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干细胞伦理之争的“终结者”——谈诺贝尔生理学与医学奖获得者山中伸弥

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医学争鸣 2013年第5期4卷 18-20,24页

作者：姜英浩张菊卢兹凡第四军医大学药学院药物基因组学教研室陕西西安710032

2012年诺贝尔生理学与医学奖得主日本学者山中伸弥在发现诱导多能干细胞(iPS)之前没有显赫的学术地位,但是他独特的思维方式,敢于挑战科学大问题的胆量,使他在最短时间内一跃成为生命领域的领跑者,开启了再生医学的全新篇章。探寻这位... 详细信息

2012年诺贝尔生理学与医学奖得主日本学者山中伸弥在发现诱导多能干细胞(iPS)之前没有显赫的学术地位,但是他独特的思维方式,敢于挑战科学大问题的胆量,使他在最短时间内一跃成为生命领域的领跑者,开启了再生医学的全新篇章。探寻这位快速登上科学之巅的学者,回顾他的成长经历和伟大科学发现背后的故事,思维灵感会被点燃,创新之奥秘和乐趣也会渗透于心。

关键词：山中伸弥诱导多能干细胞(iPS) 启示

SNP真是黑人血友病患者Ⅷ因子治疗耐药的元凶吗?

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医学争鸣 2010年第2期1卷 37-39页

作者：杨国栋药立波卢兹凡第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032

血友病是一种家族遗传性疾病。凝血因子Ⅷ缺陷是甲型血友病的主要原因,补充Ⅷ因子治疗是当前甲型血友病治疗的关键。然而临床发现有些患者对凝血因子Ⅷ治疗产生抗体,导致治疗失败,其中黑人患者耐药的概率更高。2009年4月16日《新英格兰... 详细信息

血友病是一种家族遗传性疾病。凝血因子Ⅷ缺陷是甲型血友病的主要原因,补充Ⅷ因子治疗是当前甲型血友病治疗的关键。然而临床发现有些患者对凝血因子Ⅷ治疗产生抗体,导致治疗失败,其中黑人患者耐药的概率更高。2009年4月16日《新英格兰医学杂志》(N Engl J Med)发表的一篇题为"黑人血友病患者Ⅷ因子抗体"的论文提出黑人自身Ⅷ因子存在单核甘酸多态性(SNP),而当接受白人Ⅷ因子时,接受的是不同于自身的Ⅷ因子,因而容易产生抗体,导致耐药。本文重新审视了该文的研究方法和结果,提出了自己的观点,期望能够引起同行的争鸣。

关键词：血友病凝血因子Ⅷ 耐药单核苷酸多态性(SNP)

创新教学模式翻转课堂在国外医学本科生教育中的应用现状

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药物生物技术 2019年第5期26卷 427-431页

作者：汪莉向安卢兹凡空军军医大学药学院生物制药学教研室

我国高等教育改革的目的就是要探索新的教学模式,提升创新人才培养水平。作为一种创新型的教学模式,翻转课堂愈来愈被全球广大教育工作者重视,众多高校教师积极参与到这一模式的探索和应用。然而,翻转课堂在高等医学教育尤其是我国的高... 详细信息

我国高等教育改革的目的就是要探索新的教学模式,提升创新人才培养水平。作为一种创新型的教学模式,翻转课堂愈来愈被全球广大教育工作者重视,众多高校教师积极参与到这一模式的探索和应用。然而,翻转课堂在高等医学教育尤其是我国的高等医学教育中的研究及应用报道较少。文章通过检索、阅读Pub Med数据库中2012年6月至2018年12月之间发表的关于翻转课堂在医学本科生教育中的研究文献,对比、分析了翻转课堂相较于传统教学模式的特点,系统综述了国外尤其是发达国家翻转课堂的研究现状及应用效果,总结了医学教育工作者对这一教学模式的评价,并进一步探讨了目前翻转课堂在实践过程中仍然存在的不足,为进一步在国内医学教育中推行这种模式提供参考。

关键词：医学教育创新教学翻转课堂本科生教学模式教学改革

QKI蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第3期23卷 257-259页

作者：黄博于芳王孝功白丽圆李华卢兹凡第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 西安迪赛生物制药有限公司陕西西安710038

目的:获得原核表达的RNA结合蛋白QKI-7蛋白,并制备其兔抗QKI多克隆抗体。方法:将成功插入QKI-7编码区cDNA的PET32b(+)原核表达载体用热休克法转化BL21(DE3)感受态细菌,以IPTG诱导6×His-QKI-7融合蛋白的表达,分别经金属鳌合柱、反向柱... 详细信息

