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PB1-F2长度改变对H3N2犬流感病毒影响的研究

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中国预防兽医学报 2022年第3期44卷 243-249页

作者：原耀贤李舜何威李康健马春全李守军马骏佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528225 华南农业大学兽医学院广东广州510642 中国农业科学院上海兽医研究所上海201100 广州市微生物研究所有限公司广东广州510700

H3N2犬流感病毒(H3N2 CIV)是流感病毒在进化过程中新形成的一个分支,在我国多地的犬中广泛流行。PB1-F2蛋白是甲型流感病毒的毒力因子,并可能与流感病毒的跨宿主传播相关。为探究PB1-F2长度的改变对H3N2 CIV的影响,本研究分别构建了包含... 详细信息

H3N2犬流感病毒(H3N2 CIV)是流感病毒在进化过程中新形成的一个分支,在我国多地的犬中广泛流行。PB1-F2蛋白是甲型流感病毒的毒力因子,并可能与流感病毒的跨宿主传播相关。为探究PB1-F2长度的改变对H3N2 CIV的影响,本研究分别构建了包含H3N2 CIV各基因节段的重组质粒及携带M1R(PB1-F2的aa1由M突变为R)及S^(11)Stop(PB1-F2 aa11由S突变为终止氨基酸序列)突变的重组质粒pHW-PB1-F2-M1R和pHW-PB1-F2-S^(11)Stop,并均经测序鉴定。通过反向遗传操作技术,分别拯救了如下3株重组病毒:表达90个氨基酸PB1-F2的重组亲本病毒rH3N2;不表达PB1-F2的重组病毒rH3N2-M1R;仅表达11个氨基酸PB1-F2的重组病毒rH3N2-S^(11)Stop。将这3株重组病毒利用MDCK细胞传代后分别对其8个基因节段经PCR扩增及测序以鉴定其遗传稳定性。测序鉴定结果显示,3株重组病毒均正确构建,且不同代次之间各重组病毒的基因序列及各突变位点均相同,表明本研究构建的重组病毒具有较好的遗传稳定性。将表达PB1、PB1-F2-M1R及PB1-F2-S^(11)Stop的重组质粒分别与重组质粒PB2、PA和荧光素酶报告质粒pPolI-Luci-NP及海肾荧光素酶表达质粒共转染293T细胞,48 h后利用双荧光素酶检测试剂盒检测荧光素酶活性并比较3株重组病毒的聚合酶活性;测定3株重组病毒感染MDCK细胞后不同时间的TCID50以绘制病毒的生长曲线;将3株重组病毒均以106TCID50/50μL经鼻腔感染小鼠,分析各重组病毒对小鼠的致病性。用以评价PB1-F2长度改变对H3N2 CIV的影响。结果显示,rH3N2-S^(11)Stop的聚合酶活性与rH3N2相比无明显变化,而rH3N2-M1R的聚合酶活性则显著高于rH3N2(P<0.05);rH3N2-M1R和rH3N2-S^(11)Stop在MDCK细胞中的复制效率显著高于rH3N2(P<0.05),且rH3N2-M1R的复制效率要高于rH3N2-S^(11)Stop。小鼠的致病性试验结果显示,感染重组病毒后的小鼠表现被毛粗乱、精神不振、食欲减退等症状;3株重组病毒均对小鼠体质量有轻微影响,并对小鼠肺脏均造成了轻微病理损伤,但三者对小鼠体质量及肺脏的影响差别不明显。本实验结果首次证实,PB1-F2的不表达能够提高H3N2 CIV的转录效果,且PB1-F2长度的改变能够提高H3N2 CIV在细胞中的复制效率,但对病毒在小鼠中致病性的影响较小。本研究初步探究了PB1-F2长度的改变对H3N2 CIV的影响,为该病毒致病机制及其感染防控技术的研究与制定提供了参考依据。

关键词：犬流感病毒反向遗传定点突变 PB1-F2

PA-X基因的长度变化对H3N2犬流感病毒复制能力和致病性的影响

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畜牧兽医学报 2023年第1期54卷 272-280页

作者：李舜李桂珍原耀贤李康健马春全李守军黄良宗马骏佛山科学技术学院生命科学与工程学院佛山528225 广东科贸职业学院动物科技学院广州510430 华南农业大学兽医学院广州510642 佛科院附属动物医院佛山528225

H3N2犬流感病毒(canine influenza virus,CIV)已在中国多地的犬群中流行,是禽流感跨宿主感染并形成新分支的近期案例。研究表明,PA-X基因与甲型流感病毒适应新宿主的能力相关,且其长度能够影响甲型流感病毒的复制及致病能力。为了解PA-... 详细信息

