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增塑剂邻苯二甲酸酯降解菌的分离、降解途径解析及其水解酶基因的克隆和酶学特性研究

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增塑剂邻苯二甲酸酯降解菌的分离、降解途径解析及其水解酶基因的...

作者：卢美玉南京农业大学

学位级别：硕士

邻苯二甲酸酯（Phthalate Esters,PAEs）作为增塑剂广泛应用于聚氯乙烯,聚乙烯,聚丙烯,聚苯乙烯的生产中。由于PAEs具有环境激素效应,因此它的残留给生态环境和人类健康带来严重威胁。已有研究表明生物降解是PAEs在环境中分解的主要途... 详细信息

邻苯二甲酸酯（Phthalate Esters,PAEs）作为增塑剂广泛应用于聚氯乙烯,聚乙烯,聚丙烯,聚苯乙烯的生产中。由于PAEs具有环境激素效应,因此它的残留给生态环境和人类健康带来严重威胁。已有研究表明生物降解是PAEs在环境中分解的主要途径。本论文以邻苯二甲酸二丁酯（Dibutyl Phthalate,DBP）作为研究对象,从DBP降解菌的分离出发,分别从代谢途径,基因和酶学水平上解析DBP的微生物降解机制,获得的研究结果如下。1、DBP降解菌的分离鉴定及降解特性研究从江苏省南京市一家塑料工厂的车间污水排放处采集污泥通过富集培养分离到一个能完全降解DBP的富集液。从该富集液中分离纯化到两株细菌,分别命名为PAE-1和PAE-2。经过菌体形态学,生理生化特征和16S rRNA基因序列分析将它们分别鉴定为 sp.和Pandoraea ***/MS结果分析表明,菌株PAE-1负责DBP的前两步水解,首先将DBP脱烷基生成邻苯二甲酸单酯（Monobutyl Phthalate,MBP）,然后进一步脱烷基生成邻苯二甲酸（Phthalic Acid,PA）,菌株PAE-2负责进一步降解PA。两株菌通过联合作用将DBP完全降解。PAE-1水解DBP的最适降解温度为30℃,最适pH为8.0。在最适条件下12 h内对0.5 mM DBP的降解率达到98%。菌株PAE-1对邻苯二甲酸双酯及单酯均表现出较高的转化速率,对双酯的转化速率表现为DPP（Dipentyl phthalate）＞DBP＞BBP（Benzyl butyl phthalate）＞DHP（Dihexyl phthalate）＞DEP（Diethyl phthalate）＞DMP（Dimethyl phthalate）＞DEHP（Di（2-ethyhexyl）phthalate）;而对单酯的转化速率表现为 MBzP（Monobenzyl phthalate）＞MPP（Monopentyl phthalate）＞MMP（Monomethyl phthalate）＞MHP（Monohexyl phthalate）＞MBP＞MEP（Monoethyl phthalate）＞MEHP（Mono（2-ethyhexyl）phthalate）。2、负责DBP连续水解的基因dpeH及mpeH的克隆及功能鉴定由于DBP水溶性低,且降解菌能够将其水解成溶于水的产物,利用这些特性通过透明圈的显示验证了菌株PAE-1的降解功能。并且采用鸟枪法建库成功从15,000个转化子中克隆到两个长度不同的水解酶基因dpeH和mpeH。dpeH全长723 bp编码240个氨基酸残基,对DpeH的氨基酸序列分析显示该酶属于酯酶,与该酶氨基酸序列相似性最高的酶是来自于Microbacterium ***-G48 的 alpha/betahydrolase（相似性为53%）。mpeH全长915 bp编码304个氨基酸残基,氨基酸序列分析表明MpeH也是属于酯酶,与MpeH氨基酸序列相似性最高的酶是来自Trichophyton benhamiae CBS 112371 的 a probable secreted lipase（25%）。通过 HPLC/MS 分析水解酶 DpeH 和MpeH对DBP及其水解产物的降解功能,结果显示DpeH能够水解DBP生成MBP而不能继续水解MBP,而MpeH只能水解MBP生成PA,对DBP无水解功能。反转录PCR的结果显示dpeH和mpeH属于同一转录单元,转录方式为共转录。而且dpeH和mpeH的转录均不受底物DBP的诱导,因此推测它们的表达类型均为组成型。3、水解酶DpeH及MpeH的酶学特性研究在大肠杆菌*** BL21（DE3）中分别异源表达了dpeH及mpeH基因并进一步纯化DpeH和MpeH。对DpeH水解DBP产物的鉴定表明它能够断裂DBP中的C-O键,将DBP水解成MBP,同样对MpeH水解MBP的产物鉴定发现MpeH断裂MBP中的C-O键,水解生成PA。DpeH水解DBP的最适条件是30℃,pH 8.0;而MpeH水解MBP的最适条件是30℃,pH 9.0。对DpeH及MpeH的酶动力学常数进行测定,发现DpeH对不同邻苯二甲酸双酯表现出较高的催化效率,高低表现为DPP＞DBP＞BBP＞DHP＞DEP＞DMP＞DEHP,其中 DpeH 对 DBP 的Km 和 kcat 值分别为 9.60±0.97 μM和（2.72±0.06）×106-1;MpeH对不同的邻苯二甲酸单酯同样表现较高的催化效率,高低表现为 MBzP＞MPP＞MMP＞MHP＞MBP＞MEP＞MEHP,其中 MpeH 对 MBP的Km和 kcat 值分别为 18.6±2.00 μM

