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RPA检测技术在禽源病原检测中的研究进展

中国畜牧兽医 2024年第2期51卷 482-490页

作者：包涛涛杨先富廖飞吴通奎莫兴虎汪忠荣黔东南州动物疫病预防控制中心凯里556000 贵州农业职业学院贵阳550000

重组酶聚合酶扩增(recombinant polymerase amplification, RPA)是一种近年来研究者关注较多的新型恒温核酸扩增技术,该方法操作便捷、扩增速度快、特异性强及灵敏度高,无需借助精密仪器,且在恒温环境下(25~45℃)即可完成核酸检测,极有... 详细信息

重组酶聚合酶扩增(recombinant polymerase amplification, RPA)是一种近年来研究者关注较多的新型恒温核酸扩增技术,该方法操作便捷、扩增速度快、特异性强及灵敏度高,无需借助精密仪器,且在恒温环境下(25~45℃)即可完成核酸检测,极有可能取代传统PCR检测技术。RPA检测技术迄今发展十余年,已广泛应用于细菌、病毒、真菌、寄生虫及耐药基因检测等领域,被认为是当前最有潜力的快速分子诊断工具,具有较为广泛的应用前景。笔者就RPA检测、技术优势、常见检测方式及其在禽源病原检测方面的研究进展进行概述,旨在为临床禽源病原新型检测技术的研究提供一定理论参考。

关键词：重组酶聚合酶扩增(RPA) 禽源病原恒温核酸扩增技术

市(州)县两级兽医实验室生物安全问题分析及对策

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今日养猪业 2024年第1期 28-30页

作者：伍祥龙包涛涛杨先富黔东南州农业农村发展中心贵州凯里556000 黔东南州动物疫病预防控制中心贵州凯里556000

【目的】做好兽医实验室生物安全,在开展动物疫病检测及研究工作过程中,降低实验室工作人员感染几率,防止病原体外泄,保护人类公共卫生安全。【方法】开探讨,并基于分析结果提出了相应的策略建议。【结果】对兽医实验室存在不同程度的... 详细信息

【目的】做好兽医实验室生物安全,在开展动物疫病检测及研究工作过程中,降低实验室工作人员感染几率,防止病原体外泄,保护人类公共卫生安全。【方法】开探讨,并基于分析结果提出了相应的策略建议。【结果】对兽医实验室存在不同程度的生物安全隐患及原因进行了分析,针对性提出了建议措施。【结论】要重视兽医实验室生物安全问题,加强实验室生物安全知识培训和人才队伍建设、调整兽医实验室布局、加强实验室仪器设备管理,试验废水进行完全无害化处理,方能保障实验人员安全和环境安全,推动畜牧业健康发展。

关键词：兽医实验室生物安全问题分析

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一例猫尿闭的诊疗体会

福建畜牧兽医 2024年第2期46卷 65-67页

作者：王槐镁包涛涛王学良杨光天剑河县动物疫病预防控制中心贵州剑河556400 黔东南州动物疫病预防控制中心贵州凯里556000 剑河县动物检疫服务站贵州剑河556400

猫尿闭是一种猫下泌尿道较为多发的疾病,该文报道一例猫尿闭的诊断及治疗,以期为临床猫尿闭的治疗提供参考。

关键词：猫尿闭结石诊治

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基于鸭疫里氏杆菌qac基因的检测与分析

养禽与禽病防治 2024年第6期 21-24页

作者：包涛涛慕江静杨先富吴通奎彭彩丽袁俊贵州省黔东南州动物疫病预防控制中心贵州凯里556000 贵州省凯里市万潮镇农业综合服务中心贵州凯里556000

为掌握qac基因在RA中携带情况,科学地为临床实践提供数据支持。以前期分离的7株鸭疫里默氏杆菌(RA)为研究对象,通过设计qacA/B、qacC、qacG、qacJ、qacE、qacE△1、qacF以及qacE1-sul1等qac基因扩增引物开展PCR检测。结果显示,检出qacE... 详细信息

为掌握qac基因在RA中携带情况,科学地为临床实践提供数据支持。以前期分离的7株鸭疫里默氏杆菌(RA)为研究对象,通过设计qacA/B、qacC、qacG、qacJ、qacE、qacE△1、qacF以及qacE1-sul1等qac基因扩增引物开展PCR检测。结果显示,检出qacE与qacE△1阳性,qacE阳性检出率为57.14%(4/7),qacE△1阳性检出率为42.86%(3/7),同时携带qacE与qacE△1菌株检出率为28.57%(2/7)。结果表明,qacE与qacE△1基因均能从RA中检测出,且存在RA菌株同时携带qacE与qacE△1。本研究旨在为临床RA的消毒剂抗性研究提供一定数据参考。

