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以LRS滤器获取白细胞作为研究用T细胞的可行性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第8期36卷 607-614页

作者：古彦铮汤龙海黄子逸李维洁张光波王明元苏州市中心血站 215006 苏州大学附属第一医院临床免疫研究所 215006

目的：分析单采血小板去白细胞（ leukoreduction system, LRS）滤器收集的白细胞替代常规全血人外周血白细胞的可行性,并对两个来源的T细胞进行了体外生物学和表型比较分析。方法本实验用同一志愿者LRS滤器中富集的白细胞和血液检测后... 详细信息

目的：分析单采血小板去白细胞（ leukoreduction system, LRS）滤器收集的白细胞替代常规全血人外周血白细胞的可行性,并对两个来源的T细胞进行了体外生物学和表型比较分析。方法本实验用同一志愿者LRS滤器中富集的白细胞和血液检测后剩余的全血经淋巴细胞分离液（ Ficoll）分离成单个核细胞,用流式细胞仪对细胞表型比较分析。同时经磁珠分选出CD3^＋T细胞,加入CD3、CD28激发型抗体与IL-2体外扩增培养10 d,并以细胞计数、流式细胞仪检测以及CBA细胞因子分泌测定等方法,对比LRS滤器血与全血分离出T细胞表型和生物学功能的差异。结果 LRS滤器血与全血分离出的细胞,初始状态表型相似度极高；LRS滤器血的CD3^＋T细胞分选率非常高,达到了实验要求。经扩增后的细胞的数量、表型、共刺激分子的表达、细胞因子分泌的数值都很相似,差异无统计学意义。结论本研究证实了LRS滤器血分离的T细胞在活力、表型和功能方面可以替代全血中的T细胞应用于基础实验研究,为解决临床用血和实验用血的矛盾提供了新途径。

关键词：单采血小板去白细胞滤器外周血 CD3^+ T细胞

丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对突发性耳聋患者临床疗效的影响

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中国中西医结合急救杂志 2017年第4期24卷 396-400页

作者：陈彧古彦铮邹嘉平宋俊无锡市中西医结合医院耳鼻喉科江苏无锡214000 苏州大学附属第一医院临床免疫研究所江苏苏州215006

目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠注射液治疗突发性耳聋（SD）的作用机制.方法选择2016年1月至12月无锡市中西医结合医院耳鼻喉科收治的60例SD患者,将患者按随机数字表法分为研究组和对照组,每组30例.两组均给予相同基础治疗,研究组在基础治... 详细信息

目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠注射液治疗突发性耳聋（SD）的作用机制.方法选择2016年1月至12月无锡市中西医结合医院耳鼻喉科收治的60例SD患者,将患者按随机数字表法分为研究组和对照组,每组30例.两组均给予相同基础治疗,研究组在基础治疗的同时加用丹参酮ⅡA磺酸钠注射液40 mg静脉滴注（静滴）,对照组给予长春西汀氯化钠注射液20 mg静滴,两组均每日1次,连用14 d为1个疗程,均治疗2个疗程.比较两组患者治疗前后听力阈值、血液流变学及免疫功能的差异,观察两组临床疗效和不良反应发生情况.结果两组治疗后听力阈值、血液流变学指标、免疫功能指标CD8＋均较治疗前明显降低,CD3＋、CD4＋、CD4＋/CD8＋比值均较治疗前明显升高,且治疗后上述指标的变化均以研究组较对照组更显著〔听力阈值（dB）：16.63±2.04比17.15±1.88,血浆黏度（PV,mPa·s）：1.27±0.14比1.31±0.11,全血中切黏度（mPa·s）：4.77±0.33比4.95±0.28,全血高切黏度（mPa·s）：3.86±0.25比4.00±0.31,红细胞聚集指数（EAI）：1.57±0.29比1.72±0.34,CD3＋：0.70±0.05比0.64±0.05,CD4＋：0.43±0.04比0.37±0.03,CD8＋：0.32±0.04比0.34±0.03,CD4＋/CD8＋：1.36±0.32比1.18±0.27〕;而全血低切黏度（mPa·s：6.72±0.80比7.01±1.13）和血细胞比容（HCT：0.38±0.04比0.40±0.03）则以对照组较研究组降低更显著.研究组总有效率高于对照组〔86.67%（26/30）比83.33%（25/30）〕,但两组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,研究组不良反应发生率明显低于对照组〔3.33%（1/30）比20.00%（6/30）,P〈0.05〕.结论丹参酮ⅡA磺酸钠注射液能有效提高SD患者的听力,改善其血液流变学指标及免疫功能,且其安全性及对SD患者免疫功能的改善效果优于长春西汀氯化钠注射液.

