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流式细胞术检测急性白血病P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白及bcl-2的临床意义

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白血病．淋巴瘤 2008年第2期17卷 -页

作者：邱阳刘越坚郭莉单路娟郭慧淑大连医科大学附属第一医院中心实验室 116011

目的研究急性白血病(AL)患者的P-糖蛋白(p170)、多药耐药相关蛋白(MRP)及bcl-2三种相关蛋白的表达情况,探讨其在AL患者多药耐药中的作用及相互关系.方法 AL患者44例,其中急性非淋巴细胞白血病(ANLL)29例,急性淋巴细胞白血病(ALL)15例,... 详细信息

目的研究急性白血病(AL)患者的P-糖蛋白(p170)、多药耐药相关蛋白(MRP)及bcl-2三种相关蛋白的表达情况,探讨其在AL患者多药耐药中的作用及相互关系.方法 AL患者44例,其中急性非淋巴细胞白血病(ANLL)29例,急性淋巴细胞白血病(ALL)15例,采用不同的化疗方案分别进行2个疗程的标准剂量化疗,按照治疗效果分为完全缓解(CR)组和诱导缓解失败(NR)组.选用12例同期就诊的健康人及良性血液病患者为对照,采用流式细胞术分别测定其p170、MRP、bcl-2的表达情况.结果 AL患者p170、MRP、bcl-2蛋白的表达均显著高于健康对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).p170和MRP表达在各型白血病中CR组均低于NR组;NR组24例中22例至少有一或二种蛋白表达增高,且表达具有一定的一致性(P＜0.01).bcl-2的高表达与治疗反应差有关,CR组患者的bcl-2表达明显低于NR组(P＜0.05).结论 p170、MRP、bcl-2均与AL多药耐药的发生有关,是导致预后不良的重要因素.提示bcl-2导致耐药的机制不同于经典的p170途径.

关键词：白血病,淋巴细胞,急性白血病,非淋巴细胞,急性多药耐药 p-糖蛋白多药耐药相关蛋白(MRP) bcl-2

TIMP-1对人卵巢癌A_(2780)细胞生长的抑制作用

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大连医科大学学报 2006年第4期28卷 273-275,295页

作者：单路娟吴泰华刘越坚邱阳郭莉王玲大连医科大学第一临床学院中心实验室辽宁大连116011

[目的]观察基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因表达水平对人卵巢癌细胞生长的影响。[方法]采用质脂体法将正、反义TIMP-1表达载体体外转染到卵巢癌A2780细胞中,用G418筛选稳定表达外源基因的克隆并用RT-PCR鉴定后扩大培养。以未... 详细信息

[目的]观察基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因表达水平对人卵巢癌细胞生长的影响。[方法]采用质脂体法将正、反义TIMP-1表达载体体外转染到卵巢癌A2780细胞中,用G418筛选稳定表达外源基因的克隆并用RT-PCR鉴定后扩大培养。以未转染组细胞作为对照,分别用直接计数法、四氮唑蓝(MTT)比色法、平皿克隆形成试验测定3组细胞的增殖活性,利用流式细胞术检测肿瘤细胞周期与凋亡的变化。[结果]与对照组相比,转染TIMP-1对卵巢癌细胞A2780呈现增殖抑制效应:生长曲线示增殖速度减慢(P<0.01);在平皿上的集落形成能力下降(38±3.05)%;MTT法结果显示增殖抑制率增加(P<0.01);细胞周期显示G0/G1期比例增加(58.41±0.94)%。转染反义TIMP-1对卵巢癌细胞A2780呈现促增殖效应:生长曲线示增殖速度加快(P<0.01);在平皿上的集落形成能力增强(59±2.08)%;MTT显示增殖抑制率减小(P<0.01);细胞周期显示G0/G1期比例减小(44.82±0.31)%。[结论]体外转染TIMP-1基因提高TIMP-1的表达可抑制卵巢癌细胞的增殖,TIMP-1可能成为卵巢癌基因治疗的一个新靶点。

关键词： TIMP-1 卵巢癌基因转染

K-ras突变多肽致敏树突状细胞对CCL19、CCL22和fascin-1表达的影响

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中国普外基础与临床杂志 2010年第9期17卷 917-921页

作者：江良县谭广王忠裕窦春鹏单路娟大连医科大学附属第一医院普外二科辽宁大连116011 大连医科大学附属第一医院中心实验室辽宁大连116011

目的探讨K-ras突变多肽致敏树突状细胞(DC)对细胞趋化因子CCL19、CCL22和细胞骨架蛋白fascin-1表达的影响。方法联合应用重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素(IL)-4诱导培养外周血DC,收集培养7d后的DC并分为未负载组(加入RPMI164... 详细信息

