检索结果-南通市图书馆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

腺病毒六邻体蛋白型间线性化抗原位点的研究

中华实验和临床病毒学杂志 2002年第1期16卷 44-47页

作者：张霆辛若雷张勤包怡华吴建新首都儿科研究所北京市感染与免疫中心实验室北京100020

目的　对人类腺病毒 (adenovirus,AdV)六邻体型间抗原位点的特性进行研究。方法　通过计算机对腺病毒六邻体氨基酸序列进行比较分析 ,结合抗原性的预测结果和六邻体蛋白三维空间结构的肽段暴露状态 ,选定了保守性抗原位点进行多肽合成... 详细信息

目的　对人类腺病毒 (adenovirus,AdV)六邻体型间抗原位点的特性进行研究。方法　通过计算机对腺病毒六邻体氨基酸序列进行比较分析 ,结合抗原性的预测结果和六邻体蛋白三维空间结构的肽段暴露状态 ,选定了保守性抗原位点进行多肽合成或通过构建重组质粒表达蛋白 ,将合成的六邻体肽段和表达纯化的蛋白抗原免疫动物后 ,用免疫印迹和间接免疫荧光方法检测抗血清的免疫特异性。结果　免疫印迹分析显示 ,抗多肽抗体和抗重组蛋白抗体均与腺病毒的六邻体蛋白特异性识别。间接免疫荧光显示 ,腺病毒感染HeLa细胞核内荧光着色 ,并且抗血清有较好的腺病毒型间反应性。合成多肽抗体与含有相同肽段的重组蛋白抗原产生特异性结合。结论　在腺病毒六邻体蛋白中存在有线性化的型间抗原位点。

关键词：腺病毒抗原位点合成多肽基因表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

人神经营养因子4基因的分子克隆及序列分析

生物化学与生物物理进展 1998年第2期25卷 183-185,187页

作者：王爱坤刘哲伟包怡华首都儿科研究所北京市高技术实验室

以正常人血淋巴细胞染色体ＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增出神经营养因子４（ＮＴ４）编码基因．将所得基因片段重组于噬菌体载体Ｍ１３ｍｐ１８ＲＦ，筛选得到含人ＮＴ４基因的克隆．采用Ｓａｎｇｅｒ单链末端终止法测出其全部的核苷酸序列... 详细信息

以正常人血淋巴细胞染色体ＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增出神经营养因子４（ＮＴ４）编码基因．将所得基因片段重组于噬菌体载体Ｍ１３ｍｐ１８ＲＦ，筛选得到含人ＮＴ４基因的克隆．采用Ｓａｎｇｅｒ单链末端终止法测出其全部的核苷酸序列，该序列与国外文献所报道的完全一致．

关键词：神经营养因子4 基因克隆序列

AXIN2罕见变异与人类神经管畸形的相关性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

陆军军医大学学报 2023年第24期45卷 2503-2511页

作者：徐雪冰李建婷包怡华郭金王芳张霆杨淑艳潍坊医学院临床医学院儿科学教研室山东潍坊261053 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室太原030001 首都儿科研究所生化免疫研究室北京100020

目的探索AXIN2基因变异与神经管畸形(neural tube defects,NTDs)发生的相关性。方法收集2004年6月-2013年12月山西省9家医院引产的100例NTDs胎儿肌肉组织样本,对其全基因组测序结果中的AXIN2基因的变异进行生物信息学分析,在相应的样本... 详细信息

目的探索AXIN2基因变异与神经管畸形(neural tube defects,NTDs)发生的相关性。方法收集2004年6月-2013年12月山西省9家医院引产的100例NTDs胎儿肌肉组织样本,对其全基因组测序结果中的AXIN2基因的变异进行生物信息学分析,在相应的样本中利用Sanger测序证实变异结果。在NE-4C细胞系中转染AXIN2野生型及AXIN2变异型质粒,利用免疫荧光和蛋白免疫印迹实验进行基因功能验证,对携带AXIN2变异的人NTDs样本进行分析。结果在100例NTDs样本中发现AXIN2基因上有5种变异,对其中3种变异[c.959A>T(p.D320V)、c.1250C>T(p.A417V)和c.1634G>A(p.G545E)]进行功能验证。细胞蛋白免疫印迹实验表明,D320V(P<0.05)和G545E(P<0.001)变异下调AXIN2蛋白表达,但3种变异均不影响β-catenin蛋白表达水平;免疫荧光实验表明,3种变异不影响AXIN2蛋白的亚细胞定位。在携带D320V及G545E变异的NTDs胚胎肌肉组织中,AXIN2的蛋白表达水平显著低于对照[D320V(P<0.05),G545E(P<0.01)]。结论NTDs样本中鉴定到的AXIN2变异D320V及G545E下调AXIN2蛋白表达量,可能通过引起Wnt信号通路异常激活而导致神经管畸形的发生。

