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成人骨髓间充质干细胞体外多向分化潜能特性的研究

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中国危重病急救医学 2005年第2期17卷 95-97页

作者：常颖齐欣卜丽莎徐忠信吉林大学中日联谊医院神经内科 130031 吉林大学第一医院骨科 130021 吉林大学第一医院神经内科 30021

目的　研究体外不同诱导条件下成人骨髓间充质干细胞向成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞分化的能力。方法　用细胞化学方法对诱导后的骨髓细胞进行脂肪细胞特异油红 O染色 ;Von Kossa及改良的钙钴法进行成骨细胞鉴定 ;免疫组化方法检测诱... 详细信息

目的　研究体外不同诱导条件下成人骨髓间充质干细胞向成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞分化的能力。方法　用细胞化学方法对诱导后的骨髓细胞进行脂肪细胞特异油红 O染色 ;Von Kossa及改良的钙钴法进行成骨细胞鉴定 ;免疫组化方法检测诱导后的骨髓细胞神经元特异性烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 M(NF M)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)表达。结果　在不同的诱导条件下 ,诱导后的细胞油红 O染色胞浆内可见橙红色脂滴 ;Von Kossa染色可见细胞间布满黑色颗粒 ,提示有矿化基质沉积 ;改良钙钴法碱性磷酸酶染色胞浆呈深棕色或深黑色。免疫组化染色显示向神经细胞方向诱导后细胞 NSE(+)、NF M(+)、GFAP(- )。结论　成人骨髓间充质干细胞在体外具有多向分化的潜能。

关键词：骨髓间充质干细胞体外多向分化神经细胞脂肪细胞成骨细胞 MSCs

成人骨髓间充质干细胞生长特性及bFGF对其增殖的影响

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吉林大学学报（医学版） 2005年第1期31卷 48-51页

作者：常颖齐欣卜丽莎徐忠信杨宏吉林大学中日联谊医院神经内科吉林长春130031 吉林大学第一医院骨科吉林长春130021 吉林大学中日联谊医院中心研究室吉林长春130031

目的 :研究成人骨髓间充质干细胞 (h MSC)生长特性、 h MSC表面标记及 b FGF对 h MSC增殖的影响。方法 :绘制细胞生长曲线 ;流式细胞仪检测细胞表面标记 ;MTT法检测 b FGF对 h MSC增殖的影响。结果 :原代培养细胞生长潜伏期 5～ 9d,对... 详细信息

目的 :研究成人骨髓间充质干细胞 (h MSC)生长特性、 h MSC表面标记及 b FGF对 h MSC增殖的影响。方法 :绘制细胞生长曲线 ;流式细胞仪检测细胞表面标记 ;MTT法检测 b FGF对 h MSC增殖的影响。结果 :原代培养细胞生长潜伏期 5～ 9d,对数增殖期 11～ 16 d,生长平台期 18～ 2 0 d;传代培养细胞生长潜伏期12～ 2 4 h,对数增殖期为 7～ 10 d,11～ 13d进入细胞生长平台期。 h MSC均一表达 CD4 4 ,不表达 CD4 5。 b FGF在较低浓度 (10μg· L- 1 )时即有显著的促进 h MSC增殖的作用 (P<0 .0 5 ) ,b FGF在 2 5～ 10 0μg· L- 1 对 h MSC的 AL P活性有较显著的抑制作用。结论 :h MSC在体外可迅速扩增 ;b FGF对 h MSC的增殖作用与浓度成正性剂量 -效应关系。

关键词：骨髓间充质干细胞成纤维细胞生长因子2 流式细胞术/方法细胞分离扩增

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氟化钠对体外培养大鼠破骨细胞的影响

吉林大学学报（医学版） 2002年第2期28卷 115-116页

作者：华坤卜丽莎李广生吉林大学生物工程研究所病理研究室吉林长春130021 吉林大学中日联谊医院中心研究室

目的 :探讨氟对体外培养的破骨细胞的作用。方法 :体外分离培养大鼠乳鼠四肢长骨破骨细胞 ,于分离后 2 h加入氟化钠 ( Na F) 4、6、8和 1 0 mg· L-1,对其进行形态学的动态观察。结果 :破骨细胞形态多样 ,含多个核 ,体外培养存活时间短 ... 详细信息