关键词： DBP Microbacterium sp.PAE-1 Pandoraea sp.PAE-2 降解 dpeH mpeH 酶学特性

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近代北京官话教材《北京官话今古奇观》研究

近代北京官话教材《北京官话今古奇观》研究

作者：卢美玉山东师范大学

学位级别：硕士

《北京官话今古奇观》是由旗人教师金国璞以明代抱瓮老人的《今古奇观》为蓝本,用北京官话改编而成的对日汉语阅读教材。该教材不仅展现了清末民初北京官话的真实面貌,还为我们研究这一时期的北京官话教材提供了丰富的语料。我们运用文... 详细信息

《北京官话今古奇观》是由旗人教师金国璞以明代抱瓮老人的《今古奇观》为蓝本,用北京官话改编而成的对日汉语阅读教材。该教材不仅展现了清末民初北京官话的真实面貌,还为我们研究这一时期的北京官话教材提供了丰富的语料。我们运用文献研究法梳理近代北京官话教材及日本近代汉语教育的研究现状,定量统计教材含有的词语和句式。在《北京官话今古奇观》语言材料分析的基础上,将《北京官话今古奇观》分别与《今古奇观》和《国际中文教育中文水平等级标准》进行比较,以探究《北京官话今古奇观》词汇和句式分布的特点、历时差异以及编排等级意识等对当今对外汉语阅读教学及对外汉语阅读教材编写的启示。本文包括六个部分,除绪论和结语外,共有四章。绪论部分主要阐述研究《北京官话今古奇观》的目的与意义、研究现状、研究对象与作者简介、研究语料与方法、研究重点与难点,主要展现问题意识,表明研究思路。第一章“《北京官话今古奇观》语言要素分析”。该章是对《北京官话今古奇观》教材本体的研究。核心内容是对教材语言要素的分析,包括词汇分析和语法分析两个部分。词汇分析侧重于对词语结构的分析,语法分析侧重于对词类和句式的分析。词类分析以名词、动词、语气词和特殊副词“所”为主。句式分析主要从语义特点和句式结构两个角度出发,考察“把”字句、“叫”字句和“给”字句的特征。第二章“《北京官话今古奇观》词汇历时比较”。该章是将《北京官话今古奇观》所含词汇分别与《今古奇观》和《国际中文教育中文水平等级标准》进行对比分析。《今古奇观》与《北京官话今古奇观》是始源文本和衍生文本的关系,两个版本在词汇方面的差异主要体现在两个方面:一是文白词汇差异;二是方言词汇差异。将《北京官话今古奇观》与《国际中文教育中文水平等级标准》所含等级词汇表进行对比,以探究《北京官话今古奇观》所含《等级标准》中的各级词汇的等级分布概况、各等级词汇音节构成概况、各等级重现词分布概况,分析词汇的发展演变情况。经统计,《北京官话今古奇观》中共有2233个词语出现在《等级标准》中,教材含有的初级词数量最多,中级词数量次之,高级词数量最少。第三章“《北京官话今古奇观》特殊句式历时比较”。本章主要是将教材含有的特殊句式分别与《今古奇观》和《国际中文教育中文水平等级标准》进行对比,分析教材所含特殊句式的历时差异。与《今古奇观》的对比是以处置句和被动句为切入点,探究两个版本在句式选用方面的差异以及同一句式内部的结构差异。与《等级标准》各级语法点所含特殊句式的对比主要包含两个方面:一是教材中所含《等级标准》中的特殊句式;二是教材中未含《等级标准》中的特殊句式。《等级标准》初级、中级语法点所含的多数特殊句式都有在《北京官话今古奇观》中出现。其中,一级语法点含有的所有类型的特殊句式在教材中都有出现,教材含有的高级语法点中的特殊句式较少。第四章“《北京官话今古奇观》编写原则与启示”。该章主要从《北京官话今古奇观》所体现的实用性、趣味性和针对性等教材编写原则出发,落脚于当今的对外汉语教学。主要依据前文对教材词汇和句式的分析与总结,指出教材编者在词语和句式选择上所体现的理念对当今对外汉语阅读教学及对外汉语阅读教材编写的启示。结语部分主要是从研究的主要问题、主要创新以及未来的研究领域和空间等方面对全文进行了总结。