关键词：突发性耳聋丹参酮ⅡA磺酸钠注射液长春西汀氯化钠注射液听力血液流变学免疫功能

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干细胞的衰老学说

中国组织工程研究与临床康复 2008年第34期12卷 6731-6734页

作者：古彦铮强亦忠倪祥庭张学光苏州大学医学生物技术研究所免疫室江苏省干细胞研究重点实验室江苏省苏州市215006

文章从造血干细胞的自我更新和分化的过程中,阐明干细胞质和量的衰老,端粒缩减、氧化应激均加速干细胞的衰老,组蛋白的编码和转录子的激活可导致DNA或蛋白质的损伤。在干细胞衰老中,异染色质结构和基因转录的异常是干细胞衰老的重要调... 详细信息

文章从造血干细胞的自我更新和分化的过程中,阐明干细胞质和量的衰老,端粒缩减、氧化应激均加速干细胞的衰老,组蛋白的编码和转录子的激活可导致DNA或蛋白质的损伤。在干细胞衰老中,异染色质结构和基因转录的异常是干细胞衰老的重要调节机制。如果干细胞的衰老不是发生在基因水平上,那么则是发生在转录水平之中。因此在干细胞的造血中,众多的转录错误导致细胞周期衰老,是异染色质扩展的恶果。在正常的情况下,上述机制通常是不会发生的。如果仅仅是异染色质的错位,则不是干细胞基因表达的结果,在干细胞自我更新中充分证明,异染色质的改变导致了组蛋白的改变。

关键词：染色质衰老细胞记忆干细胞端粒

负性共刺激分子在胆囊癌中的表达及其临床意义

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临床与实验病理学杂志 2019年第11期35卷 1354-1357页

作者：金正宇古彦铮赵鑫张光波赵华张学光苏州大学附属第一医院普外科苏州215006 苏州大学附属独墅湖医院普外科苏州215123 苏州大学附属第一医院临床免疫研究所苏州215006

目的探讨负性共刺激分子B7-H1、B7-H3及B7-H4在胆囊癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测90例胆囊癌及20例癌旁组织中B7-H1、B7-H3及B7-H4的表达,分析三者表达与胆囊癌临床病理特征的关系及其相关性。结果(1)B7-H1、B7-H3及B... 详细信息

目的探讨负性共刺激分子B7-H1、B7-H3及B7-H4在胆囊癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测90例胆囊癌及20例癌旁组织中B7-H1、B7-H3及B7-H4的表达,分析三者表达与胆囊癌临床病理特征的关系及其相关性。结果(1)B7-H1、B7-H3及B7-H4在胆囊癌组织中的表达均高于癌旁组织(P均<0.01)。(2)B7-H1的表达与远处转移相关(P<0.05),B7-H3的表达与原发灶浸润深度(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)、临床分期(P<0.01)相关;B7-H4的表达与患者性别(P<0.05)、肿瘤大小(P<0.05)相关。(3)B7-H1与B7-H4、B7-H3与B7-H4在表达上呈正相关(P<0.05,r=0.235;P<0.01,r=0.315)。结论B7-H1、B7-H3及B7-H4在胆囊癌中表达增高,在肿瘤原位生长、侵袭和转移中发挥作用。