目的 :探讨氟对体外培养的破骨细胞的作用。方法 :体外分离培养大鼠乳鼠四肢长骨破骨细胞 ,于分离后 2 h加入氟化钠 ( Na F) 4、6、8和 1 0 mg· L-1,对其进行形态学的动态观察。结果 :破骨细胞形态多样 ,含多个核 ,体外培养存活时间短 ,2 4 h大部分细胞凋亡。加入 Na F后 ,破骨细胞数目减少 ,体积变小 ,空泡增多 ,甚至崩解坏死。结论 :在一定的剂量和时间范围内。

关键词：破骨细胞氟化钠体外细胞培养动物实验地方性氟中毒

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过氧化氢对培养心肌细胞损伤作用的研究

生物化学与生物物理进展 2000年第6期27卷 628-632页

作者：曹纯章卜丽莎高申杨同书长春白求恩医科大学第三临床学院中心研究室长春130031 长春白求恩医科大学基础医学研究所长春130031

氧化应激时产生大量的自由基 ,造成心肌细胞的损伤 .过氧化氢 (H2 O2 )是有机体氧化代谢产物 ,同时是一种活性氧 .应用不同浓度的H2 O2 ,分别于不同作用时间 ,动态观察其对心肌细胞的损伤作用 .从实验结果看到 ,低浓度的H2 O2 (<0 1mmo... 详细信息

氧化应激时产生大量的自由基 ,造成心肌细胞的损伤 .过氧化氢 (H2 O2 )是有机体氧化代谢产物 ,同时是一种活性氧 .应用不同浓度的H2 O2 ,分别于不同作用时间 ,动态观察其对心肌细胞的损伤作用 .从实验结果看到 ,低浓度的H2 O2 (<0 1mmol/L)作用 2h ,使心肌细胞产生早期的生物化学的改变 ,如MDA产生堆积和细胞周期时相改变 (G1期细胞增加 ,G2期细胞减少 ) ,此时心肌酶基本无泄漏 ,心肌细胞的死亡率很低 ,HE形态学观察基本无改变 ;随着H2 O2 浓度的增加 (1～ 5mmol/L)和作用时间的延长 ,进一步诱导细胞损伤加剧 ,LDH释放和MDA积累明显升高 ,细胞死亡率也明显增加 ,已具有统计学意义 .同时可观察到其病理形态学的坏死性改变 ;当 10mmol/LH2 O2 作用时 ,细胞大量死亡 ,形态学可见细胞极度收缩、脱落 ,形成大面积的细胞脱失区 .因此 ,H2 O2 作为一种活性氧自由基 ,依其浓度和作用时间不同可造成不同程度的心肌细胞的损伤 .辣根过氧化物酶作为一种自由基清除剂 ,可明显减少H2 O2

关键词：活性氧自由基过氧化氢(H_(2)O_(2)) 心肌细胞抗氧化剂

体外诱导成人骨髓间充质干细胞转化为神经元细胞的实验研究

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中国老年学杂志 2005年第3期25卷 261-263页

作者：常颖卜丽莎齐欣吉林大学中日联谊医院神经内科吉林长春130033 吉林大学中日联谊医院中心研究室吉林长春130033

目的探讨成人骨髓间充质干细胞(hMSCs)在体外特定的诱导条件下,转化为神经元细胞的规律、效率及长期存活的条件。方法采用β巯基乙醇为诱导剂,在体外诱导6h后,改用诱导维持液使诱导后的细胞在诱导维持液中存活6d。用细胞化学及免疫组织... 详细信息

