巴细胞亚群分类与症状改善之间的关系。方法:收集2019年10月—2021年8月南京医科大学附属逸夫医院神经内科和南京中医药大学附属南京医院神经内科符合标准的ALS患者65例,通过随机表号码法将患者随机分为PBMC组(PBMC 1×10^(6)个/kg体重^(+)20%人体白蛋白100 m L,33例)和对照组(20%人体白蛋白100 mL,32例)。分别于治疗前、治疗后第5天及第14天,以修订版ALS功能评定量表(revised ALS functional rating scale,ALSFRS-R)评分,并测定外周血CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞及CD16^(+)CD56^(+)NK细胞数目。结果:(1)PBMC组ALSFRS-R评分于治疗后第5天[(30.1±3.4)分]、第14天[(26.5±2.0)分]均较治疗前[(25.3±1.4)分]升高,差异有统计学意义(P0.05);(2)PBMC组治疗后第5天、第14天CD8^(+)T细胞、CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞均增高,与对照组、PBMC治疗前比较,差异均有统计学意义(P0.05)。对照组治疗前后上述细胞变化均无统计学意义(P>0.05);(3)患者在PBMC治疗后第5、14天时,CD8^(+)T细胞数量与ALSFRS-R分数呈负相关(P<0.05);CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞数量与ALSFRS-R分数呈正相关(P<0.05)。结论:体外扩增的自体PBMC回输治疗可以短期改善ALS患者的临床症状,且外周血CD8^(+)T细胞和CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞数的变化与疾病临床进展有关系。

关键词：肌萎缩侧索硬化淋巴细胞亚群外周血单核细胞修订版肌萎缩侧索硬化功能评定量表免疫

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不同神经功能缺损程度急性脑梗死患者Th17/Treg比值、CXCL9、CXCL12、CXCL16的变化及对短期预后的影响

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现代生物医学进展 2022年第16期22卷 3158-3162页

作者：杨涛赵舒怡康悦许迅史明超金庆文南京医科大学附属逸夫医院神经内科江苏南京211166

目的:探讨不同神经功能缺损程度急性脑梗死(ACI)患者辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)比值、趋化因子(CXCL)9、CXCL12、CXCL16的变化及对短期预后的影响。方法:选取2020年4月20日至2021年1月10日期间我院收治的ACI患者96例作为研... 详细信息

目的:探讨不同神经功能缺损程度急性脑梗死(ACI)患者辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)比值、趋化因子(CXCL)9、CXCL12、CXCL16的变化及对短期预后的影响。方法:选取2020年4月20日至2021年1月10日期间我院收治的ACI患者96例作为研究对象,根据入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将患者分为重度组(25例)、中度组(32例)和轻度组(39例)。根据改良Rankin量表(mRS)评分分为预后不良组(31例)和预后良好组(65例)。对比轻度组、中度组和重度组的外周血Th17/Treg比值、血清CXCL9、CXCL12、CXCL16水平;对比预后良好组和预后不良组的外周血Th17/Treg比值、血清CXCL9、CXCL12、CXCL16水平;采用单因素和多因素Logistic回归分析ACI患者预后不良的影响因素。结果:重度组、中度组的外周血Th17/Treg比值、血清CXCL9、CXCL12、CXCL16水平高于轻度组,且重度组高于中度组(P0.05)。而与糖尿病史、高血压史、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、颈动脉内膜中层厚度(IMT)、NIHSS评分有关(P<0.05)。糖尿病史、高血压史、LDL-C偏高、颈动脉IMT偏厚、NIHSS评分偏高是ACI患者预后的危险因素,而外周血Th17/Treg比值及血清CXCL9、CXCL12、CXCL16水平下降是ACI患者预后的保护因素(P<0.05)。结论:外周血Th17/Treg比值、CXCL9、CXCL12、CXCL16随着ACI病情进展呈升高现象,是影响ACI患者预后的重要影响因素,除此之外,糖尿病史、高血压史、LDL-C偏高、颈动脉IMT偏厚、NIHSS评分偏高也是预后不良的危险因素。