目的探讨K-ras突变多肽致敏树突状细胞(DC)对细胞趋化因子CCL19、CCL22和细胞骨架蛋白fascin-1表达的影响。方法联合应用重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素(IL)-4诱导培养外周血DC,收集培养7d后的DC并分为未负载组(加入RPMI1640培养液50μg/ml)和K-ras负载组(加入K-ras突变多肽50μg/ml).流式细胞仪测定负载前、后DC表面标志CD1a、CD80及CD86;扫描电镜和透射电镜观察负载K-ras突变多肽后的DC形态结构;ELISA法检测2组DC培养上清液中IL-12、CCL19和CCL22的表达;Westernblot法测定2组DC骨架蛋白fascin-1的表达。结果①K-ras突变多肽负载DC后,CD1a、CD80及CD86表面分子表达率明显高于负载前(P<0.01).②扫描电镜下见负载后的DC呈花瓣状、树枝样突起;透射电镜下见负载后的DC形态非常不规则,树枝状或毛刺状的突起明显增多。③K-ras负载组负载后不同时相(6、12、24及48h)的IL-12、CCL19及CCL22的表达水平明显高于未负载组(P<0.01).④K-ras负载组fascin-1蛋白的表达水平也高于未负载组(P<0.01).结论K-ras突变多肽能够促进DC成熟,并使细胞趋化因子和骨架蛋白表达水平增加,能够增强DC游走迁移。

关键词：树突状细胞趋化因子细胞骨架蛋白 K-ras突变多肽

TIMP-1基因体外稳定转染对人卵巢癌A_(2780)细胞周期与增殖的影响

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中国药师 2006年第2期9卷 101-103页

作者：单路娟殷柳吴泰华刘越坚邱阳郭莉大连医科大学附属第一临床医院辽宁大连116011

目的:探讨正、反义基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因对人卵巢癌细胞周期及增殖的影响。方法:将重组质粒正、反义TIMP-1表达载体体外转染到卵巢癌A2780细胞中,用G418筛选稳定表达细胞株并扩增培养,采用MTT细胞计数法检测肿瘤细... 详细信息

目的:探讨正、反义基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因对人卵巢癌细胞周期及增殖的影响。方法:将重组质粒正、反义TIMP-1表达载体体外转染到卵巢癌A2780细胞中,用G418筛选稳定表达细胞株并扩增培养,采用MTT细胞计数法检测肿瘤细胞生长增殖率,流式细胞术检测肿瘤细胞周期的变化。结果:经15～20 dG418筛选得到稳定表达细胞株,重组质粒TIMP-1稳定转染正义(PTs)组A2780细胞的增殖可明显受到抑制,细胞周期明显改变,细胞从G1期到S期发生阻滞。而反义(PTas)组细胞与之相反。结论:提示体外转染TIMP-1基因可使A2780细胞周期阻滞于G1期,并可抑制肿瘤细胞增殖。可为临床基因治疗及相关基因药物研究提供实验依据。

关键词： TIMP-1重组质粒卵巢癌基因治疗基因药物

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氯化氢合成中的自动控制技术

氯碱工业 2023年第1期59卷 11-13页

作者：单路路刘艳秋常刚陈祥辉朱文凯程晨曦山东鲁泰化学有限公司山东济宁272300

介绍了氯化氢生产过程中的自动控制技术,包括如下内容:合成炉自动点火,副产蒸汽综合利用的自动调节,氯氢配比的自动控制,氯化氢中游离氯的在线检测,炉膛火焰的实时监控。

关键词：盐酸合成炉副产蒸汽自动点火氯氢配比游离氯在线检测

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光盘刻录技巧初探

水利科技与经济 2003年第2期9卷 148-148页

作者：单路哈尔滨市101研究所黑龙江哈尔滨150001

1 刻录前的准备工作1.1刻录前最好先进行测试尽管很多刻录机都支持直接写入功能,但为了保险起见,建议大家最好先使用测试功能进行一次测试.因为在测试的过程中,一旦出现计算机性能不稳定、光驱的读写速度跟不上,或者在读盘过程中出现了... 详细信息

1 刻录前的准备工作1.1刻录前最好先进行测试尽管很多刻录机都支持直接写入功能,但为了保险起见,建议大家最好先使用测试功能进行一次测试.因为在测试的过程中,一旦出现计算机性能不稳定、光驱的读写速度跟不上,或者在读盘过程中出现了高噪音等问题,可以及时采取调整措施,降低刻录的速度,直到全部排除故障为止.

关键词：刻录机光盘文件操作控制面板

慢性淋巴细胞白血病免疫表型及凋亡相关蛋白分析

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国际检验医学杂志 2013年第1期34卷 25-26页

作者：刘越坚郭莉邱阳单路娟郭慧淑张婵大连医科大学附属第一医院中心实验室辽宁大连116011 大连市妇产医院检验科辽宁大连116033

目的探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)免疫表型和凋亡相关蛋白表达特征及其临床意义。方法应用CD45/SSC设门方案,通过三色流式细胞术对150例CLL患者、105例急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者骨髓或外周血进行免疫分型。结果 150例CLL患者均高... 详细信息