目的探讨成人骨髓间充质干细胞(hMSCs)在体外特定的诱导条件下,转化为神经元细胞的规律、效率及长期存活的条件。方法采用β巯基乙醇为诱导剂,在体外诱导6h后,改用诱导维持液使诱导后的细胞在诱导维持液中存活6d。用细胞化学及免疫组织化学、Westernblot方法检测神经元细胞、星形胶质细胞标记蛋白的表达。结果诱导6h,诱导后的细胞尼氏染色胞浆中可见深蓝色的尼氏体形成;细胞表达NSE、NFM,而不表达GFAP;NSE、NFM阳性细胞数超过80%以上。Westernblot结果显示诱导6h,诱导后的细胞表达Nestin,而无MAP2的表达,随着时间的延长,Nestin的表达逐渐减少,而出现了MAP2的表达。结论β巯基乙醇在体外可定向诱导hMSCs经神经干细胞转化为神经元细胞,而且诱导后的神经元细胞逐渐趋于成熟。

关键词：骨髓间充质干细胞神经元细胞分化细胞移植

STZ小剂量多次注射诱导大鼠胰岛素依赖性糖尿病动物模型探讨

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白求恩医科大学学报 2001年第6期27卷 578-580页

作者：刘霆张桂珍卜丽莎牟明威吉林大学中日联谊医院中心研究室吉林长春130031 吉林大学第一医院骨科

目的 :探索一种应用于糖尿病研究中理想的动物模型。方法 :腹腔注射 30 mg/kg的链脲佐菌素 (STZ) ,每周一次连续 4周 ,诱导大鼠产生慢性自身免疫胰岛损害 ,观察血糖、尿糖及组织学损害。结果 :实验组大鼠产生明显迟发性胰岛损害 ,尿糖阳... 详细信息

目的 :探索一种应用于糖尿病研究中理想的动物模型。方法 :腹腔注射 30 mg/kg的链脲佐菌素 (STZ) ,每周一次连续 4周 ,诱导大鼠产生慢性自身免疫胰岛损害 ,观察血糖、尿糖及组织学损害。结果 :实验组大鼠产生明显迟发性胰岛损害 ,尿糖阳性 ,血糖与对照组有明显差别 ,组织学表现为自身免疫性胰岛炎特征。结论 :STZ小剂量多次注射诱导大鼠胰岛素依赖性糖尿病 (IDDM)动物模型适用于糖尿病发病机理的研究。

关键词：链脲佐菌素糖尿病动物模型剂量

稳定高效表达p21WAF1/CIP1蛋白的Hela细胞株的建立

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吉林大学学报（医学版） 2004年第1期30卷 49-51页

作者：侯治富卜丽莎董贵福王维忠郑斐吉林大学中日联谊医院中心实验室吉林长春130031 吉林省靖宇县医院儿科吉林大学

目的 :建立高效、稳定表达 p2 1 WAF1 / CIP1人宫颈癌细胞株 Hela- pc DNA 3- WAF1。方法 :应用脂质体 (lipofectin)将质粒 pc DNA3和重组质粒 pc DNA3- WAF1分别转入人宫颈癌细胞系 Hela细胞 ;经 G4 1 8筛选 ,转染阳性细胞连续传代培... 详细信息

目的 :建立高效、稳定表达 p2 1 WAF1 / CIP1人宫颈癌细胞株 Hela- pc DNA 3- WAF1。方法 :应用脂质体 (lipofectin)将质粒 pc DNA3和重组质粒 pc DNA3- WAF1分别转入人宫颈癌细胞系 Hela细胞 ;经 G4 1 8筛选 ,转染阳性细胞连续传代培养 ,并应用免疫荧光技术监测重组基因 p2 1 WAF1 / CIP1翻译水平的表达活性。结果 :经G4 1 8筛选 ,Hela细胞全部死亡 ,转染质粒 pc DNA3和重组质粒 pc DNA 3- WAF1的 Hela细胞存活 ,并可连续传代培养 30代 ;免疫荧光技术监测 p2 1 WAF1 / CIP1表达结果显示 :转染重组质粒 pc DNA3- WAF1的 Hela细胞p2 1 WAF1 / CIP1表达阳性细胞率 (92 .83% )显著高于转染质粒 pc DNA3(1 2 .2 6 % )和 Hela细胞组 (5 .6 3% )(F=1 72 1 8.2 2 ,P0 .0 5 )。结论 :建立一株高效、稳定表达 p2 1 WAF1 /CIP1人宫颈癌细胞株 Hela- pc DNA3- WAF1。