关键词：胆囊肿瘤负性共刺激分子 B7-H1 B7-H3 B7-H4 免疫组织化学

IL-33增强体外培养的外周血单个核细胞细胞因子的分泌以及杀伤功能

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第9期31卷 1246-1250页

作者：李晓晨吕全省夏瑞古彦铮高腾飞虞培娟张学光朱一蓓苏州大学医学部基础医学与生命科学学院江苏苏州215123

目的探讨白细胞介素33(IL-33)是否能在体外增强外周血单个核细胞(PBMC)分泌细胞因子和杀伤功能。方法常规分离培养健康人PBMC,分别经CD3单克隆抗体(m Ab)/CD28mAb/IL-2、CD3mAb/CD28mAb/IL-2/IL-12、CD3mAb/CD28m Ab/IL-2/IL-12/IL-33三种组合刺激培养72 h,收集细胞。经实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞γ干扰素(IFN-γ)、颗粒酶B(granzyme B)mRNA的水平;CCK-8法检测各组细胞对A549人肺腺癌细胞的杀伤活性;采用流式细胞术分析各组细胞IFN-γ、程序性死亡蛋白1(PD-1)的水平。结果各组因子组合刺激的PBMC,形态无明显差异;qRT-PCR检测发现,IL-33刺激组的PBMC中IFN-γ、granzyme B mRNA的水平升高;IL-33刺激组的PBMC对A549的杀伤能力更强;IL-33刺激组的PBMC中CD3+CD8+细胞亚群IFN-γ的水平升高、PD-1的水平降低。结论 IL-33能够在体外增强PBMC的效应功能。

关键词：白细胞介素33(IL-33) 外周血单个核细胞 γ干扰素肿瘤免疫

重症肌无力患者血清AchR抗体和Titin抗体检测的临床意义

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中国现代医学杂志 2009年第15期19卷 2329-2332页

作者：冉娟娟古彦铮薛群王达鹏方琪苏州大学附属第一医院神经内科江苏苏州215006 苏州大学生物技术研究所江苏苏州215007

目的探讨重症肌无力患者血清AchR抗体和Titin抗体检测的临床意义。方法应用ELISA法分别检测18例重症肌无力合并胸腺瘤患者、23例非胸腺瘤重症肌无力患者、21例其他神经系统疾病患者以及26例健康献血者血清AchR抗体和Titin抗体水平。结... 详细信息

目的探讨重症肌无力患者血清AchR抗体和Titin抗体检测的临床意义。方法应用ELISA法分别检测18例重症肌无力合并胸腺瘤患者、23例非胸腺瘤重症肌无力患者、21例其他神经系统疾病患者以及26例健康献血者血清AchR抗体和Titin抗体水平。结果MG组血清AchR抗体、Titin抗体的阳性率均明显高于OND及HC两组(P0.05)。结论AchR抗体及Titin抗体检测可作为MG诊断的参考指标,尤其Titin抗体对合并胸腺瘤患者可能具有重要临床意义,与胸腺CT联合运用可显著提高重症肌无力合并胸腺瘤的诊断率。

关键词：重症肌无力 AchR抗体 Titin抗体

人胎盘间充质干细胞成骨分化过程中免疫原性上调的研究

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现代免疫学 2013年第5期33卷 360-364页

作者：王贵超张慧韩兴龙古彦铮顾巧丽谢芳杨惠林施勤苏州大学附属第一医院骨科苏州215007

为探讨间充质干细胞在成骨分化过程中的免疫原性改变及其意义,利用酶消化法获得胎盘间充质干细胞(PMSC),经鉴定后诱导成骨,用流式细胞术检测细胞表面协同刺激分子的表达并与T细胞共培养,3 H-TdR掺入法检测T细胞的增殖。结果表明,PMSC成... 详细信息

为探讨间充质干细胞在成骨分化过程中的免疫原性改变及其意义,利用酶消化法获得胎盘间充质干细胞(PMSC),经鉴定后诱导成骨,用流式细胞术检测细胞表面协同刺激分子的表达并与T细胞共培养,3 H-TdR掺入法检测T细胞的增殖。结果表明,PMSC成功向成骨细胞分化,未分化的PMSC不表达CD28、CD80、CD83、CD86等正性共刺激分子,但经成骨诱导分化后其表达上调,并刺激了T细胞增殖,而未诱导分化的PMSC则未能促进。因此,未分化的PMSC具有低免疫原性,但是在经成骨诱导分化后其免疫原性上调,这对间充质干细胞今后在临床的应用有一定指导意义。

