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嗜盐古菌胞外蛋白酶HlyA酶学性质及在鱼露发酵中的初步应用研究

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嗜盐古菌胞外蛋白酶HlyA酶学性质及在鱼露发酵中的初步应用研究

作者：厉思雅江苏大学

学位级别：硕士

嗜盐古菌胞外蛋白酶通常具有嗜盐碱、耐高温、耐有机溶剂等特征,在工业上具有巨大应用潜力。本研究以低盐适应性嗜盐古菌Halococcus salifodinae的胞外蛋白酶Hly A为研究对象,探究Hly A在不同温度、盐度、p H下的稳定性及降解产物,比较H... 详细信息

嗜盐古菌胞外蛋白酶通常具有嗜盐碱、耐高温、耐有机溶剂等特征,在工业上具有巨大应用潜力。本研究以低盐适应性嗜盐古菌Halococcus salifodinae的胞外蛋白酶Hly A为研究对象,探究Hly A在不同温度、盐度、p H下的稳定性及降解产物,比较Hly A和C端延伸区(C-terminal extension,CTE)缺失突变体Hly A△CTE的酶学性质,初步研究具有优良催化性能的Hly A△CTE作为外加酶对鱼露发酵的影响。Hly A在高温或低盐条件下自加工降解成稳定的产物。采用Escherichia coli异源表达、镍柱亲和层析、体外复性及凝胶过滤层析,获得了纯度较高的Hly A。Hly A在低温、高盐、p H 6.0-10.0下均具有良好的稳定性,但是,在40℃以上的高温或2 M Na Cl以下的低盐环境中会自加工降解成稳定的产物。蛋白质C端测序结果表明降解产物是CTE缺失、仅含催化结构域的Hly A△CTE。纯化的重组Hly A△CTE前体未能复性获得成熟酶,表明CTE在自催化成熟过程中发挥着重要作用。自剪切位点(P1和P1’)定点突变Hly AE421A和Hly AE421A+T422A对重组菌株Haloferax volcanii胞外上清液酶活没有显著影响,但是,成熟酶仍然会发生自剪切。Hly A△CTE是高稳定性、高活性的广适性蛋白酶。Hly A的降解产物Hly A△CTE在广泛的温度(-20-60℃)、盐度(0.5-4 M Na Cl)和p H(6.0-10.0)范围内均具有良好的稳定性。Hly A的最适反应条件为40-45℃、p H 8.5,Hly A△CTE的最适反应条件为60℃、p H 7.0。Hly A和Hly A△CTE在低盐条件(0.5-1.5 M Na Cl)下活性较高。与Hly A相比,Hly A△CTE的温度耐受性更好,在高温下具有更高的活性。K、Ca、Mg和Sr促进Hly A和Hly A△CTE的酶活。Hly A和Hly A△CTE能够水解多种蛋白质底物,对DMSO、吐温20有较好的耐受性。Hly A△CTE最大反应速率V是Hly A的2.1倍。Hly A△CTE能够促进鱼蛋白水解,提高鱼露游离氨基酸含量。模拟鱼露发酵过程中,外加Hly A△CTE的鱼露氨基酸态氮含量、TCA-多肽含量和蛋白酶活性均高于外加碱性蛋白酶、外加中性蛋白酶和未加酶的鱼露。外加Hly A△CTE的鱼露人体必需氨基酸和鲜味氨基酸含量最高,其游离氨基酸总量分别是外加碱性蛋白酶、外加中性蛋白酶及未加酶鱼露的1.4倍、1.9倍和3.0倍。综上,Hly A在高温或低盐环境中会自加工降解,降解产物Hly A△CTE具有优良的酶学性质,能够促进鱼露发酵中蛋白质的水解。本研究将为嗜盐古菌胞外蛋白酶应用于高盐发酵食品工业提供重要的理论依据。

关键词：嗜盐古菌胞外蛋白酶 C端延伸区域酶学性质鱼露发酵

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腌制盐中可培养嗜盐古菌多样性研究

江苏调味副食品 2022年第3期39卷 35-40页

作者：康舒厉思雅杨蓓思杨晓妍崔恒林侯靖江苏大学食品与生物工程学院江苏镇江212013

以我国不同产地的三种海盐(海湾、中盐、小伙子)和两种湖盐(雪天、茶卡)为研究对象,采用纯培养法分离其中的嗜盐古菌,结合16S rRNA基因序列分析、多样性指数和Bray-Curtis距离,探究腌制盐中可培养嗜盐古菌的多样性。结果发现,两种加碘盐... 详细信息