目的:获得原核表达的RNA结合蛋白QKI-7蛋白,并制备其兔抗QKI多克隆抗体。方法:将成功插入QKI-7编码区cDNA的PET32b(+)原核表达载体用热休克法转化BL21(DE3)感受态细菌,以IPTG诱导6×His-QKI-7融合蛋白的表达,分别经金属鳌合柱、反向柱和强阴离子交换柱进行层析纯化。经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,应用纯化的融合蛋白,分别以弗氏佐剂、聚丙烯酰胺凝胶、NC膜作为佐剂免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并以Western blot进行检测。结果:经表达并纯化的QKI-7蛋白纯度达到95%以上,应用纯化的融合蛋白以弗氏佐剂作为佐剂免疫新西兰大白兔后获得高滴度,特异性的抗QKI的多克隆抗体。结论:成功地表达并纯化了QKI-7蛋白,并制备了高滴度、高特异性的抗QKI多克隆抗体。采用弗氏佐剂作为免疫佐剂进行免疫的效果优于聚丙烯酰胺凝胶和NC膜。

关键词： QKI-7 原核表达蛋白纯化多克隆抗体

人骨形成蛋白3在昆虫杆状病毒表达系统中的表达、纯化及其诱骨活性检测

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中国生物化学与分子生物学报 2002年第1期18卷 70-74页

作者：朱帮福卢兹凡陈苏民蒲勤路凡陈南春第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

为了在昆虫杆状病毒系统中表达人骨形成蛋白 3(humanbonemorphogeneticproteoin3,hBMP3) ,检测表达产物的诱骨活性 .将hBMP3全长cDNA 1416bp克隆入转移载体K8中 ,再与病毒DNA经脂质体包裹后转染昆虫细胞Sf9.重组病毒经蓝白筛选后 ,用PC... 详细信息

为了在昆虫杆状病毒系统中表达人骨形成蛋白 3(humanbonemorphogeneticproteoin3,hBMP3) ,检测表达产物的诱骨活性 .将hBMP3全长cDNA 1416bp克隆入转移载体K8中 ,再与病毒DNA经脂质体包裹后转染昆虫细胞Sf9.重组病毒经蓝白筛选后 ,用PCR方法扩增目的基因片段进行初步鉴定 .收集重组病毒的转染上清 ,肝素亲和层析纯化目的蛋白 .SDS PAGE和Western印迹进一步鉴定此蛋白 .体外培养MC3T3 E1细胞 ,经目的蛋白刺激后 ,检测细胞内碱性磷酸酶 (ALP)活性 .并将目的蛋白进行小鼠体内肌肉包埋实验 ,检测其异位诱骨活性 .结果显示 ,肝素亲和层析可以收集 1个高的洗脱峰 .SDS PAGE显示 ,非还原型样本为 32kD的二聚体蛋白带和少量 16kD单体蛋白带 ;还原型样本仅有相应大小的单体蛋白带 ,纯度达 80 % .Western印迹在相应位置呈阳性染色 .此蛋白刺激小鼠成纤维细胞 4 8h后 ,胞内ALP的活性增高 ,经rhBMP3作用后的细胞MTT染色减弱 .在小鼠股部肌肉内包埋蛋白样品 2～ 3周 ,组织学检测有成骨组织生成 .说明hBMP3在此套系统中获得了表达 .表达产物在体外可以刺激成骨细胞的分化 ,却抑制细胞的增殖 .

关键词：杆状病毒人骨形成蛋白3 表达纯化诱骨活性检测

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成骨分化特异性转录因子Cbfa1

国外医学（分子生物学分册） 2001年第2期23卷 88-91页

作者：朱帮福卢兹凡第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

近年来随着 Cbfa1基因的克隆及其功能的阐明 ,人们对成骨分化的分子机制有了初步了解。基因敲除、基因突变等方法证实 Cbfa1作为成骨分化的特异性转录因子 ,对成骨细胞分化。

关键词： Cbfa1 转录因子成骨细胞分化骨发育基因结构蛋白结构

温阳生精汤对肾阳虚不育大鼠睾丸Smads基因表达的调控

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中国中西医结合杂志 2006年第12期26卷 1107-1113页

作者：马静王宗仁卢兹凡李伟赵勇朱华萍张远强第四军医大学西京医院中医科西安710032

目的探讨转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)超家族的细胞内信号内转导分子Smads(mother against dpp)基因腺嘌呤致雄性肾阳虚不育大鼠睾丸中表达的定位和分布及温阳生精汤对Smads基因表达的调控作用。方法将实验... 详细信息

