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坐骨神经预损伤通过miR-17-5p/STAT3/GAP-43通路促进初级感觉神经元轴突再生的实验研究

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坐骨神经预损伤通过miR-17-5p/STAT3/GAP-43通路促进初级感觉神经...

作者：原文琦天津医科大学

学位级别：硕士

目的本研究旨在利用生物信息学技术在mi RNomes水平分析坐骨神经预损伤(sciatic nerve conditioning injury,SNCI)促进脊髓后索损伤(dorsal column lesion,DCL)修复的分子生物学机制,并寻找其中起到关键调控作用的微小RNA(micro RNA,mi ... 详细信息

目的本研究旨在利用生物信息学技术在mi RNomes水平分析坐骨神经预损伤(sciatic nerve conditioning injury,SNCI)促进脊髓后索损伤(dorsal column lesion,DCL)修复的分子生物学机制,并寻找其中起到关键调控作用的微小RNA(micro RNA,mi RNA)。探究关键mi RNA所调控的靶基因,并在细胞水平上对关键mi RNA的表达进行调控,从而观察所研究的关键mi RNA对大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元轴突生长产生的影响。尝试应用β-苯乙基异硫氰酸酯(β-Phenylethyl isothiocyanate,PEITC)进行调控DRG神经元轴突的再生修复。方法1.用microarray 3.0芯片测定SNCI组、单纯脊髓后索损伤(simple dorsal column lesion,SDCL)组和对照组大鼠DRG组织中的mi RNA表达谱,并通过生物信息学技术分析寻找在SNCI促进DCL修复过程中起到关键调控作用的mi RNA。2.应用RT-q PCR技术验证芯片数据。并通过查询mi RBase数据库和Target Scan数据库,以及文献检索对所研究的关键mi RNA的靶基因进行预测。3.采用RT-q PCR技术和Western Blot技术从m RNA水平和蛋白水平对所研究的关键mi RNA的靶基因和靶蛋白进行验证。4.将出生24小时内的Wistar大鼠的DRG神经元进行分离和培养。抑制关键mi RNA的表达并抑制其靶蛋白的活性,通过细胞免疫荧光技术观察其对DRG神经元轴突生长的影响。5.将用不同剂量的PEITC加入培养好的DRG神经元之中,对DRG神经元进行细胞免疫荧光染色并DRG神经元轴突的生长情况,从而选出最佳给药剂量,并应用RT-q PCR和Western Blot技术在mi RNA水平和蛋白水平对PEITC的作用机制进行验证。6.运用SPSS 18.0软件进行统计分析。用均数±标准差(?±s)表示计量资料。多样本间的比较应用单因素方差分析(ANOVA)和q检验。两独立样本的比较采用student t检验。P<0.05为有统计学意义。结果***-17-5p的表达在SDCL组大鼠DCL后的3d、7d和14d出现上调,其在这三个时间点的表达变化倍数分别是4.17倍、2.98倍和5.12倍;而在SNCI组,mi R-17-5p在大鼠DCL后的3d、7d和14d呈下调,其在这三个时间点的表达变化倍数分别是-3.31倍、-2.96倍好-3.55倍。***组的DRG组织中mi R-17-5p的下调是SNCI和DCL共同作用的结果。3.抑制DRG神经元的mi R-17-5p能够增强GAP-43蛋白的表达并存进其轴突再生修复。4.结合mi RBase、Target Scan数据库和文献检索发现STAT3是mi R-17-5p的靶基因。5.与对照组相比,SNCI组大鼠DRG组织中STAT3蛋白和p-STAT3蛋白的表达水平在DCL后的4h、3d、7d、14d明显上调;而SDCL组STAT3在DCL后的3d、7d、14d则呈现明显的下调。实验发现SNCI组大鼠DRG组织中mi R-17-5p的表达趋势与STAT3蛋白和p-STAT3蛋白的表达趋势相反。*** R-17-5p能够通过调控STAT3蛋白来调控p-STAT3蛋白的水平,从而对GAP-43蛋白的表达产生影响,最终对影响损伤的DRG神经元轴突的修复和再生。7.10μM的PEITC能够有效下调DRG神经元中的mi R-17-5p的表达量,进而通过mi R-17-5p/STAT3/GAP-43这一转导通路促进损伤的DRG神经元轴突的修复和再生。结论1.在大鼠DCL后的3d、7d和14d,SDCL组大鼠DRG组织中的mi R-17-5p的表达量出现上调,而SNCI组在相应时间点下调。***组大鼠的DRG组织中mi R-17-5p的下调是SNCI和DCL共同作用的结果。3.上调的STAT3蛋白通过mi R-17-5p/STAT3/GAP-43转导通路促进损伤的DRG神经元轴突的再生和修复。***通过mi R-17-5p/STAT3/GAP-43转导通路促进DRG神经元损伤轴突的再生修复。