关键词：《北京官话今古奇观》近代北京官话教材北京官话历时比较对外汉语教学

农村住房防灾的设计与实现 ——防汛防台管理信息系统的开发

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农村住房防灾的设计与实现 ——防汛防台管理信息系统的开发

作者：卢美玉华东师范大学

学位级别：硕士

当前，国内已有不少优秀信息管理系统(MIS)，但对于农村住房的防灾数据库管理系统基本找不到一个现成的版本。虽然，国内大多数人跟随国外的先进开发理念，也在进行有关农村数据库管理系统的开发，但往往由于人员、经费等问题的制约有... 详细信息

当前，国内已有不少优秀信息管理系统(MIS)，但对于农村住房的防灾数据库管理系统基本找不到一个现成的版本。虽然，国内大多数人跟随国外的先进开发理念，也在进行有关农村数据库管理系统的开发，但往往由于人员、经费等问题的制约有始无终。本文通过分析本系统的实际需求，采用结构化的系统分析和设计方法，提出了一套基于农村住房数据信息管理，集农村住房信息管理维护、灾害预警、灾情管理以及系统设置为一体的多功能的信息管理系统设计与实现方法，并详细阐述了开发过程中几个难点问题的设计实现方法。本系统在设计时注重系统的实用性，在关注数据安全性及操作上的个性化设计要求的同时，特别注重了数据收集统一性设计，提供了一套高效的农村住房数据收集的解决方案。本系统的实现为本单位提供了一套高效、通用的农村住房数据管理、灾害预警以及灾情管理为一体综合化的管理平台，挖掘了农村住房数据中潜在功能价值，提高了农村住房综合防灾和减灾能力，并为农村住房防灾指挥决策、咨询提供了文字、数据、图像等形式的基础材料和相关信息，使防灾工作管理更具有了信息化、网络化、高效化和规范化，具有较高的推广使用价值。

关键词：农房信息管理灾害预警灾情管理设计

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科学探究中问题的发现、形成与表述

生物学通报 2011年第7期46卷 42-44页

作者：杨华卢美玉广西师范大学生命科学学院广西桂林541004

探究性学习是指学生以类似于科学家进行科学探究的方式进行学习,是学习生物学知识的重要途径。问题是科学探究的起点,并贯穿于科学探究全过程,也是科学探究活动逐步深入的原动力。通过案例分析,探讨了如何从客观事物中发现并提出有价值... 详细信息

探究性学习是指学生以类似于科学家进行科学探究的方式进行学习,是学习生物学知识的重要途径。问题是科学探究的起点,并贯穿于科学探究全过程,也是科学探究活动逐步深入的原动力。通过案例分析,探讨了如何从客观事物中发现并提出有价值的生物学探究问题以及如何科学准确地表述问题。

关键词：科学探究发现问题提出问题问题表述

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网络环境下计算机课程任务式协作学习的探索与思考

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中国教育技术装备 2008年第20期 146-147页

作者：卢美玉临海市中等职业技术学校

1 前言随着信息技术的发展，计算机多媒体和计算机网络在教学过程中的应用越来越普遍，网络教育时代已悄然而至。如何在网络环境下优化课堂教学设计，培养学生进一步发展收集信息、运用信息和创造信息的能力，成为各学校当前面临的主要... 详细信息