关键词： p21WAF1/CIP1 Hela细胞脂质体基因转移技术

P^(21/waf1/cip1)在U937细胞分化过程中的表达

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吉林大学学报（医学版） 2002年第4期28卷 349-351页

作者：侯治富杜珍武卜丽莎高申郑德明吉林大学中日联谊医院中心研究室吉林长春130031

目的 :探讨 P2 1/ waf1/ cip1在 U937细胞分化中表达情况。方法 :用佛波脂 ( PMA)诱导 U937细胞向单核 -巨噬细胞分化 ,经流式细胞术测定细胞 P2 1/ waf1/ cip1基因表达及细胞周期的变化。用倒置显微镜观察细胞分化的形态学变化。结果 :... 详细信息

目的 :探讨 P2 1/ waf1/ cip1在 U937细胞分化中表达情况。方法 :用佛波脂 ( PMA)诱导 U937细胞向单核 -巨噬细胞分化 ,经流式细胞术测定细胞 P2 1/ waf1/ cip1基因表达及细胞周期的变化。用倒置显微镜观察细胞分化的形态学变化。结果 :U937细胞向单核 -巨噬细胞分化过程中细胞由分散和悬浮转变为粘附和贴壁 ,呈现了 P2 1/ waf1/ cip1高度表达 ,同时细胞周期停滞于 G1和 G2 /M期 ,无细胞凋亡。结论 :P2 1/ waf1/ cip1在 U937细胞分化过程中有高表达 ,并伴随细胞周期变化。

关键词： P^21/waf1/cip1基因细胞分化单核细胞单核-巨噬细胞肿瘤病理学流式细胞术

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同源盒基因在胶质瘤细胞中的表达

中国肿瘤临床 2002年第6期29卷 418-420页

作者：杨朝华田宇卜丽莎赵丛海任同广西壮族自治区北海市人民医院神经外科吉林大学中日联谊医院神经外科长春市130031

目的:观察胶质瘤细胞C6中同源盒基因(Hox基因组)的表达,及苯乙酸(PA)对Hox基因组表达的影响。方法:体外培养C6细胞并用PA诱导分化,提取细胞RNA。用Hox基因三对简并引物P1、P2和P3进行逆转录PCR(RT-PCR)。通过计算机图像分析,Hox基因组m... 详细信息

目的:观察胶质瘤细胞C6中同源盒基因(Hox基因组)的表达,及苯乙酸(PA)对Hox基因组表达的影响。方法:体外培养C6细胞并用PA诱导分化,提取细胞RNA。用Hox基因三对简并引物P1、P2和P3进行逆转录PCR(RT-PCR)。通过计算机图像分析,Hox基因组mRNA的表达水平用Hox基因(组)/β-肌动蛋白(β-actin)灰度比值表示。应用PA前后基因表达的差异用t检验分析。结果:在胶质瘤细胞C6中,P1、P2和P3组Hox基因表达分别为0.8817±0.0731(n=16),0.6825±0.0987(n=9),0.8608±0.0881(n=16);应用PA后,分别为:0.8765±0.0667(n=8),0.8386±0.0811(n=14),0.8937±0.0598(n=11)。应用PA后,P2组Hox基因表达显著增强,与用药前比较,差异显著(P<0.001)。结论:在胶质瘤C6细胞中,PA对P2组Hox基因mRNA水平的表达有明显的上调作用。PA的作用机理与调节胶质瘤细胞转录过程可能有关。

关键词：表达苯乙酸胶质瘤同源盒基因