关键词：坐骨神经预损伤脊髓后索损伤 miR-17-5p STAT3 GAP-43 轴突再生 β-苯乙基异硫氰酸酯

坐骨神经预损伤后背根神经节中miRNomes改变对大鼠脊髓后索损伤修复的影响

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中国脊柱脊髓杂志 2014年第12期24卷 1090-1098页

作者：王天仪原文琦刘勇张衍军张亮王志杰曹建刚冯世庆天津医科大学总医院骨科天津市300052 解放军266医院骨一科河北省承德市067000 天津医科大学第二附属医院骨科天津市300211 承德医学院附属医院儿内科河北省承德市067000

目的:研究大鼠坐骨神经预损伤后背根神经节中mi RNomes改变对脊髓后索损伤修复的影响。方法:39只雌性Wistar大鼠随机分为A、B、C、D组。A组(n=12)坐骨神经损伤造模后7d进行T10节段脊髓后索损伤造模,B组(n=12)仅进行T10节段脊髓后索损伤... 详细信息

目的:研究大鼠坐骨神经预损伤后背根神经节中mi RNomes改变对脊髓后索损伤修复的影响。方法:39只雌性Wistar大鼠随机分为A、B、C、D组。A组(n=12)坐骨神经损伤造模后7d进行T10节段脊髓后索损伤造模,B组(n=12)仅进行T10节段脊髓后索损伤造模,C组(n=12)仅进行坐骨神经损伤造模,D组(n=3)不进行任何造模操作。A组和B组分别于脊髓后索损伤造模后4h、3d、7d、14d取背根神经节行总RNA提取和Western blot检测,于脊髓后索损伤造模后14d取损伤中心脊髓组织行神经丝蛋白200(NF-200)免疫组织化学染色和HE染色;C组于A组各时间点取材的同时取背根神经节行总RNA提取和Western blot检测;D组取背根神经节行总RNA提取和Western blot检测。对A、B两组各时间点背根神经节mi RNA表达谱进行微阵列芯片分析和生物信息学分析,观察与坐骨神经预损伤促进脊髓后索损伤修复有关的mi RNA,选出A组中与B组相比变化倍数明显、经过生物信息学分析靶蛋白为Dusp4的mi R-199a-5p进行研究。并用RT-q PCR技术对各组mi R-199a-5p及A、B和D组Dusp4 m RNA表达进行检测,用Western blot技术检测各组Dusp4蛋白以及A、D组p38蛋白和p-p38蛋白,对A组和B组脊髓后索损伤中心脊髓组织用NF-200免疫组织化学染色及HE染色观察损伤脊髓的恢复情况。结果:芯片分析结果显示mi R-199a-5p在A组各个时间点表达与D组相比明显下调,B组mi R-199a-5p在脊髓后索损伤后4h表达与D组相比上调,3d、7d和14d的表达量无明显变化。RT-q PCR结果显示A组各时间点mi R-199a-5p表达与D组相比下调(P<0.05),B组mi R-199a-5p在脊髓后索损伤后4h表达与D组相比上调(P<0.05),3d、7d和14d的表达量与D组比较无明显变化,C组各时间点mi R-199a-5p表达与D组比较无明显变化。A组和B组各时间点Dusp4 m RNA表达与D组相比无明显变化。A组Dusp4蛋白在脊髓后索损伤后各个时间点与D组比较均有上调且存在统计学差异(P<0.05)。B组Dusp4蛋白在脊髓后索损伤后4h表达与D组相比显著下调(P<0.05),脊髓后索损伤后3d、7d、14d与D组比较无明显差异。C组Dusp4蛋白在各时间点的表达水平与D组比较无明显差异。A组p38蛋白及p-p38蛋白的表达变化趋势与mi R-199a-5p趋势一致。在脊髓后索损伤后14d,与B组比较A组损伤中心尾端脊髓NF-200表达明显增加,且损伤中心尾端脊髓白质纤维束形态规整、后索纤维束排列有序。结论:大鼠坐骨神经预损伤后背根神经节中mi R-199a-5p表达下调可以促进脊髓后索损伤的修复。