关键词：鸭疫里默氏杆菌季铵盐类耐药检测

贵州省黔东南州地方品种猪感染猪伪狂犬病毒情况调查分析

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河南畜牧兽医 2024年第5期45卷 23-26页

作者：汪忠荣欧工华张人俊毛以智刘霞吴通奎包涛涛贵州省黔东南州动物疫病预防控制中心贵州黔东南州556000 贵州省从江县动物疫病预防控制中心贵州省动物疫病预防控制中心

为了解贵州省黔东南州地方品种猪感染猪伪狂犬病毒野毒情况,为品种资源保护提供科学的理论依据,笔者应用ELISA方法,对在从江香猪、黔东南花猪、剑白香猪和白洗猪主要分布地区采集临床健康猪血清样品560份进行检测。

关键词：贵州省黔东南州地方品种猪猪伪狂犬病调查

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贵州白洗猪主要病毒病疫苗免疫效果分析

甘肃畜牧兽医 2024年第2期54卷 47-51页

作者：王正文汪忠荣吴通奎包涛涛袁晓娟高潇祎王彬黔东南州动物疫病预防控制中心贵州凯里556000 贵州省动物疫病预防控制中心贵州贵阳557000 贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025

白洗猪是贵州省优良地方畜禽品种之一,以中小规模和散养为主,疫病对白洗猪遗传资源保护影响较大。本研究于2020—2023年对白洗猪4种主要病毒性传染病免疫效果进行定期监测,并汇总分析不同条件下的免疫效果、影响因素,旨在为白洗猪疫病... 详细信息

白洗猪是贵州省优良地方畜禽品种之一,以中小规模和散养为主,疫病对白洗猪遗传资源保护影响较大。本研究于2020—2023年对白洗猪4种主要病毒性传染病免疫效果进行定期监测,并汇总分析不同条件下的免疫效果、影响因素,旨在为白洗猪疫病防控提供理论参考,更好保护和利用这一地方品种猪。结果表明,强制免疫病种猪瘟、猪口蹄疫免疫效果较好,抗体合格率均超过70%,达到免疫抗体合格率标准;非强制免疫病种猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病抗体合格率较低,分别为10.58%、34.75%。因此,应加大宣传力度,提高猪群疫病防控水平,引导基础设施薄弱、规模较小的养殖场积极开展猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病等疫苗接种工作。

关键词：白洗猪猪瘟口蹄疫猪繁殖与呼吸综合征猪伪狂犬病免疫抗体

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猪链球菌病及其防控要点

福建畜牧兽医 2024年第2期46卷 33-35页

作者：包涛涛慕江静吴通奎杨先富杨政益袁俊黔东南州动物疫病预防控制中心贵州凯里556000 凯里市万潮镇农业综合服务中心贵州凯里556000

本文就猪链球菌病的病原特点、流行病学、临床症状与病理变化、毒力因子及当前防控要点进行概述,旨在为该病防控提供一定参考。

关键词：猪链球菌猪链球菌病防控

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1例犬传染性性病肿瘤的诊治报告

贵州畜牧兽医 2024年第3期48卷 54-56页

作者：任杰包涛涛肖红严易李秀富高俊波韩晓梅龙江华铜仁职业技术学院贵州铜仁554300 黔东南自治州农业农村局贵州凯里556000 铜市中医院贵州铜仁554300

文章介绍了1例母犬患传染性性病肿瘤的诊治情况,通过临床检查、血常规检查、血液生化检查、C-反应蛋白检测、血气分析及细胞学检查进行确诊,采取阴道肿瘤切除术及长春新碱化疗,取得了良好的治疗效果。

关键词：犬传染性性病肿瘤诊治手术化疗

鸭疫里默氏杆菌Porin蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立与应用

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鸭疫里默氏杆菌Porin蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立与...

作者：包涛涛贵州大学

学位级别：硕士

鸭疫里默氏杆菌(Riemerlla anatipstifer),简称为RA。是一种可在大范围内广泛引起禽类发生鸭疫里默氏杆菌病的重要细菌性病原,通常会导致鸭、鹅及火鸡等禽类发病,以雏鸭最为易感,对禽类生产养殖造成重大经济损失,严重制约养禽业的健康... 详细信息