1 前言随着信息技术的发展，计算机多媒体和计算机网络在教学过程中的应用越来越普遍，网络教育时代已悄然而至。如何在网络环境下优化课堂教学设计，培养学生进一步发展收集信息、运用信息和创造信息的能力，成为各学校当前面临的主要问题。计算机课程作为其他学科的基础工具课，在网络环境下的学习模式更是缺乏令人折服的事实让其他学科跟随效仿其成功的范例。

关键词：计算机课程网络环境协作学习信息技术计算机多媒体计算机网络教学过程网络教育

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中职专业课情景教研模式的实施与意义——以中职旅游专业教研为例

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新课程学习(下) 2014年第2期 36-37页

作者：卢美玉浙江省临海市教育局教研室

情景教研模式的实施为中职专业新课改教研提供了一个新的教研模式。以情景教研模式实施的背景分析入手,从情景教研模式实施的过程、阶段目标、内容、步骤及意义等方面详细阐述了中职专业课情景教研模式的可行性与重要性。

关键词：中职专业课情景教研实施背景实施步骤意义

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农村小学作文教学的思考

农村小学作文教学的思考

基于“互联网+”的中职信息技术教学诊改策略探析

2018年“教育教学创新研究”高峰论坛

作者：卢美玉广西全州县城关完小

＜正＞本人是一个从事了二十四年教学工作的语文教师,也是一个地地道道的农村教师,我说不出高深的理论,只是二十四年的一线工作和基层教学给了我许许多多的关于作文教学的思考。一、农村小学生作文现状的调查与思考利用暑假和双休日,我...

＜正＞本人是一个从事了二十四年教学工作的语文教师,也是一个地地道道的农村教师,我说不出高深的理论,只是二十四年的一线工作和基层教学给了我许许多多的关于作文教学的思考。一、农村小学生作文现状的调查与思考利用暑假和双休日,我翻阅了两百多篇农村孩子的作文。放下他们的作文后,我思维万千,心情沉重。我发现:农村低年级学生的作文普遍存在词语贫乏、语言不畅、枯燥乏味的缺点。听同行说,每周到作文,学生们不是三言两语,"一

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来源： cnki会议评论

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中国多媒体与网络教学学报（电子版） 2020年第26期 10-13页

作者：卢美玉临海市中等职业技术学校

随着我国互联网与教育进行教学的深度交融,基于"互联网+"课堂的"教"与"学"有了翻天覆地的改变。该文通过探索"互联网+"与教学的关系,对中职信息技术学科的现行教材、教师的教及学生的学等三个方面展开诊断,并基于此,从教学内容、教学手... 详细信息

随着我国互联网与教育进行教学的深度交融,基于"互联网+"课堂的"教"与"学"有了翻天覆地的改变。该文通过探索"互联网+"与教学的关系,对中职信息技术学科的现行教材、教师的教及学生的学等三个方面展开诊断,并基于此,从教学内容、教学手段、教学模式、教学方法、教学目标及评价体系等六个方面详细阐述了基于"互联网+"的中职信息技术教学的改进策略。它丰富了中职信息技术学科的教学内容,增强了教学手段,拓宽了教学平台,达成了学生核心素养的培育目标。

关键词： “互联网+” 中职信息技术教学诊断改进策略核心素养培育

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“3+3”三段式评价让中职计算机教学更精准

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职业教育 2019年第13期18卷 40-42页

作者：卢美玉临海市教育局教研室

科学有效地进行课堂教学评价已成为现代教学的基本组成部分，它不仅是成功教学的基础，而且是进行各种教育决策的基础。该文以中职计算机“制作中国名河的文本网页”的课堂教学出发，在核心素养的目标统领下，借助信息化平台，运用“3+... 详细信息

科学有效地进行课堂教学评价已成为现代教学的基本组成部分，它不仅是成功教学的基础，而且是进行各种教育决策的基础。该文以中职计算机“制作中国名河的文本网页”的课堂教学出发，在核心素养的目标统领下，借助信息化平台，运用“3+3”三段式评价，实现精准教学，促进中职学生全面发展。

关键词： “3+3”三段式评价中职计算机精准教学核心素养