关键词：坐骨神经预损伤脊髓后索损伤 miRNA Dusp4 p38蛋白大鼠

微小RNA-199a-5p下调后通过c-jun氨基端激酶通路促进脊髓后索损伤修复的研究

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中华实验外科杂志 2015年第7期32卷 1498-1502页

作者：王天仪刘勇原文琦张衍军王志杰张亮曹建刚冯世庆天津医科大学总医院骨科 300052 解放军266医院骨一科承德医学院附属医院儿内科天津医科大学第二附属医院骨科

目的从微小RNA（miRNA,miR）表达谱（miRNomes）角度探讨坐骨神经预损伤促进脊髓后索损伤修复的机制.方法 39只雌性Wistar大鼠随机分为坐骨神经预损伤组、单纯脊髓后索损伤组、单纯坐骨神经损伤组和对照组.用微阵列芯片技术和生物信息... 详细信息

目的从微小RNA（miRNA,miR）表达谱（miRNomes）角度探讨坐骨神经预损伤促进脊髓后索损伤修复的机制.方法 39只雌性Wistar大鼠随机分为坐骨神经预损伤组、单纯脊髓后索损伤组、单纯坐骨神经损伤组和对照组.用微阵列芯片技术和生物信息学方法研究坐骨神经预损伤促进脊髓后索损伤修复的相关miRNA,并用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）、Western blot、免疫组织化学以及苏木素-伊红（HE）染色等技术进行生物学验证.结果 miR-199a-5p在坐骨神经预损伤组各时间窗表达下调,其靶基因促分裂原活化蛋白激酶磷酸酶2（MKP2）的蛋白表达上升,进而抑制c-Jun氨基末端激酶（JNK）的磷酸化.坐骨神经预损伤组脊髓后索损伤中心尾端脊髓神经丝蛋白明显增加且白质纤维束形态规整.单纯损伤坐骨神经并不改变miR-199a-5p和MKP2蛋白表达.结论 miR-199a-5p表达下调增加了MKP2阻断JNK磷酸化的作用,是坐骨神经预损伤促进脊髓后索损伤修复的机制之一.

关键词：脊髓后索损伤坐骨神经预损伤微阵列芯片促分裂原活化蛋白激酶磷酸酶2 c-Jun氨基末端激酶

清创联合抗生素溶液局部持续灌注引流治疗胸腰椎后路内固定术后早期切口深部感染的疗效观察

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中国脊柱脊髓杂志 2021年第4期31卷 365-369页

作者：朱禧吴昊施建党牛宁奎乔永东丁惠强原文琦宁夏医科大学总医院脊柱骨科银川市750004 宁夏回族自治区石嘴山市第三人民医院脊柱骨科 753400

胸腰椎疾患内固定术后早期手术切口深部感染作为脊柱手术的严重并发症,仍然是困扰临床医生的难题[1、2]。尽管采取了各种预防措施,术后仍然存在12.7%的手术部位感染率[3]。术后早期切口深部感染除了增加患者痛苦外,还常因再次手术、长... 详细信息

胸腰椎疾患内固定术后早期手术切口深部感染作为脊柱手术的严重并发症,仍然是困扰临床医生的难题[1、2]。尽管采取了各种预防措施,术后仍然存在12.7%的手术部位感染率[3]。术后早期切口深部感染除了增加患者痛苦外,还常因再次手术、长期抗菌治疗导致住院时间延长、住院费用增高等情况,给社会和家庭带来巨大的经济负担[4、5]。

关键词：脊柱手术抗菌治疗切口深部感染腰椎疾患临床医生早期手术内固定术后住院费用

超声骨刀在腰椎后路减压椎间植骨融合术中的应用效果

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宁夏医科大学学报 2018年第12期40卷 1436-1438页

作者：马小民原文琦常龙詹学华丁惠强卢荣宁夏医科大学总医院脊柱骨科银川750004 宁夏医科大学总医院胸科医院骨科银川750004

目的探讨在腰椎后路减压椎间植骨融合术(posterior lumber interbody fusion,PLIF)中应用超声骨刀的临床价值。方法回顾性分析2014年1月至2015年12月宁夏医科大学总医院脊柱骨科应用超声骨刀行腰椎PLIF手术的35例患者(超声骨刀组)和同... 详细信息

