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洋地黄类药物诱导人乳腺癌细胞自噬及相关激酶信号通路的研究

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洋地黄类药物诱导人乳腺癌细胞自噬及相关激酶信号通路的研究

2013医学前沿论坛暨第十三届全国肿瘤药理与化疗学术会议

作者：占跃晨王真北京协和医学院医药生物技术研究所

目的我们以前的研究发现洋地黄类(cardiotonic steroids,CSs)药物能诱导人肺癌细胞发生自噬性死亡,但该类药物是否诱导其他肿瘤细胞发生自噬,目前尚不清楚。本研究的目的旨在探讨CSs诱导人乳腺癌细胞发生自噬的条件及相关的AMPK、Src及E... 详细信息

目的我们以前的研究发现洋地黄类(cardiotonic steroids,CSs)药物能诱导人肺癌细胞发生自噬性死亡,但该类药物是否诱导其他肿瘤细胞发生自噬,目前尚不清楚。本研究的目的旨在探讨CSs诱导人乳腺癌细胞发生自噬的条件及相关的AMPK、Src及ERK1/2等激酶在其中的调控作用。

关键词：洋地黄类药物人乳腺癌细胞自噬激酶活性氧自由基

红景天苷调节人成骨肉瘤细胞MG63成骨分化及相关信号的研究

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红景天苷调节人成骨肉瘤细胞MG63成骨分化及相关信号的研究

第三届中国药理学会补益药药理专业委员会学术研讨会

作者：占跃晨王真北京协和医学院医药生物技术研究所

目的我们前期研究发现红景天苷(salidroside,SAL)是潜在的骨形成蛋白-2(bone morphogenetic proteins-2,BMP2)激活剂,本研究旨在探讨SAL对人成骨肉瘤细胞株MG63的成骨分化作用及相关分子机制。方法 MTT法测定SAL对MG63细胞增殖活力的影... 详细信息

目的我们前期研究发现红景天苷(salidroside,SAL)是潜在的骨形成蛋白-2(bone morphogenetic proteins-2,BMP2)激活剂,本研究旨在探讨SAL对人成骨肉瘤细胞株MG63的成骨分化作用及相关分子机制。方法 MTT法测定SAL对MG63细胞增殖活力的影响;PNPP法检测成骨性标志物—碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性的变化;RT-PCR检测细胞内bmp2 mRNA水平的变化;Western blot及流式细胞术检测给药前后细胞内BMP2、IκBα蛋白表达水平的变化。结果 SAL能显著促进MG63细胞的增殖并上调其ALP活性,其上调ALP活性呈现一定的时间和剂量依赖性,在5μM、48h条件下表现出最佳效果,证明其具有促成骨分化作用;SAL能显著上调细胞内BMP2 mRNA及蛋白表达水平,并能时间依赖性激活IκBα,抑制NF-κB活性。结论 SAL能促进成骨分化,具有潜在的抗骨质疏松作用,其作用机制可能与抑制NF-κB活性并激活BMP2信号通路有关。

关键词：红景天苷人成骨肉瘤细胞 ALP BMP2 成骨分化

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哇巴因诱导MCF-7自噬作用与机制探讨

中华肿瘤防治杂志 2014年第19期21卷 1485-1489页

作者：占跃晨张晶沙明泉赵晓丽司书毅王真中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所生化室北京100050

目的探讨哇巴因诱导人乳腺癌细胞MCF-7发生自噬的作用以及分子机制。方法 MTT法和克隆形成实验测定哇巴因对MCF-7细胞增殖活力及克隆形成能力的影响,吖啶橙染色结合荧光显微镜及流式细胞术观测细胞内形态的变化及FL3/FL1荧光强度比值,... 详细信息

目的探讨哇巴因诱导人乳腺癌细胞MCF-7发生自噬的作用以及分子机制。方法 MTT法和克隆形成实验测定哇巴因对MCF-7细胞增殖活力及克隆形成能力的影响,吖啶橙染色结合荧光显微镜及流式细胞术观测细胞内形态的变化及FL3/FL1荧光强度比值,蛋白质印迹法检测细胞内抗微管相关蛋白1轻链3(Light chain 3,LC3)-Ⅱ及p62蛋白表达水平的变化,流式细胞术检测细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平的变化。结果哇巴因处理MCF-7细胞24h后半数抑制浓度(IC50)为(37.1±9.0)nmol/L。25nmol/L哇巴因处理12、24、48和72h后细胞存活率组间F=12.787,P<0.001;与对照组比较差异均有统计学意义,P值均<0.01。哇巴因处理2周后给药组较对照组相对克隆形成率降至(6.03±1.51)%,差异有统计学意义,F=635.800,P<0.001。吖啶橙染色及蛋白质印迹结果显示,经25nmol/L哇巴因处理48h后,胞质中出现呈亮红色荧光的酸性囊泡,并伴随LC3-Ⅱ呈时间依赖性的蓄积及p62表达的下降;在12、24和48h时,相对FL3/FL1比值组间F=62.226,P<0.001;与对照组比较差异均有统计学意义,P值均<0.05。哇巴因能同时引起细胞内ROS水平呈时间依赖性升高;0.5、1、2、4、6、12和24h时ROS水平组间F=112.901,P<0.001;与对照组比较,除0.5h组差异无统计学意义外,其余各组均差异有统计学意义,P值均<0.05;给药同时使用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)后,联合给药组较给药组相对ROS水平降低至(101.2±17.5)%,与给药组比较差异有统计学意义,F=185.870,P<0.001;并且LC3-Ⅱ表达水平随之下降,而IC50值增加为(81.4±4.5)nmol/L,差异有统计学意义,F=57.610,P<0.01。结论哇巴因能够诱导人乳腺癌MCF-7细胞发生自噬,其作用机制可能与促进细胞内ROS生成有关。