关键词：胎盘间充质干细胞成骨诱导协同刺激分子 T细胞增殖

CD40信号联合细胞因子体外制备过继免疫治疗细胞的初步研究

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CD40信号联合细胞因子体外制备过继免疫治疗细胞的初步研究

人胎盘源与人骨髓源间充质干细胞的生物学特性的比较及负性协同刺激分子PD-L1的表达

第十届全国免疫学学术大会

作者：古彦铮吉晓博沈宇张学光苏州大学附属第一医院临床免疫研究所

目的 :由于传统的过继免疫治疗存在一定的局限性,本实验试图寻找一种新的过继免疫治疗细胞体外培养的方法。方法 :分离正常人外周血中的单个核细胞(PBMCs),经过CD40激发型单抗5C11、CD3、并联合细胞因子IL-7、IL-2体外诱导并扩增。光镜... 详细信息

目的 :由于传统的过继免疫治疗存在一定的局限性,本实验试图寻找一种新的过继免疫治疗细胞体外培养的方法。方法 :分离正常人外周血中的单个核细胞(PBMCs),经过CD40激发型单抗5C11、CD3、并联合细胞因子IL-7、IL-2体外诱导并扩增。光镜下观察其细胞形态、用血细胞计数器计数,并进行动态分析。于第14天收集细胞,流式检测分析淋巴细胞亚群、NKT细胞和调节性T细胞(Treg),并与CD3激发组(CD3、IFN-γ、IL-2刺激)进行比较性分析。结果 :流式分析显示,实验组细胞增殖数量略低于CD3激发组细胞。CD3激发组中的Treg数量和比例远高于CD40激发组,且CD3+CD56+T细胞数低于CD40激发组,负性共刺激分子PD-1过高,CD40激发组中CD8+TCM细胞的比例高于CD3激发组,体外杀伤能力与传统CIK细胞无差异。结论 :本实验建立的新型过继免疫治疗细胞培养方法能显著提高具有肿瘤杀伤能力的NK-T细胞的比例,负性共刺激分子PD-1的表达下调,同时减少Treg的数量,可为肿瘤细胞过继免疫治疗提供新的方案。

关键词：过继免疫治疗细胞 CD40激发型单抗5C11 IL-7

来源： cnki会议评论

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中国免疫学杂志 2009年第5期25卷 387-391,401页

作者：古彦铮薛群王泳於葛华沈宇王明元张学光苏州大学医学生物技术研究所江苏省干细胞重点实验室苏州215007 苏州市红十字中心血站苏州215007

目的:比较人胎盘源间充质干细胞(PMSCs)与人骨髓源间充质干细胞(BMSCs)的生物学特性,研究负性协同刺激分子PD-L1在胎盘源MSCs的表达和生物学意义。方法:采取酶消化法分离人胎盘组织,用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,分别进行贴壁分... 详细信息

目的:比较人胎盘源间充质干细胞(PMSCs)与人骨髓源间充质干细胞(BMSCs)的生物学特性,研究负性协同刺激分子PD-L1在胎盘源MSCs的表达和生物学意义。方法:采取酶消化法分离人胎盘组织,用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,分别进行贴壁分离和传代培养,通过倒置相差显微镜观察细胞形态,并用免疫荧光标记和流式细胞仪检测细胞表面标志的表达做比较性分析。混合淋巴细胞反应,3H-TdR掺入和PD-L1单克隆抗体阻断实验进行免疫功能检测。结果:在贴壁生长、呈成纤维细胞样形态、表达CD29、CD105、CD166和不表达CD34、CD45、CD80、CD86及HLA-DR分子以及向成脂肪细胞方向诱导分化等方面,人PMSCs与BMSCs细胞生物学特性表现相同或相似。表型分析发现PMSCs高表达PD-L1,而BMSCs较低表达PD-L1。PMSCs表达的PD-L1具有对T细胞体外增殖的抑制作用。结论:人胎盘源MSCs与人骨髓源MSCs有相似的细胞生长特性,却有不同的表达负性协同分子PD-L1的特性。

关键词：间充质干细胞胎盘源间充质干细胞骨髓源间充质干细胞 PD-L1 生物学特性