关键词：神经管畸形 AXIN2 遗传变异 Wnt信号通路

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

学龄前儿童久坐行为与肌肉力量的关联性分析

学龄前儿童久坐行为与肌肉力量的关联性分析

用抗合成多肽抗体分析呼吸道HAdV六邻体保守区抗原表位

第十三届全国体育科学大会

作者：张豪文吴剑路朝旭郭金包怡华首都体育学院首都儿科研究所

研究目的:久坐行为（Sedentary Behavior, SB）是指在清醒时任何以坐的姿势或者斜倚姿势状态下一小时能耗不超过1.5METs的行为。有研究显示,长时间的SB会对儿童的健康有危害,如,增加肥胖、心血管代谢、青少年抑郁的风险。证据表明,减少S... 详细信息

研究目的:久坐行为（Sedentary Behavior, SB）是指在清醒时任何以坐的姿势或者斜倚姿势状态下一小时能耗不超过1.5METs的行为。有研究显示,长时间的SB会对儿童的健康有危害,如,增加肥胖、心血管代谢、青少年抑郁的风险。证据表明,减少SB的是时间可改善肌肉力量（Muscle Strength,MS）。但也有研究结果表明SB与MS的关联不一致,SB的时间与下肢MS和肌肉含量（瘦体重指数）不存在关联。此外,研究主要集中在青少年群体,缺乏学龄前儿童的相关证据,尤其缺乏中国学龄前儿童的直接证据。近年来,研究显示我国大多数幼儿SB的时间超出我国《学龄前儿童（3～6岁）运动指南》对SB的建议时间[26]。因此,本文旨在探究SB对学龄前儿童的MS的作用,同时为进一步研究SB对MS的影响,具体分析SB分别对上肢MS和下肢MS的影响。研究方法:以北京市两所幼儿园275名3-6岁学龄前儿童（女孩有111名）,对学龄前儿童的身高、体重、肌肉力量和久坐行为进行测试。家庭基本状况调查表由其父母或带养人填写,包括儿童的基本信息（性别、年龄）和家庭情况（父母受教育程度、家庭年收入）。本研究用加速度计ActiGraph GT9X Link（Actigraph LLC,Pensacola,FL）测量儿童的ST相关数据,受试者需连续7天（5个工作日和2个周末日）佩戴GT9X Link加速度计,测量每天的久坐行为的时间。加速度计固定在腰带上,佩戴在儿童的右侧髂前上脊的位置。除了洗澡、游泳等会对设备造成损坏的涉水活动和睡觉时间,其他活动行为时间都需要佩戴加速度计。第八天测试人员取回加速度计,通过在Actilife软件查看并下载数据。采样间隔时间设置为1秒,并根据不同Counts强度分界值处理久坐行为时间,Counts强度≤100 counts/min被划定为ST。Altenburg把持续SB时间定为任何一次持续至少1分钟久坐行为,SB总时间是指一天积累的所有久坐行为的时间。受试者的有效数据至少包含4天（3个工作日和1个周末日）,一天内有效佩戴时间≥480分钟的完整数据才能算为有效日。对于加速计数据采集不符合要求需征得家长或带养人的同意对学龄前儿童进行第二次佩戴设备,佩戴要求与第一次佩戴一致。MS的评估分成上肢力量评估和下肢力量评估。用JAMAR握力计（型号:PLUSDYNAMOMETER）对上肢力量评估,在立定跳远垫子对下肢力量评估。孩子在进行实验前会有一名经过培训的测试者进行操作示范,给孩子展示正确的实验动作。具体操作:（1）上肢力量测量:该测试是要求孩子在双脚自然站立、双手自然下垂的站姿下3秒内尽可能用最大的力量紧握握力计,测试时,除了测试的一侧手接触握力计之外,不能接触任何东西。每一侧手臂非连续测量三次并记录三次成绩,取最优的成绩作为结果。（2）下肢力量测量:该测试要求孩子双脚分开站立,立定跳远的垫子带有脚印,孩子站在脚印上,双脚尽可能向前跳跃并完成3次非连续测试,记录三次成绩,取最好成绩作为最终成绩。肌肉力量标准总分（Muscle Strength T-score,MST）是由上肢肌肉力量标准化得分和下肢肌肉力量标准化得分相加。本研究采用SPSS 26.0统计软件,符合正态分布的定量资料用均数±标准差表示,定性资料用例数（%）表示,性别间的定量资料采用t检验,性别间的定性资料采用卡方检验;久坐时间对肌肉力量的影响用多元线性逐步回归分析。检验水准α=0.05。研究结果:（1）受试者相关信息在性别的差异:本研究共招募275名3～6岁学龄前儿童,因个人基本信息填写不全和加速度数据不合格共剔除40名,最终纳入235名儿童。用单因素方差分析年龄和MS的关系,在进行多重比较,结果显示,上肢MS和下肢MS均随着年龄增加而增加。（2）经t检验发现,受试者的身高、年龄、体重、父母学历、家庭年收入和设备佩戴总时长不存在性别差异性（p>0.05）;男孩的上肢肌肉力量标准化分（p=0.003）和MST（p=0.023）,均比女孩高,持续SB时间和SB总时间则相反。（3）久坐时间与肌肉力量的多元线性回归分析:多元逐步回归分析结果显示,在控制性别、年龄、家庭年收入、父母学历因素后,持续SB时间和SB总时间与MST均呈显著负相关。持续SB时间每天每增加10分钟,MST降低0.822（95%CI:-1.632,-0.012）;SB总时间每天每增加10分钟,MST降低0.738（95%CI:-1.118,-0.357）。（4）为进一步研究探索SB与MST的关系,分别把T、T作为因变量,SB总时间、持续SB时间分别作为自变量,放入多元逐步回归模型,上肢的结果显示:SB总时间与上肢肌肉力量化得分呈显著负相关,SB总时间每天每增加10分钟,上肢肌肉力量化得分降低0.424（95%CI:-0.660,-0.188）;下肢的结果显示,SB总时间与下肢肌肉力量化得分呈显著负相关,

