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新城疫病毒通过抑制树突状细胞白介素12的表达抑制抗原递呈（英文）

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Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology) 2024年第3期 254-275页

作者：南福龙南文龙焉鑫王惠江莎莎张树芸于忠杰张现娟刘俸君李俊周晓琼牛德磊李一权汪伟史宁金宁一解长占崔晓妮张赫王斌鲁会军青岛大学基础医学院特种医学系中国动物卫生与流行病学中心青岛华赛伯曼医学细胞生物有限公司长春中医药大学院士工作站温州大学病毒学研究所吉林大学动物医学学院中国农业科学院长春兽医研究所

新城疫病毒作为一种极具潜力的疫苗载体，已被应用于多种疫苗的开发，但目前对于该病毒在抗原提呈中免疫调节作用的研究较少。为阐明新城疫病毒感染的树突状细胞与T淋巴细胞相互作用时的关键抑制因子，本研究将新城疫病毒疫苗LaSota株... 详细信息

新城疫病毒作为一种极具潜力的疫苗载体，已被应用于多种疫苗的开发，但目前对于该病毒在抗原提呈中免疫调节作用的研究较少。为阐明新城疫病毒感染的树突状细胞与T淋巴细胞相互作用时的关键抑制因子，本研究将新城疫病毒疫苗LaSota株作为抑制剂对树突状细胞进行预处理，并用细菌脂多糖刺激树突状细胞的活化，通过采用酶联免疫吸附法（ELISA）、流式细胞术、免疫印迹和荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测相关指标的变化。结果表明，新城疫病毒感染通过p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）依赖的方式抑制树突状细胞中白介素12p40(IL-12p40)亚基的表达，从而抑制IL-12的活性单位IL-12p70的合成，致使树突状细胞诱导的T细胞增殖和γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和6型白介素（IL-6）分泌下降。同时，细胞因子的下调促进了新城疫病毒从树突状细胞向T淋巴细胞的传播。此外，不同毒力型的新城疫病毒均表现出抑制活性。综上所述，新城疫病毒可以调节多种免疫细胞互作的强度，从而促进病毒的增殖与传播。因此，本研究揭示了一种新城疫病毒的新型免疫抑制机制，同时也为新城疫病毒载体疫苗的改进提供了新的思路。

关键词：新城疫病毒树突状细胞白介素12 T淋巴细胞免疫抑制

牛结核病荧光定量PCR引物探针的组合筛选比较

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中国动物检疫 2024年第08期 105-111页

作者：毛迎雪亓菲张皓博曲瑶南文龙刘蒙达苏华彬姜志强刘建柱孙淑芳胡莉萍樊晓旭中国动物卫生与流行病学中心国家动物结核病参考实验室农业农村部反刍动物重大疫病防控重点实验室山东农业大学动物科技学院青岛农业大学动物医学院东北农业大学动物医学学院山东省动物疫病预防控制中心

为比较牛结核病荧光定量PCR（qPCR）不同引物探针组合的特异性和敏感性,验证其临床检测效果,选取国际、国家、行业、地方标准及文献报道的11组qPCR鉴定引物探针组合,采用牛分枝杆菌基因组DNA国家二级标准物质、参考菌株核酸和临床奶样... 详细信息

为比较牛结核病荧光定量PCR（qPCR）不同引物探针组合的特异性和敏感性,验证其临床检测效果,选取国际、国家、行业、地方标准及文献报道的11组qPCR鉴定引物探针组合,采用牛分枝杆菌基因组DNA国家二级标准物质、参考菌株核酸和临床奶样对其进行比较、验证。结果显示:11组引物探针均无非特异性扩增,表现出良好的特异性;国标IS1081引物检测灵敏度最高,最低检测限可达1.4×10-1;除国标Mtb（结核分枝杆菌）引物外,其他引物探针组合重复性良好（CV<10%）;30份临床样品中国标IS1081引物阳性样品检出率明显高于其他引物。结果表明,国标IS1081引物探针组合特异、灵敏、临床检测效果更优,推荐用于实验室qPCR检测牛结核病。

关键词：牛结核病结核分枝杆菌复合群牛分枝杆菌荧光定量PCR 引物探针

重组酶介导等温扩增技术(RAA)在病原微生物检测中的应用进展

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中国动物检疫 2024年第1期41卷 60-66页

作者：毛迎雪刘蒙达张皓博曲瑶南文龙苏华彬刘建柱孙淑芳胡莉萍樊晓旭中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 山东农业大学动物科技学院山东泰安271000 青岛农业大学动物医学院山东青岛266109 山东省动物疫病预防控制中心山东济南250100