H3N2犬流感病毒(canine influenza virus,CIV)已在中国多地的犬群中流行,是禽流感跨宿主感染并形成新分支的近期案例。研究表明,PA-X基因与甲型流感病毒适应新宿主的能力相关,且其长度能够影响甲型流感病毒的复制及致病能力。为了解PA-X基因的长度变化对H3N2 CIV复制能力及致病力的影响,本研究利用H3N2 CIV的8质粒操作系统,拯救了三株重组H3N2 CIV毒株:PA-X基因表达大小为232个氨基酸多肽的亲本病毒CIV_PA-X_232;对PA编码区第191、192位氨基酸的密码子进行改造,PA-X基因不表达蛋白的重组病毒CIV_PA-X_Knock;对PA+1编码区第232位氨基酸进行突变,PA-X基因表达大小为252个氨基酸多肽的重组病毒CIV_PA-X_252。通过比较3株重组病毒的聚合酶活性,在MDCK细胞中的复制效率及对小鼠致病性的差异,来评价表达不同长度的PA-X基因对H3N2 CIV的影响。结果显示,CIV_PA-X_252和CIV_PA-X_Knock的聚合酶活性显著(P<0.05)高于CIV_PA-X_232,且CIV_PA-X_252的聚合酶活性显著(P<0.05)高于CIV_PA-X_Knock;CIV_PA-X_252和CIV_PA-X_Knock在MDCK细胞中的复制能力显著(P<0.05)强于CIV_PA-X_232;小鼠攻毒试验结果显示,3株重组病毒对小鼠的体重变化无明显影响,且对小鼠无致死性;仅能在感染后第1天的小鼠肺中检测出3株重组病毒的TCID50,且病毒滴度无显著差异;3株重组病毒均能对小鼠肺造成病理损伤,其中,CIV_PA-X_252对小鼠的致病性最强,CIV_PA-X_232次之,CIV_PA-X_Knock对小鼠的致病性最弱。上述结果表明,PA-X基因的延长能够提高H3N2 CIV在MDCK细胞中复制能力和对小鼠肺造成病理损伤的能力,但该变化可能对H3N2 CIV在小鼠肺内的复制能力没有影响。本试验初步探究了PA-X基因的长度变化对H3N2 CIV的影响,为后续H3N2 CIV致病机制的研究提供了初步的参考。

关键词：犬流感 H3N2 反向遗传操作系统 PA-X 致病性

中日优秀乒乓球运动员樊振东与张本智和技战术的对比分析

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中日优秀乒乓球运动员樊振东与张本智和技战术的对比分析

作者：劳耀贤广西大学

学位级别：硕士

牛结节性皮肤病病毒GPCR基因荧光定量PCR检测方法的建立

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中国兽医学报 2021年第9期41卷 1729-1733页

作者：原耀贤孙铭澮黄伟楠李康健何威付强马春全刘全马骏佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528225 广东省揭阳市惠来县溪西畜牧兽医站广东揭阳515235 广州市微生物研究所有限公司广东广州510700

为了更好地进行牛结节性皮肤病的临床检测,根据GenBank登录的牛结节性皮肤病病毒(LSDV)的GPCR基因序列,设计并合成1对特异性引物,建立一种基于染料法的实时荧光定量PCR(qPCR)方法。本研究进一步对此检测方法进行了敏感性试验、特异性试... 详细信息

为了更好地进行牛结节性皮肤病的临床检测,根据GenBank登录的牛结节性皮肤病病毒(LSDV)的GPCR基因序列,设计并合成1对特异性引物,建立一种基于染料法的实时荧光定量PCR(qPCR)方法。本研究进一步对此检测方法进行了敏感性试验、特异性试验、重复性试验,随后用模拟临床样品进行了验证。结果显示,该方法至少可以检测出的病毒序列含量为7.11×102拷贝/μL;仅对LSDV有特异性扩增;批内重复和批间重复的Cq值变异系数均小于1.5%。模拟临床样品检测结果显示,建立的qPCR方法在临床采集的牛皮肤结节、肛拭子、泪拭子中,能特异性检测出LSDV的序列片段。结果表明,本研究建立的LSDV的qPCR检测方法敏感性高、特异性强、重复性好,能应用于临床诊断。

关键词：牛结节性皮肤病病毒染料法 GPCR基因实时荧光定量PCR

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致猪肌间多发性脓肿病原研究

致猪肌间多发性脓肿病原研究

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会

作者：赵贤杰谢宏林李康健张熙林梓华原耀贤郭健锋李国潮付强马春全佛山科学技术学院生命科学与工程学院

本研究于一来自某大型猪场眼观体征无异常的商品猪屠宰过程中发现其患肌间多发性脓肿,威胁食品卫生安全。选用合适得病灶把病原菌的进行分离,通过16srDNA鉴定及遗传进化树分析该病原种属,结果表明该病原为巴氏葡萄球菌;药敏试验结果显... 详细信息