目的探讨转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)超家族的细胞内信号内转导分子Smads(mother against dpp)基因腺嘌呤致雄性肾阳虚不育大鼠睾丸中表达的定位和分布及温阳生精汤对Smads基因表达的调控作用。方法将实验大鼠随机分为3组,分别为正常对照组、肾阳虚不育组和温阳生精汤组。应用免疫组织化学SABC法和半定量RT-PCR法检测实验大鼠睾丸中Smad1、Smad2、Smad4的定位和分布,并通过图像分析系统进行统计学分析;应用放射免疫法测定血清中睾酮(testosteone,T)、促黄体激素(luteinizing hormone,LH)和促卵泡激素(follicle-sti mulating hormone,FSH)含量;同时测定大鼠体重、睾丸和附睾重量及精子数量。结果Smad1和Smad2在实验大鼠睾丸的各级生精细胞中均有表达,其免疫反应阳性物质位于细胞质内,Smad2在支持细胞的胞质内亦可见阳性表达,两者在间质细胞呈阴性反应;Smad4在实验大鼠睾丸间质细胞的胞质内有表达,生精细胞及支持细胞呈阴性反应。肾阳虚不育组大鼠睾丸中Smad1的表达明显低于正常对照组(P0.05);温阳生精汤组大鼠体重和精子数量较肾阳虚不育组显著增加;血清T水平增加,FSH、LH水平降低(P<0.05)。结论温阳生精汤不仅能够通过提高肾阳虚不育大鼠血清中T水平,降低FSH和LH水平,增加大鼠的精子数量;而且可以通过调控大鼠睾丸中TGF-β超家族的细胞内信号转导分子Smads基因的表达水平,直接或间接地影响T、FSH和LH水平,促进精子生成,达到治疗男性不育的目的。

关键词：温阳生精汤 Smads 肾阳虚不育睾丸

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人Qki-5基因重组腺病毒的制备

细胞与分子免疫学杂志 2008年第6期24卷 644-646页

作者：白丽园于芳傅海燕杨国栋张杰晋亮卢兹凡第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032

目的:构建针对Qki-5人重组腺病毒表达载体,并在能在转染该病毒的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中观察到该基因过表达效果。方法:重组腺病毒穿梭载体pShuttle-Qki-5-IRES-EGFP与骨架载体共转化到大肠杆菌BJ5183中,同源重组得到重组腺病毒载体... 详细信息

目的:构建针对Qki-5人重组腺病毒表达载体,并在能在转染该病毒的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中观察到该基因过表达效果。方法:重组腺病毒穿梭载体pShuttle-Qki-5-IRES-EGFP与骨架载体共转化到大肠杆菌BJ5183中,同源重组得到重组腺病毒载体,后者转染HEK293细胞,包装并扩增出病毒颗粒。用获得的病毒感染Qki-5表达较低的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,收集细胞总RNA和总蛋白,采用RT-PCR和Westernblot方法检测细胞中基因表达的变化。结果:经限制性内切酶酶切鉴定,证实针对Qki-5基因的重组腺病毒载体构建成功。RT-PCR和Westernblot方法证实,在MDA-MB-231细胞中,Qki-5基因在mRNA和蛋白水平均有上升。结论:Qki-5腺病毒载体够建成功并且可以在乳腺癌细胞MDA-MB-231内表达。

关键词： Qki-5 腺病毒乳腺癌

人骨形成蛋白2在昆虫杆状病毒表达系统中的表达及初步鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 1999年第3期15卷 170-172页

作者：卢兹凡陈苏民陈南春路凡余清第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

目的:研究hBMP2在昆虫杆状病毒系统中的表达规律。方法:将编码hBMP2的全长cDNA克隆入转移载体PK8中,重组后的载体与线性化的病毒DNA经脂质体包裹转染昆虫细胞。重组病毒经蓝白筛选后,提取病毒DNA进行PCR扩增,鉴定目的基因。收集重组病... 详细信息

目的:研究hBMP2在昆虫杆状病毒系统中的表达规律。方法:将编码hBMP2的全长cDNA克隆入转移载体PK8中,重组后的载体与线性化的病毒DNA经脂质体包裹转染昆虫细胞。重组病毒经蓝白筛选后,提取病毒DNA进行PCR扩增,鉴定目的基因。收集重组病毒感染4d的细胞,进行免疫荧光及电子显微镜观察。结果:含有目的基因的重组载体经酶切可切下相应大小的目的基因片段。PCR产物的电泳结果表明,有目的基因片段的扩增。免疫荧光染色呈阳性的颗粒分布在昆虫细胞的胞浆及胞膜。结论:初步证实,hBMP2在此套表达系统中获得了表达。

关键词：杆状病毒骨形成蛋白表达鉴定