目的探讨在腰椎后路减压椎间植骨融合术(posterior lumber interbody fusion,PLIF)中应用超声骨刀的临床价值。方法回顾性分析2014年1月至2015年12月宁夏医科大学总医院脊柱骨科应用超声骨刀行腰椎PLIF手术的35例患者(超声骨刀组)和同期使用传统器械手术的40例患者(传统器械组)的临床资料。分析并比较两组患者的手术时间、术中出血量、术后引流量、日本骨科学会(JOA)评分、JOA改善率等指标。结果相比于传统器械组,超声骨刀组的手术时间短、术中出血量及术后引流量少(P均0.05)。结论超声骨刀进行PLIF手术可缩短手术时间,减少手术出血,并能避免硬膜损伤及脑脊液漏等,值得临床推广应用。

关键词：腰椎后路减压椎间植骨融合术超声骨刀日本骨科学会评分脑脊液漏

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金天格胶囊治疗膝骨关节炎的临床研究

中国骨质疏松杂志 2015年第1期21卷 84-87页

作者：曹建刚王天仪王磊原文琦刘勇冯世庆修玉才李晓华天津医科大学总医院骨科天津300052 天津市天津医院运动损伤与关节镜二科天津300211 解放军第二六六医院骨一科承德067000

目的观察金天格胶囊(JTG)治疗膝关节骨性关节炎的临床疗效。方法选取骨科门诊膝关节骨性关节炎患者90例,随机分为3组,每组患者30例,1组为口服金天格胶囊(JTG)治疗组既中药组,2组为口服非甾体类抗炎镇痛药物(NSAID)醋氯芬酸片治疗组既西... 详细信息

目的观察金天格胶囊(JTG)治疗膝关节骨性关节炎的临床疗效。方法选取骨科门诊膝关节骨性关节炎患者90例,随机分为3组,每组患者30例,1组为口服金天格胶囊(JTG)治疗组既中药组,2组为口服非甾体类抗炎镇痛药物(NSAID)醋氯芬酸片治疗组既西药组,3组为口服金天格胶囊联合醋氯芬酸片(JN)治疗组既中西药组。每组均治疗1个月后停药,分别对治疗前、治疗中及治疗后进行临床疗效统计及治疗前后主要临床症状体征改善率比较。结果中西药组Lequesne指数的改善情况及治疗有效率明显优于其他两组,比较差异有统计学意义(P0.05)。结论单独应用金天格胶囊治疗膝骨关节炎疗效与非甾体类抗炎药物相当;金天格胶囊联合非甾体类抗炎药治疗膝骨关节炎可有效缓解临床症状,临床疗效优于单独应用非甾体抗炎药物,且具有起效快、作用持久、不增加副作用的优点。

关键词：中医中药骨关节炎膝关节金天格胶囊非甾体抗炎药

OLIF技术联合后路Wiltse入路内固定治疗单节段腰椎结核

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中国矫形外科杂志 2019年第21期27卷 1954-1959页

作者：张佳林乔永东袁海峰王自立施建党原文琦宁夏医科大学总医院脊柱骨科

[目的]观察OLIF技术联合后路Wiltse入路内固定治疗单节段腰椎结核的临床效果。[方法] 2015年3月~2018年3月本院手术治疗40例单节段腰椎结核患者,根据手术方法不同将其分为OLIF技术联合后路Wiltse入路内固定手术组(微创组)和传统前路病... 详细信息

[目的]观察OLIF技术联合后路Wiltse入路内固定治疗单节段腰椎结核的临床效果。[方法] 2015年3月~2018年3月本院手术治疗40例单节段腰椎结核患者,根据手术方法不同将其分为OLIF技术联合后路Wiltse入路内固定手术组(微创组)和传统前路病灶清除联合后路内固定手术组(传统组)。记录两组患者的围手术期资料,评估患者腰部疼痛、神经功能恢复、植骨融合及病灶治愈情况。[结果]两组在手术时间的差异无统计学意义(P>0.05),而微创组腹部切口长度、术中出血量、术后引流量、住院时间均显著优于传统组(P0.05)。两组术后前凸Cobb角均较术前显著增加(P0.05)。至末次随访时,两组所有患者均达到病灶愈合、骨性融合。[结论] OLIF技术联合后路Wiltse入路内固定术治疗单节段腰椎结核与传统前后路手术相比,病灶治愈效果相当,但其创伤小,术后并发症少,患者康复快。