关键词：哇巴因人乳腺癌细胞自噬抗肿瘤作用活性氧自由基

哇巴因诱导肿瘤细胞自噬及相关激酶信号通路的研究

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哇巴因诱导肿瘤细胞自噬及相关激酶信号通路的研究

第八届中国肿瘤学术大会暨第十三届海峡两岸肿瘤学术会议

作者：占跃晨王燕邵荣光王真中国医学科学院＆北京协和医学院医药生物技术研究所

＜正＞目的探讨哇巴因诱导人非小细胞肺癌A549和人乳腺癌细胞MCF-7发生自噬的条件及相关AMPK、Src及ERK1/2等激酶在其中的调控作用。方法 MTT法及克隆形成实验检测哇巴因对肿瘤细胞的生长抑制情况;吖啶橙染色后,分别采用荧光显微镜和流... 详细信息

＜正＞目的探讨哇巴因诱导人非小细胞肺癌A549和人乳腺癌细胞MCF-7发生自噬的条件及相关AMPK、Src及ERK1/2等激酶在其中的调控作用。方法 MTT法及克隆形成实验检测哇巴因对肿瘤细胞的生长抑制情况;吖啶橙染色后,分别采用荧光显微镜和流式细胞术定性及定量检测药物诱导自噬的变

关键词：肿瘤细胞自噬行为哇巴因激酶信号通路诱导机制

人骨肉瘤肿瘤起始细胞与骨肉瘤肿瘤形成细胞的鉴定

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人骨肉瘤肿瘤起始细胞与骨肉瘤肿瘤形成细胞的鉴定

2011医学科学前沿论坛第十二届全国肿瘤药理与化疗学术会议

作者：应美丹司梅梅钱石静闫优优占跃晨杨波何俏军浙江大学药学院药理毒理与生化药学研究所

目的:对人骨肉瘤肿瘤起始细胞以及骨肉瘤肿瘤形成细胞进行分离和鉴定,为针对骨肉瘤干细胞的治疗策略研究提供理论依据和实验数据,最终提高骨肉瘤的临床治疗水平。方法与结果:(1)将人骨肉瘤细胞株U2OS细胞连续3代接种于裸小鼠的实验结果... 详细信息

目的:对人骨肉瘤肿瘤起始细胞以及骨肉瘤肿瘤形成细胞进行分离和鉴定,为针对骨肉瘤干细胞的治疗策略研究提供理论依据和实验数据,最终提高骨肉瘤的临床治疗水平。方法与结果:(1)将人骨肉瘤细胞株U2OS细胞连续3代接种于裸小鼠的实验结果表明,经裸小鼠激活的3代骨肉瘤细胞移植瘤平均形成时间分别为:第一代细胞10U2OS:72d;第二代细胞10UT1:14d

关键词：骨肉瘤肿瘤细胞形成细胞鉴定临床治疗

小檗碱的药理作用及其治疗代谢综合征的分子机制

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国际老年医学杂志 2014年第4期35卷 167-171页

作者：占跃晨陈金晶高瑞娟李电东王真中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所中国北京100050

小檗碱是一种从中草药黄连等植物中提取分离的异喹啉类生物碱，具有抗菌、抗寄生虫、抗肿瘤、免疫调节、降血糖、降血脂及抗血小板聚集等多种生物活性。近年研究发现，小檗碱能通过同时作用于低密度脂蛋白受体（ LD-LR）和胰岛素受体（ ... 详细信息

小檗碱是一种从中草药黄连等植物中提取分离的异喹啉类生物碱，具有抗菌、抗寄生虫、抗肿瘤、免疫调节、降血糖、降血脂及抗血小板聚集等多种生物活性。近年研究发现，小檗碱能通过同时作用于低密度脂蛋白受体（ LD-LR）和胰岛素受体（ InsR），达到治疗代谢综合征的临床疗效。本文主要对小檗碱的药理作用、特别是小檗碱治疗代谢综合征的分子机制及其化学基础进行阐述，为其进一步研究和开发提供理论依据。