本研究于一来自某大型猪场眼观体征无异常的商品猪屠宰过程中发现其患肌间多发性脓肿,威胁食品卫生安全。选用合适得病灶把病原菌的进行分离,通过16srDNA鉴定及遗传进化树分析该病原种属,结果表明该病原为巴氏葡萄球菌;药敏试验结果显示其对大部分常用抗生素表现为耐药;病理切片显示病灶存在大量炎症细胞浸润。本研究为猪多发性脓肿的诊治提供理论依据,并对提高规模化猪场的经济效益,确保食品卫生安全有一定的意义。

关键词：多发性脓肿葡萄球菌 16srDNA鉴定药敏试验病理切片

来源： cnki会议评论

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非均质环形谐振子结构性能分析方法

中国惯性技术学报 2024年第8期32卷 821-827页

作者：裴永乐徐亮黄伟高立民李录贤原晓斌中国科学院西安光学精密机械研究所西安710119 西安交通大学航天航空学院复杂服役环境重大装备结构强度与寿命全国重点实验室飞行器环境与控制陕西省重点实验室西安710049

传统环形谐振子结构特性分析方法是基于均质弹性力学理论的,无法准确描述非均质材料力学特性对环形谐振子结构静、动态性能的影响规律。基于圆弧形结构的欧拉梁理论,根据非均质本构关系,运用Hamilton原理,提出一种非均质环形谐振子结构... 详细信息

传统环形谐振子结构特性分析方法是基于均质弹性力学理论的,无法准确描述非均质材料力学特性对环形谐振子结构静、动态性能的影响规律。基于圆弧形结构的欧拉梁理论,根据非均质本构关系,运用Hamilton原理,提出一种非均质环形谐振子结构性能分析方法。利用非均质环形谐振子理论和布勃诺夫-伽辽金法,获得非均质环形谐振子静态弯曲问题和动态转动问题的理论解。然后,分析了材料的非均质力学特性对环形谐振子弯曲挠度、二阶弯曲角频率及进动系数的影响规律。典型非均质材料性能分析结果表明,传统方法对于二阶弯曲角频率计算误差达59%以上,而所提方法能够精确预测非均质谐振子结构的静、动态响应,计算出二阶弯曲角频率。

关键词：非均质材料欧拉梁理论 Hamilton原理环形谐振子转动问题

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诗人范成大和中药仙茅的故事

中医健康养生 2024年第3期10卷 76-77页

作者：原所贤辽宁省大连市中医医院

这首《石湖仙·松江烟浦》是宋代词人姜夔为范成大祝寿而作的,歌颂其不朽功业和广阔胸襟,其中还有一个与仙茅有关的小故事。范成大(1126-1193),字至能,号石湖居士,平江府吴县(今苏州市)人,官至参知政事、资政殿大学士。他诗风轻巧工致,... 详细信息

这首《石湖仙·松江烟浦》是宋代词人姜夔为范成大祝寿而作的,歌颂其不朽功业和广阔胸襟,其中还有一个与仙茅有关的小故事。范成大(1126-1193),字至能,号石湖居士,平江府吴县(今苏州市)人,官至参知政事、资政殿大学士。他诗风轻巧工致,温润流婉,与陆游、杨万里、尤袤并称“南宋四大中兴诗人”。范成大出生于官宦之家,自幼聪慧,却先天不足,多生疾病。

关键词：范成大宋代词人杨万里姜夔参知政事陆游仙茅中兴诗人

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男性肝郁,无力“阳刚”

中医健康养生 2024年第2期10卷 68-70页

作者：原所贤辽宁省大连市中医医院

肝郁,又称肝气郁结证,多由情志不遂,或突然受到精神刺激,或因病邪侵扰,阻遏肝脉,致使肝气失于疏泄条达而出现情志抑郁的证候。临证常见胸胁或少腹胀满窜痛,善太息,或见咽部异物感,或颈部瘿瘤,或胁下肿块;妇女可见乳房胀痛、月经不调、... 详细信息

肝郁,又称肝气郁结证,多由情志不遂,或突然受到精神刺激,或因病邪侵扰,阻遏肝脉,致使肝气失于疏泄条达而出现情志抑郁的证候。临证常见胸胁或少腹胀满窜痛,善太息,或见咽部异物感,或颈部瘿瘤,或胁下肿块;妇女可见乳房胀痛、月经不调、痛经等;男性则多见小腹坠胀、勃起或射精障碍、舌苔薄白、脉弦等。

关键词：咽部异物感情志不遂射精障碍情志抑郁少腹胀满善太息脉弦胸胁

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抓好“三个创新” 做好访谈节目 011

抓好“三个创新” 做好访谈节目