目的探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)免疫表型和凋亡相关蛋白表达特征及其临床意义。方法应用CD45/SSC设门方案,通过三色流式细胞术对150例CLL患者、105例急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者骨髓或外周血进行免疫分型。结果 150例CLL患者均高表达CD19;HLA-DR、CD20、CD5、CD22、CD38、CD23阳性率依次为96.67%、95.33%、84.67%、86.67%、40.67%、60.66%;CD10、cCD79a、CD3、CD25、CD34、ZAP70、FMC7阳性率较低,依次为3.33%、15.33%、4.67%、1.33%、3.33%、11.43%、8.67%。其他抗体均无表达;与B-ALL患者相比,CLL患者CD5、CD20阳性率升高(P0.05)。CLL患者凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax阳性率分别为74.67%和7.33%。结论 CD5、CD20、CD19是CLL特异性免疫表型,ZAP70、CD38可作为预后判断指标,CLL细胞Bcl-2高表达、Bax低表达,在疾病发生、发展中意义重大。

关键词：传染性单核细胞增多症 Th17细胞外周血单个核细胞

三色流式细胞术分析急性淋巴细胞白血病免疫分型

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中国实验血液学杂志 2009年第2期17卷 442-444页

作者：邱阳王刚刘越坚单路娟大连医科大学附属第一医院中心实验室辽宁大连116011 辽宁出入境检验检疫局辽宁大连116011

本研究探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)各亚型免疫分型的特点及其临床意义。利用CD45/SSC双参数散点图设门方法,对40例ALL进行三色流式细胞术免疫表型分析。结果显示:采用CD45/SSC双参数散点图设门法能清楚地区分骨髓或外周血中的淋巴细胞... 详细信息

本研究探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)各亚型免疫分型的特点及其临床意义。利用CD45/SSC双参数散点图设门方法,对40例ALL进行三色流式细胞术免疫表型分析。结果显示:采用CD45/SSC双参数散点图设门法能清楚地区分骨髓或外周血中的淋巴细胞、单核细胞、粒细胞、有核红细胞和原始细胞群。40例ALL中B-ALL26例,T-ALL11例,HAL3例。26例B-ALL中CD19全部(100%)阳性表达,而11例T-ALL中CD7表达的阳性率最高(100%)。伴髓系抗原表达的ALL(My+ALL)比较常见,本实验中共有12例,约达到30.0%,经常累及B淋巴系统(占My+ALL的75.0%);在髓系抗原中以CD13表达阳性率最高;有3例患者为急性杂合性白血病(HAL),发病率为7.5%,且全部为髓系、B系共同表达,其中有2例患者CD34阳性表达,占66.67%。结论:在流式细胞仪上采用CD45/SSC双参数散点图设门方法进行三色流式细胞术分析,能排除正常细胞的干扰,使免疫分型的结果更为准确、可靠。

关键词：急性淋巴细胞白细胞免疫分型流式细胞术

肾小球系膜细胞金属蛋白酶1组织抑制剂对血管内皮生长因子及转化生长因子β_1表达的影响

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中国中西医结合肾病杂志 2013年第1期14卷 22-25,I0004页

作者：温文斌赵银娥林洪丽马艳梅单路娟郭广庆师帅帅长治医学院附属和济医院肾内科长治046011 大连医科大学附属第一医院肾内科大连116011 长治医学院附属和济医院消化内科长治046011 大连医科大学附属第一医院中心实验室大连116011

目的:探讨高糖(葡萄糖25mmol/L)条件下大鼠肾小球系膜细胞(RMC)金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)对血管内皮生长因子(VEGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法:用高糖培养基体外培养未转染及分别用pcDNA3空载体、人反义TIMP-1基... 详细信息

目的:探讨高糖(葡萄糖25mmol/L)条件下大鼠肾小球系膜细胞(RMC)金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)对血管内皮生长因子(VEGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法:用高糖培养基体外培养未转染及分别用pcDNA3空载体、人反义TIMP-1基因重组真核表达载体转染的RMC24h,将细胞分为未转染组、空载体组及反义组,并设正常培养条件下的RMC作为正常对照组。RT-PCR检测各组RMC TIMP-1、VEGF及TGF-β1mRNA的表达。Western印迹检测胞质中TIMP-1、VEGF及TGF-β1蛋白的表达。免疫荧光检测各组RMC胞质中VEGF的表达。结果:高糖培养条件下未转染组及空载体组RMC大鼠TIMP-1、VEGF及TGF-β1mRNA表达均较对照组明显增加(P<0.01),而此两组间相应指标表达差异无统计学意义;反义组大鼠TIMP-1、VEGF mRNA表达较未转染组显著降低(P<0.01),而TGF-β1 mRNA表达则无变化。Western印迹也得到相同的结果。免疫荧光检测发现,未转染组及空载体组VEGF荧光表达较对照组显著增强,反义组荧光则较未转染组明显减弱。结论:高糖可促进RMC TIMP-1、VEGF及TGF-β1表达增加。在高糖条件下,TIMP-1可能位于VEGF上游,促进其表达;而TGF-β1表达并不受TIMP-1调控,高糖可能通过其他途径上调其表达。

关键词：系膜细胞金属蛋白酶1组织抑制剂血管内皮生长因子转化生长因子β1