重组酶介导等温扩增(RAA)是一种恒温快速核酸扩增技术,是重组酶等温扩增技术中具有代表性和前沿性的检测技术,其弥补了现有核酸体外扩增技术需要热循环的局限性,使得核酸体外扩增更加简便快捷,目前已被广泛应用于动物疫病检测。本文介绍... 详细信息

重组酶介导等温扩增(RAA)是一种恒温快速核酸扩增技术,是重组酶等温扩增技术中具有代表性和前沿性的检测技术,其弥补了现有核酸体外扩增技术需要热循环的局限性,使得核酸体外扩增更加简便快捷,目前已被广泛应用于动物疫病检测。本文介绍了RAA技术的检测原理、引物探针设计及优缺点,综述了其在病毒、细菌、寄生虫及抗生素耐药基因检测等方面的应用进展,总结了国内现有RAA技术标准及检测产品开发情况,以期为拓展RAA技术的应用提供参考。

关键词：重组酶介导扩增等温扩增病原检测生物安全检测

荧光免疫层析技术原理及其在病原微生物检测中的研究进展

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中国动物检疫 2024年第1期41卷 67-71页

作者：苏华彬刘蒙达南文龙孙明军焉鑫毛迎雪曲瑶孙淑芳李桂梅樊晓旭中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 青岛农业大学动物医学院山东青岛266109 农业农村部反刍动物重大疫病防控重点实验室(东部) 山东青岛266032 山东农业大学动物科技学院山东泰安271000

荧光免疫层析技术是近年来开发的一种新型免疫检测技术,以荧光微球为标记物,既保留了传统胶体金试纸条检测速度快、价格便宜、操作简单、携带方便等优点,又通过荧光技术提高了检测的灵敏度。荧光免疫层析技术对实验设备、资源的要求低,... 详细信息

荧光免疫层析技术是近年来开发的一种新型免疫检测技术,以荧光微球为标记物,既保留了传统胶体金试纸条检测速度快、价格便宜、操作简单、携带方便等优点,又通过荧光技术提高了检测的灵敏度。荧光免疫层析技术对实验设备、资源的要求低,特别适合在条件有限的实验室及野外开展动物疾病快速诊断。本文详细介绍了荧光免疫层析技术的原理及其在病毒、细菌、寄生虫等病原检测方面的应用研究,以期为病原微生物现场快速诊断技术的开发提供参考。

关键词：荧光免疫层析技术荧光微球病原微生物检测

基于不同抗原的犬布鲁氏菌病免疫层析胶体金抗体试纸条的制备和比较

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中国动物检疫 2024年第5期41卷 90-95页

作者：郭晓涵焉鑫邵卫星殷德辉闫昊南文龙樊晓旭孙世雄张培培孙翔翔刘蒙达张皓博孙淑芳孙明军徐州医科大学公共卫生学院江苏徐州221004 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 新疆维吾尔自治区动物卫生监督所新疆乌鲁木齐830011

为建立针对犬布鲁氏菌病的免疫层析胶体金快速检测方法,利用从犬种布鲁氏菌菌株提纯的膜蛋白和可溶性蛋白,原核表达纯化的外膜蛋白Omp31和BP26以及基于B细胞抗原肽的融合蛋白F14,分别制备了试纸条,然后采用犬布鲁氏菌病阳性和阴性血清,... 详细信息

为建立针对犬布鲁氏菌病的免疫层析胶体金快速检测方法,利用从犬种布鲁氏菌菌株提纯的膜蛋白和可溶性蛋白,原核表达纯化的外膜蛋白Omp31和BP26以及基于B细胞抗原肽的融合蛋白F14,分别制备了试纸条,然后采用犬布鲁氏菌病阳性和阴性血清,分别对上述试纸条进行敏感性和特异性比较。结果显示:Omp31抗原的敏感性最高,其次是F14和BP26,而全菌膜蛋白和全菌可溶性蛋白的敏感性较差;特异性上,使用由5种抗原制备的胶体金试纸条检测30份犬布鲁氏菌病阴性血清,结果均为阴性;5种试纸条与沙门氏菌、大肠杆菌(O157)、大肠杆菌(H7)、霍乱弧菌、副溶血弧菌、军团菌阳性血清均不发生交叉反应。另外,由F14和BP26制备的试纸条可识别羊布鲁氏菌病阳性血清,而由Omp31、全菌膜蛋白和全菌可溶性蛋白制备的试纸条均不能识别牛、羊布鲁氏菌病阳性血清。综上所述,Omp31、F14和BP26可作为制备犬布鲁氏菌病免疫层析胶体金检测卡的备选抗原。本研究为粗糙型布鲁氏菌引起的布鲁氏菌病的诊断提供了技术支撑。