关键词：神经功能缺损程度急性脑梗死 Th17/Treg比值 CXCL9 CXCL12 CXCL16 预后

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紧扣文本学习写作

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文理导航·教育研究与实践 2013年第9期 36-36页

作者：史明超河南省南阳市南召县城关第三小学

水道曲折，操舟者迷，立岸者清。---题记　　观二三年级老师做课，我发现一个奇特的现象：语文老师都抓住常用句式进行课堂写作拓展训练。

关键词：文本学习语文老师拓展训练课堂写作常用句式题记水道曲折

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ALSFRS-R量表与AALS量表在评估肌萎缩侧索硬化不同治疗中的价值比较

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中国临床神经科学 2023年第3期31卷 293-299页

作者：康悦裘冯卓史明超赵舒怡杨涛许迅余艳华李军荣金庆文南京医科大学附属逸夫医院神经内科南京211166 宁波市杭州湾医院神经内科宁波315336 常州市第二人民医院神经内科常州213000 南京医科大学附属江宁医院南京211100

目的比较修订版肌萎缩侧索硬化功能评分量表(ALSFRS-R)和Appel肌萎缩侧索硬化评定量表(AALS)在肌萎缩侧索硬化(ALS)临床治疗中的应用价值差异。方法回顾性分析94例ALS患者,依据不同治疗方案分为:利鲁唑组(31例)、依达拉奉组(32例)和对照... 详细信息

目的比较修订版肌萎缩侧索硬化功能评分量表(ALSFRS-R)和Appel肌萎缩侧索硬化评定量表(AALS)在肌萎缩侧索硬化(ALS)临床治疗中的应用价值差异。方法回顾性分析94例ALS患者,依据不同治疗方案分为:利鲁唑组(31例)、依达拉奉组(32例)和对照组(未进行正规治疗的患者,31例)。收集患者的人口统计学及临床功能量表评分等资料。比较3组间临床资料,分析在不同药物治疗中两种量表的评分差异以及相关性。结果采用标准化评分比较ALSFRS-R和AALS,结果提示基线两种量表评分呈显著负相关。ALS伦敦临床分期3期、4期患者中两种量表评分均呈显著负相关。利鲁唑组和依达拉奉组中两种量表评分反映的疾病严重程度在部分时间点上差异有显著性;对照组差异无显著性。3组的各时间点ALSFRS-R评分均较低。结论ALSFRS-R与AALS在临床功能评估上差异有显著性,ALSFRS-R反映的疾病严重程度较轻。

关键词：肌萎缩侧索硬化修订版肌萎缩侧索硬化功能评分量表 Appel肌萎缩侧索硬化评定量表疗效判断

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数智赋能企业新质生产力的价值创造与溢出效应研究——基于中国制造业上市企业的实证检验

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山西师大学报(社会科学版) 2025年第1期52卷 20-33页

作者：惠宁史明聪西北大学经济管理学院

在新一轮科技革命和产业变革背景下，数智化将带来技术革命性突破，成为赋能新质生产力的重要引擎。文章以A股制造业上市企业为研究样本，与供应链网络数据进行匹配，考察数智赋能企业新质生产力的价值创造和价值溢出。结果表明：数智... 详细信息

在新一轮科技革命和产业变革背景下，数智化将带来技术革命性突破，成为赋能新质生产力的重要引擎。文章以A股制造业上市企业为研究样本，与供应链网络数据进行匹配，考察数智赋能企业新质生产力的价值创造和价值溢出。结果表明：数智化能够赋能制造业企业新质生产力，且对上下游企业存在价值溢出，在经过内生性与稳健性检验后依然成立。机制分析表明，数智化通过协同转型机制、资源配置机制和知识溢出机制赋能企业新质生产力的价值溢出。异质性分析表明，当目标企业为国有企业、上下游企业为非高科技企业和小规模企业、企业间地理距离较近时，数智赋能制造业企业新质生产力的价值溢出效应更强。因此，要加大数智资源投入，激发企业创新活力，推动制造业数智化转型；强化协同转型机制、资源配置机制和知识溢出机制，发挥数智化赋能效应；依据企业特征分类施策，有序推动制造业企业数智化转型。

关键词：数智赋能新质生产力价值创造价值溢出

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