关键词：单节段腰椎结核 OLIF Wiltes入路

基于生物信息学对脊髓损伤后关键微小RNA与转录因子的筛选及其靶基因预测

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中华实验外科杂志 2023年第7期40卷 1272-1275页

作者：刘威原文琦王志强周月勇詹学华马荣梁思敏戈朝晖宁夏医科大学临床医学院银川750004 宁夏医科大学总医院骨外科银川750001

目的探讨脊髓损伤(SCI)后关键的微小RNA(miRNAs)与转录因子(TFs)并进一步了解miRNAs、TFs与靶基因的互作关系。方法从基因表达综合数据库(GEO)下载基因表达谱(GSE19890), 将差异倍数(log2FC)≥1和错误发现率(FDR)≤0.05作为标准阈值, ... 详细信息

目的探讨脊髓损伤(SCI)后关键的微小RNA(miRNAs)与转录因子(TFs)并进一步了解miRNAs、TFs与靶基因的互作关系。方法从基因表达综合数据库(GEO)下载基因表达谱(GSE19890), 将差异倍数(log2FC)≥1和错误发现率(FDR)≤0.05作为标准阈值, 通过对微阵列数据分析筛选出差异表达的miRNAs(DEmiRNAs)。预测DEmiRNAs靶基因后分别进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路和基因本体论(GO)功能富集分析, 接着基于TFs-靶基因互作分析确定关键的TFs, 根据靶基因的蛋白-蛋白互作网络分析确定特殊的DEmiRNA。结果通过对数据的分析, 分别与对照组相比, SCI后1 d出现5个下调基因和74个上调基因, 3 d后有118个下调基因和21个上调基因, 7 d后有450个下调基因和11个上调基因。韦恩在线分析筛选出7个重叠的DEmiRNAs参与了SCI后的表达调控。KEGG富集分析主要涉及细胞衰老、胰岛素抵抗和促性腺激素释放激素(GnRH)等信号通路, GO富集分析主要涉及RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录正调控、基因表达的正调控和大脑发育等。通过TFs-靶基因互作分析发现了6个TFs, 比较10个Hub靶基因后我们发现了特殊的DEmiRNA(miR-124-3p)。结论 7个DEmiRNAs与6个TFs在SCI后可能通过调控靶基因的表达起着关键作用, 其中miR-124-3p通过调控特殊的靶基因产生了重要影响。

关键词：微小RNA 脊髓损伤转录因子靶基因生物信息学

脊柱后柱部分组织切除对大鼠腰椎间盘退变模型的影响

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宁夏医科大学学报 2017年第9期39卷 1112-1115页

作者：马涛董毅张惠勇牛宁奎原文琦杨宗强宁夏医科大学总医院脊柱骨科银川750004

目的探讨大鼠脊柱后柱部分组织切除后,是否会发生大鼠椎间盘的退行性改变。方法选取24只Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机分为实验组和对照组,实验组采用以下手术方式造模:以腰3椎体(L3)为中心,切除L1~6棘上、棘间韧带、棘突、关节突关节,在... 详细信息

目的探讨大鼠脊柱后柱部分组织切除后,是否会发生大鼠椎间盘的退行性改变。方法选取24只Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机分为实验组和对照组,实验组采用以下手术方式造模:以腰3椎体(L3)为中心,切除L1~6棘上、棘间韧带、棘突、关节突关节,在L4~5水平切断双侧竖脊肌。对照组仅切开皮肤后直接缝合。术后6周行大鼠腰椎MRI检查观察椎间盘髓核信号改变并处死大鼠,取出椎间盘组织行光镜和电子显微镜观察,观察两组大鼠椎间盘髓核细胞和纤维细胞的改变。结果 MRI检查显示,实验组L1~6椎间盘髓核T2像呈低信号,符合退变的椎间盘在MRI中的表现;实验组光镜下观察到:纤维环和髓核边界不清,髓核内可见大量的坏死细胞轮廓;电子显微镜下观察到:实验组椎间盘内脊索细胞、类软骨细胞、胶原纤维结构较对照组有明显退变,符合椎间盘退变的细胞改变。结论脊柱后柱部分组织切除后6周,通过MRI检查、光镜和电子显微镜下观察,能够使椎间盘发生明显的退变。

关键词：腰椎间盘退变脊柱后柱电子显微镜