关键词：犬布鲁氏菌病犬种布鲁氏菌外膜蛋白免疫层析胶体金检测卡

羊种布鲁氏菌Tat系统底物蛋白ErfK的抗原性和免疫原性研究

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中国动物检疫 2024年第5期41卷 96-103页

作者：吴瑶焉鑫孙明军屈海龙郭晓涵闫昊张培培孙世雄李嘉琪孙翔翔刘蒙达张皓博南文龙邵卫星王方昆樊晓旭孙淑芳中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032 山东农业大学动物医学院山东泰安271000 农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方) 山东青岛266032 徐州医科大学公共卫生学院江苏徐州221004 新疆维吾尔自治区动物卫生监督所新疆乌鲁木齐830018 农业农村部反刍动物重大疫病防控重点实验室(东部) 山东青岛266032

为分析羊种布鲁氏菌双精氨酸转运系统(twin-arginine translocation system,Tat system)毒力相关底物蛋白L,D-转肽酶ErfK诱导宿主产生的免疫应答情况,首先对布鲁氏菌M28毒株ErfK基因序列(WP_002963714.1)进行生物信息学分析,参考序列设... 详细信息

为分析羊种布鲁氏菌双精氨酸转运系统(twin-arginine translocation system,Tat system)毒力相关底物蛋白L,D-转肽酶ErfK诱导宿主产生的免疫应答情况,首先对布鲁氏菌M28毒株ErfK基因序列(WP_002963714.1)进行生物信息学分析,参考序列设计引物,构建表达载体pET-30a(+)-ErfK,经IPTG诱导表达、亲和层析和镍柱纯化获得目的蛋白;利用SDS-PAGE和Western blot对重组ErfK(rErfK)蛋白进行抗原性鉴定;将rErfK蛋白免疫小鼠,分别在免疫后15、30和45 d收集血清和脾脏,检测蛋白免疫后小鼠的细胞免疫应答和体液免疫应答情况。生物信息学预测结果显示,ErfK蛋白无跨膜结构,为亲水性蛋白,有多个T细胞和B细胞抗原表位;SDS-PAGE和Western blot均可获得25 kDa的蛋白条带,重组蛋白可与布鲁氏菌阳性血清发生反应,证明rErfK有良好的抗原性;小鼠免疫试验结果显示,rErfK组小鼠脾脏CD8^(+)T细胞含量相比PBS组显著上升(P<0.05),且脾脏Th1型细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4转录水平均显著上升(P<0.05),此外,rErfK免疫也能极显著诱导小鼠血清中总IgG和特异性IgG的产生(P<0.01)。上述结果表明,经大肠杆菌表达的布鲁氏菌rErfK蛋白可诱导小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。本研究为基于ErfK蛋白的布鲁氏菌病诊断试剂和亚单位疫苗研发提供了参考依据。

关键词：布鲁氏菌 Tat系统底物蛋白L,D-转肽酶ErfK 抗原性免疫原性

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曾昭璇先生对南海地理研究的重要贡献

地理学报 2016年第3期71卷 515-523页

作者：赵亮张争胜南文龙华南师范大学地理科学学院广州510631

曾昭璇先生是中国著名的地理学家、地貌学家和教育家。他在学术生涯的不同阶段对地貌学、自然地理学、历史地理学、人类地理学等学科领域均有积极的探索,他对南海地理问题的研究贯穿他的一生,为中国南海地理研究作出重要贡献。他深入研... 详细信息

曾昭璇先生是中国著名的地理学家、地貌学家和教育家。他在学术生涯的不同阶段对地貌学、自然地理学、历史地理学、人类地理学等学科领域均有积极的探索,他对南海地理问题的研究贯穿他的一生,为中国南海地理研究作出重要贡献。他深入研究南海海岸地貌、珊瑚礁地貌,主张采用"地形类型分析法"划分海岸类型,将中国海岸类型划分为山地港湾岸、台地岸与平原岸;他与梁景芬等合著《中国珊瑚礁地貌研究》,系统论述中国珊瑚礁探测史和石珊瑚的种属、生态、地貌特征与发育,并将中国珊瑚礁划分为四大区、六种地貌类型;他完善了珊瑚礁地貌土地名分类,根据《更路簿》划分南海珊瑚岛礁分布区、绘制珊瑚岛礁探测图;他利用历史文献资料考证"石塘"等南海诸岛古地名;他从地质学与地貌学角度论证南海诸岛与中国大陆的陆缘关系,还利用历史地理与地方志等资料佐证了南海诸岛自古以来就是中国的固有领土。