以我国不同产地的三种海盐(海湾、中盐、小伙子)和两种湖盐(雪天、茶卡)为研究对象,采用纯培养法分离其中的嗜盐古菌,结合16S rRNA基因序列分析、多样性指数和Bray-Curtis距离,探究腌制盐中可培养嗜盐古菌的多样性。结果发现,两种加碘盐(海湾和雪天)样品中嗜盐古菌总数最少,中盐样品中嗜盐古菌总数最多。腌制盐样品中含有大量嗜盐古菌新类群,中盐和小伙子样品中嗜盐古菌群落多样性较大。Bray-Curtis距离分析表明,雪天和茶卡两种湖盐的嗜盐古菌群落组成较相似。腌制盐含有较丰富的嗜盐古菌,且不同腌制盐的嗜盐古菌群落结构存在差异。

关键词：腌制盐嗜盐古菌分离多样性 16S rRNA

幼儿园中大班户外混龄游戏的教师支持研究 ——以东莞市C幼儿园为例

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幼儿园中大班户外混龄游戏的教师支持研究 ——以东莞市C幼儿园为...

作者：厉梦思洛阳师范学院

学位级别：硕士

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数值耗散对压气机流动分离涡模拟的影响研究

计算力学学报 2024年第1期41卷 145-152页

作者：田铖江思雅符松清华大学航天航空学院北京100084 中物院高性能数值模拟软件中心北京100088 北京应用物理与计算数学研究所北京100088

分离涡模拟DES是压气机流动模拟中常用的高保真湍流模式。为了使DES准确解析湍流,数值耗散必须限制在合理范围内。然而,当前的压气机流动DES类研究工作中仍然普遍采用高耗散的迎风格式。本文首先基于DES类方法计算的各向同性衰减湍流结... 详细信息

分离涡模拟DES是压气机流动模拟中常用的高保真湍流模式。为了使DES准确解析湍流,数值耗散必须限制在合理范围内。然而,当前的压气机流动DES类研究工作中仍然普遍采用高耗散的迎风格式。本文首先基于DES类方法计算的各向同性衰减湍流结果,定量比较了多种不同数值格式的耗散,证实了高耗散迎风格式严重低估中高波数湍流能量。高阶重构格式可以一定程度上改善该问题,但能量耗散仍然过高。本文在高阶重构的基础上,进一步引入自适应耗散函数修改Riemann求解器,构造了自适应耗散格式。该格式在全波数范围都能准确地预测湍流能谱。将该格式配合DES类方法模拟跨声速离心压气机流动,其预测的压比相比于三阶迎风格式,更加接近实验结果。此外,自适应耗散格式显著提高了中小尺度流动结构的分辨率。分析表明,在使用DES类方法模拟压气机流动时,有必要采用数值耗散较低的离散格式,以准确预测压气机总体性能和流动结构。本文构造的自适应耗散格式是一种良好选择。

关键词：压气机分离涡模拟DES 数值耗散迎风格式自适应耗散格式

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用于食品包装的结冷胶基膜功能改进研究进展

食品与发酵工业 2024年第1期50卷 326-333页

作者：张润峰薛思雅王清陈山广西大学轻工与食品工程学院广西南宁530004 广西大学广西糖业协同创新中心广西南宁530004 信阳农林学院食品学院河南信阳464000

结冷胶(gellan gum,GG)基膜具有优良的特性以及可生物降解的优势,在食品包装中用于替代石油基塑料展现出巨大的潜力。该文针对GG膜在食品包装应用中机械性能、耐水性以及功能方面存在的缺陷,对其改进措施以及功能强化策略进行了综述,包... 详细信息

结冷胶(gellan gum,GG)基膜具有优良的特性以及可生物降解的优势,在食品包装中用于替代石油基塑料展现出巨大的潜力。该文针对GG膜在食品包装应用中机械性能、耐水性以及功能方面存在的缺陷,对其改进措施以及功能强化策略进行了综述,包括聚合物共混的特性改进,植源性活性剂、抗菌肽以及颗粒物质掺入的功能强化,最后进行了总结与展望,以期为GG膜的研究提供有价值的参考,进一步推动其在食品包装方面的发展。