鸭疫里默氏杆菌(Riemerlla anatipstifer),简称为RA。是一种可在大范围内广泛引起禽类发生鸭疫里默氏杆菌病的重要细菌性病原,通常会导致鸭、鹅及火鸡等禽类发病,以雏鸭最为易感,对禽类生产养殖造成重大经济损失,严重制约养禽业的健康发展。鸭疫里默氏杆菌病的疫苗免疫抗体评估及早期诊断是控制该病较为有效的措施,但在生产实践中由于RA血清型众多,且各血清型缺乏交叉保护等导致了当前市面上的ELISA抗体试剂盒极少且质量参差不齐,限制了RA抗体试剂盒的开发与应用。因此,建立一种既能评估RA免疫抗体水平又能做出RA诊断的ELISA方法尤为重要。为建立一种新型可适用于鸭疫里默氏杆菌病抗体检测的间接ELISA方法,本研究以RA贵州分离株为研究对象。通过设计引物并扩增出RA微孔蛋白porin基因核酸序列,构建重组表达质粒p ET-32a-porin,将其转化至E.coli BL21(DE3)并加入IPTG诱导表达出重组Porin蛋白,使用Beyo Gold(?)His-tag Purification Resi对重组蛋白加以纯化,以纯化后的Porin蛋白作为抗原免疫实验动物制备多克隆抗体,Western-Blot验证Porin蛋白反应原性,最后再以重组Porin蛋白作为包被抗原,建立一种新型可适用于鸭疫里默氏杆菌病抗体检测的间接ELISA方法,旨在为RA的有效防控提供技术支持。1鸭疫里默氏杆菌porin基因的克隆及生物信息学分析为研究RA贵州分离株porin基因分子结构特征,以RA贵州分离株为研究对象。根据已发表RA的porin基因序列(CP002346.1)设计1对引物,扩增两种血清型(血清2型、血清11型)RA的微孔蛋白porin基因核酸序列,使用DNAstar生物信息学分析软件与Gen Bank上收录的10株RA的porin基因及国内学者么乃全研究的8种血清型RA的porin基因进行同源性比对,使用生物信息学软件(网站)分别对Porin蛋白的理化性质、信号肽、二级结构、亲水性、跨膜区、亚细胞定位、抗原表位及三级结构等进行预测分析。结果显示:试验成功扩增出RA贵州分离株porin基因,大小为1 254 bp;两种血清型RA的porin基因与所选择同源性比对的RA菌株同源性高达100%;Porin蛋白相对分子质量为47.68 k Da,含有417个氨基酸,等电点为9.494,1-18位氨基酸为Porin蛋白信号肽区域(Sec/SPI)且形成概率为0.8111,二级结构包含Alpha helix 18.47%(77/417),Extended strand 29.98%(125/417),Beta turn 5.52%(23/417),Random coil46.04%(192/417)。亲水性较强且有跨膜螺旋区,亚细胞定位结果显示其为膜蛋白成员,存在多个潜在抗原表位位点,其优势抗原表位区主要包含17-22,37-42,76-79,84-91,106-109,128-131,156-165,196-201,214-223,241-243,250-252,268-272,274-280,282-288,311-317,319-322,356-361,366-371,392-395,400-405,三级结构同源性建模预测该蛋白呈筒状结构,主要由α螺旋、β折叠、大量延长线及无规则卷曲所构成。结果表明:RA贵州分离株存在porin基因;porin基因为多种血清型RA所共有,具有高度保守性;Porin蛋白存在多个优势抗原表位,可为该蛋白后期的免疫原性研究奠定一定理论基础。2鸭疫里默氏杆菌Porin蛋白的原核表达及多克隆抗体制备为表达重组Porin蛋白及制备其多克隆抗体。使用酶切后的porin基因与原核表达载体p ET-32a相连接,经质粒PCR、双酶切及测序鉴定后构建重组表达质粒p ET-32a-porin,将p ET-32a-porin转化至E.coli BL21(DE3)并加入IPTG诱导表达,经SDS-PAGE凝胶电泳分析获得重组Porin蛋白,结合SDS-PAGE凝胶电泳对蛋白表达条件加以优化,纯化表达的重组蛋白,Western-Blot分析其反应原性。以纯化后的Porin蛋白作为抗原免疫2只清洁级新西兰大白兔制备Porin蛋白多克隆抗体,ELISA方法测定多克隆抗体效价,Western-Blot分析其反应原性。结果显示:构建的p ET-32a-porin经质粒PCR、双酶切及测序鉴定正确;诱导表达Porin蛋白大小为63 k Da,其最佳诱导表达条件为:0.2 mmol/L IPTG在30℃诱导表达3 h;Western-Blot结果显示纯化蛋白能与鸭RA阳性血清和Porin多克隆抗体发生特异性反应,多克隆抗体效价高达1:10以上。结果表明:p ET-32a-porin构建成功;诱导表达出63 k Da的重组Porin蛋白;

关键词：鸭疫里默氏杆菌 Porin 原核表达 ELISA