关键词：曾昭璇南海珊瑚礁更路簿

有关国际组织在布鲁氏菌病防控中发挥作用的经验和启示

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中国兽医杂志 2023年第12期59卷 153-156,F0003页

作者：焉鑫孙明军南文龙邵卫星刘蒙达孙淑芳樊晓旭中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032

布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(***)引起的慢性多器官损伤性人兽共患传染病。动物感染可引起流产和不育,人类感染会引起发热、肌肉和关节疼痛等,严重者完全丧失劳动能力[1]。该病严重威胁着养殖业健康发展、人类食品安全和公共... 详细信息

布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(***)引起的慢性多器官损伤性人兽共患传染病。动物感染可引起流产和不育,人类感染会引起发热、肌肉和关节疼痛等,严重者完全丧失劳动能力[1]。该病严重威胁着养殖业健康发展、人类食品安全和公共卫生安全。鉴于此,在“同一健康”理念下,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)、联合国粮食及农业组织(Food and Agriculture Organization of the United Nations,FAO)、世界动物卫生组织(World Organization for Animal Health,WOAH)和世界贸易组织(World Trade Organization,WTO)等国际组织高度重视对布鲁氏菌病的防控。

关键词：布鲁氏菌病人兽共患传染病世界动物卫生组织动物感染公共卫生安全关节疼痛世界贸易组织经验和启示

免疫调节型禽流感DNA疫苗pcDNA4.0-IL-2-H5HA的研究

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免疫调节型禽流感DNA疫苗pcDNA4.0-IL-2-H5HA的研究

作者：南文龙南京农业大学

学位级别：硕士

禽流感是由A型流感病毒引起的禽类烈性传染病，严重威胁世界各地的养禽业，常常造成巨大的经济损失，尤其是H5亚型高致病性禽流感常常给养禽业造成毁灭性打击，并严重威胁着人类的健康。禽流感病毒变异快、亚型多，免疫机制复杂。因此... 详细信息

禽流感是由A型流感病毒引起的禽类烈性传染病，严重威胁世界各地的养禽业，常常造成巨大的经济损失，尤其是H5亚型高致病性禽流感常常给养禽业造成毁灭性打击，并严重威胁着人类的健康。禽流感病毒变异快、亚型多，免疫机制复杂。因此，从分子水平上认识禽流感病毒，了解禽流感病毒各基因的功能，遗传变异特性与进化规律是必要的，也是禽流感疫苗研究的基础。目前，常规禽流感灭活疫苗存在着某些无法避免的缺陷，如免疫途径单一，免疫剂量大，常常要多次免疫，成本高，且会导致病毒逃避宿主免疫系统的监视。因此，新型禽流感疫苗的研究迫在眉睫，而DNA疫苗成为新型禽流感疫苗研究的热点。本实验扩增了一株H5亚型禽流感病毒的全基因，以其HA基因构建了DNA疫苗pcDNA4-H5HA，以及直接融合表达细胞因子IL-2为免疫佐剂的DNA疫苗pcDNA4-IL-2-H5HA，并对它们的免疫保护效果进行了初步的探讨。应用流感病毒通用引物和H5N1亚型AIV特异性引物，采用RT-PCR方法成功扩增出A／duck／shangdong／04的全基因序列。通过基因组序列比较及遗传进化分析表明，它的HA、NA、M、NP、PA、PB2基因与A／goose／Guangdong／1／96(GD96)株同源性分别为97.7％ 95.4％ 97.2％ 96.2％ 93.3％ 94.5％，结合进化树的分析，推断这6个基因可能起源GD96亚系，是其进化与自然重组的产物。而其NS基因与大陆代表株GD96亲缘性较远，PB1则与已知的亚系关系均较远，在相应的进化树上另成分支。结果表明本株病毒基因组是由两个以上不同基因亚系间发生自然重排的产物，同时也为进一步研究AIV DNA疫苗奠定了基础。以含有HA基因的质粒为模板，根据其测序结果设计合成了带有酶切位点的HA基因引物，通过PCR扩增出目的片段，将这一片段定向克隆到载体pcDNA4.0中，构建了重组质粒pcDNA4-HSHA。再以IL-2的测序结果设计引物，对IL-2进行酶切位点改造，将改造好的IL-2基因片段连接入pcDNA4-H5HA中，构建了表达融合蛋白的重组质粒pcDNA4-IL-2-H5HA。用于体内试验的DNA疫苗必须首先证明其能在体外真核动物细胞中表达，目前采用较多的办法是在适当的细胞系中进行瞬时表达。本实验将构建好的两种质粒纯化后，以脂质体法转染单层BHK细胞，48小时后通过间接免疫荧光检测转染结

关键词：禽流感全基因克隆序列分析 DNA疫苗 IL-2 免疫效力