关键词：结冷胶复合食品包装功能改进活性包装

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胃肠道发作为主要表现的遗传性血管性水肿

中华消化杂志 2024年第4期44卷 277-279页

作者：王瑜田杵文姚玲雅梅思斌曹倩浙江大学医学院附属邵逸夫医院消化内科炎症性肠病中心杭州浙江大学医学院杭州

为提高对遗传性血管性水肿(HAE)胃肠道发作的早期识别率, 本研究回顾性收集并分析2020年6月1日至2023年8月31日因腹痛就诊于浙江大学医学院附属邵逸夫医院消化内科并确诊为HAE患者8例的临床资料, 同时复习HAE胃肠道发作相关文献。结果显... 详细信息

为提高对遗传性血管性水肿(HAE)胃肠道发作的早期识别率, 本研究回顾性收集并分析2020年6月1日至2023年8月31日因腹痛就诊于浙江大学医学院附属邵逸夫医院消化内科并确诊为HAE患者8例的临床资料, 同时复习HAE胃肠道发作相关文献。结果显示8例HAE患者的补体C4为(0.034±0.017) g/L, C1抑制因子水平为(0.051±0.017) g/L, 自限性缓解时间为(3.88±0.64) d, 腹痛明显时行计算机断层扫描(CT)检查均发现肠壁水肿和腹水。证明补体C4和C1抑制因子是特异性检查指标, 反复自限性发作病史和CT表现可提供诊断帮助。

关键词：血管性水肿, 遗传性胃肠道发作临床特征文献复习

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论厉鹗诗中的“金石气”

汉字文化 2024年第12期 145-147页

作者：厉一儒唐志雅扬州大学文学院 225009

厉鹗既是康乾时期的学者,也是著名诗人、词人。其在诗歌写作中,往往延用金石意象,形成独特的“金石气”。其金石诗就创作类别而言,有吟咏拓片之诗、访古寻迹之诗、论印诗、论书论画诗四种。厉鹗金石癖的成因有四方面:一是人格孤高。二... 详细信息

厉鹗既是康乾时期的学者,也是著名诗人、词人。其在诗歌写作中,往往延用金石意象,形成独特的“金石气”。其金石诗就创作类别而言,有吟咏拓片之诗、访古寻迹之诗、论印诗、论书论画诗四种。厉鹗金石癖的成因有四方面:一是人格孤高。二是身份复杂,兼具诗人、学者身份。三是交游广泛,与商人、艺术家交往密切,商人朋友为其提供物质基础,艺术家朋友为其提高审美水平。四是时代因素,乾隆时期金石学大盛,文字狱大兴,这些都促使了厉鹗金石癖的形成。厉鹗金石诗的艺术特征在于他兼顾了学术性与艺术性、叙事性与抒情性、逻辑性与跳跃性三方面的特点。

关键词：厉鹗清诗金石书法艺术

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尽快构建工业云制造产业高水平技术创新平台 A02

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尽快构建工业云制造产业高水平技术创新平台

南方日报

作者：厉思璇

近年来，广东以实体经济为本，坚持制造业当家，加快建设制造强省步伐。2023年全国两会期间，全国人大代表、广东省工商联主席陈志列围绕制造业转型升级，提出了“加快成立国家级工业互联网云制造领域制造业创新中心”的建议。近日，... 详细信息

近年来，广东以实体经济为本，坚持制造业当家，加快建设制造强省步伐。2023年全国两会期间，全国人大代表、广东省工商联主席陈志列围绕制造业转型升级，提出了“加快成立国家级工业互联网云制造领域制造业创新中心”的建议。近日，记者从省人大常委会获悉，工业和信息化部?

关键词：工业互联网工信部制造业创新中心云制造技术创新平台

来源： cnki报纸评论

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论《典论·论文》“文气说”的理论构建

汉字文化 2024年第3期 221-223页

作者：唐志雅厉一儒扬州大学文学院 225009

曹丕在《典论·论文》中首次提到了“文气”的概念,将传统“气”的内涵进行了创新发展,上升到了文学创作批评的范畴,开启了中国文学批评史上以“气”论文的先河。本文通过梳理“气”范畴的发展历程,研究“文气”丰富的理论内涵,对“文... 详细信息

曹丕在《典论·论文》中首次提到了“文气”的概念,将传统“气”的内涵进行了创新发展,上升到了文学创作批评的范畴,开启了中国文学批评史上以“气”论文的先河。本文通过梳理“气”范畴的发展历程,研究“文气”丰富的理论内涵,对“文气说”进行理论构建,更好地把握曹丕“文以气为主”这一理论主张。曹丕“文气说”的提出,强调创作主体的作用,有利于文学的发展,展现出“文气说”在我国古代文学批评发展史中具备的重要价值。

关键词：曹丕《典论·论文》文气