关键词：小檗碱代谢综合征分子机制

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mTOR信号通路与衰老

国际老年医学杂志 2013年第5期34卷 212-217页

作者：陈金晶占跃晨高瑞娟邓洪斌李电东王真中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所中国北京100050

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）是一种进化上十分保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,能对氨基酸、应激、氧、能量和生长因子等信号作出应答,并将信号传导到下游,最终调节细胞的生长和增殖.近几年研究发现,降... 详细信息

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）是一种进化上十分保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,能对氨基酸、应激、氧、能量和生长因子等信号作出应答,并将信号传导到下游,最终调节细胞的生长和增殖.近几年研究发现,降低无脊椎模式生物中TOR通路的活性可增加寿命,雷帕霉素可延长实验鼠的寿命。

关键词： mTOR 信号通路衰老

红景天苷调节人成骨肉瘤细胞MG63成骨分化及相关信号的研究

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中国医药生物技术 2013年第6期8卷 414-419页

作者：占跃晨张立鹏毛根祥贺晓波司书毅王真中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所生化室北京100050 煤炭总医院血液科北京100028 浙江省老年医学研究所杭州310013 国家新药(微生物)筛选实验室北京100050

目的探讨红景天苷对人成骨肉瘤细胞株MG63诱导成骨分化作用及相关分子机制。方法 MTT法测定不同浓度红景天苷对MG63细胞增殖活力的影响;PNPP法检测经红景天苷处理后成骨性标志物——碱性磷酸酶活性的变化;RT-PCR检测细胞内bmp2 mRNA水... 详细信息

目的探讨红景天苷对人成骨肉瘤细胞株MG63诱导成骨分化作用及相关分子机制。方法 MTT法测定不同浓度红景天苷对MG63细胞增殖活力的影响;PNPP法检测经红景天苷处理后成骨性标志物——碱性磷酸酶活性的变化;RT-PCR检测细胞内bmp2 mRNA水平的变化;Western blot及流式细胞术检测给药前后细胞内BMP2、IκBα蛋白表达水平的变化。结果红景天苷能显著促进MG63细胞的增殖并上调其ALP活性,其对ALP活性的上调呈现一定的时间和剂量依赖性,其中在5μmol/L、48 h条件下表现出最佳效果,证明红景天苷具有促成骨分化作用。此外,红景天苷能显著上调细胞内bmp2 mRNA及蛋白表达水平,并能时间依赖性激活IκBα,抑制NF-κB活性。结论红景天苷能促进人成骨肉瘤细胞成骨分化,具有潜在的骨代谢调节作用,其作用机制可能与抑制NF-κB活性并激活BMP2信号通路有关。

关键词：碱性磷酸酶骨形态发生蛋白质类 NF-κB 红景天苷

哇巴因对乳腺癌MCF7细胞能量代谢的影响研究

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中国医药生物技术 2018年第1期13卷 19-23页

作者：申佳佳占跃晨王燕李会英蒋建东王真中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 中国医学科学院北京协和医学院药物研究所北京100050

目的检测哇巴因对人乳腺癌MCF7细胞能量代谢的影响,初步探索相关作用机制。方法联合使用ATP检测系统及海马生化分析仪检测哇巴因作用后细胞内ATP水平及线粒体呼吸作用的变化;使用葡萄糖氧化酶法检测哇巴因对MCF7细胞葡萄糖吸收水平的影... 详细信息

目的检测哇巴因对人乳腺癌MCF7细胞能量代谢的影响,初步探索相关作用机制。方法联合使用ATP检测系统及海马生化分析仪检测哇巴因作用后细胞内ATP水平及线粒体呼吸作用的变化;使用葡萄糖氧化酶法检测哇巴因对MCF7细胞葡萄糖吸收水平的影响;使用AMPK活性检测探针检测AMPK活性的变化;通过Western blot实验初步检测哇巴因对MCF7细胞内相关激酶蛋白水平的影响。结果哇巴因能够时间依赖性地降低MCF7细胞内ATP水平,剂量依赖性地降低线粒体呼吸作用,同时25~50 nmol/L的哇巴因作用24 h后能够促进葡萄糖吸收。该化合物可激活AMPK活性,在12 h表现出最佳活性。Western blot实验结果证实哇巴因能够升高AMPK和底物蛋白乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的磷酸化水平,抑制Na+/K+-ATP酶α1亚型(NKAα1)的表达。结论哇巴因可抑制人乳腺癌MCF7细胞的线粒体氧化呼吸作用,促进糖酵解。哇巴因对肿瘤代谢的影响可能与其调控AMPK活性有关。

关键词：哇巴因糖酵解乳腺癌细胞线粒体氧化呼吸