关键词：久坐行为学龄前期儿童肌肉力量

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞与分子免疫学杂志 2002年第5期18卷 481-485页

作者：辛若雷包怡华张勤张霆首都儿科研究所北京市感染与免疫中心实验室北京100020

目的　分析人类腺病毒 (HAdV)六邻体保守区氨基酸序列 ,合成保守区多肽并制备抗多肽抗体 ,以确定型间共同的特异性表位。方法　用ClustalX、Antheprot等软件 ,对HAdV六邻体进行分析 ,确定保守区并分析其抗原性。合成抗原性多肽 ,免疫家... 详细信息

目的　分析人类腺病毒 (HAdV)六邻体保守区氨基酸序列 ,合成保守区多肽并制备抗多肽抗体 ,以确定型间共同的特异性表位。方法　用ClustalX、Antheprot等软件 ,对HAdV六邻体进行分析 ,确定保守区并分析其抗原性。合成抗原性多肽 ,免疫家兔制备抗肽多克隆抗体。用间接免疫荧光法和Westernblot法 ,检测所制备的抗肽抗体与病毒抗原的反应性。结果　根据HAdV 2六邻体的保守区合成 9种肽段 ,分成 3组免疫家兔 ,共获得 3组抗肽抗体。所有的抗肽抗体在 1∶10 0 0稀释度时 ,与 3个型别的HAdV感染细胞裂解物中相对分子质量 (Mr)约为 116 0 0 0的六邻体亚单位具有特异性反应。抗肽抗体对HAdV感染细胞有特征性荧光染色。 3组抗肽抗体中 ,有 7个抗体与 3个型别的HAdV感染细胞均具有阳性染色反应。结论　合成的保守区多肽能够诱导抗肽抗体产生 ,诱导产生的抗体与HAdV 3、 4、 7具有免疫反应性。

关键词：呼吸道抗原表位 HAdV 合成多肽抗原性分析抗肽抗体

基于RNA-seq的甲氨蝶呤处理sv129胚胎干细胞的转录组学分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

山西医科大学学报 2023年第6期54卷 808-813页

作者：王芳包怡华李建婷谢秋张霆首都儿科研究所儿童发育营养组学北京市重点实验室北京100020 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室中国医学科学院北京协和医院中心实验室

目的利用转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)技术探讨抗叶酸代谢药物甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)处理的小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESC)基因转录表达的变化,并探讨其可能影响的生物学过程和关键信号通路。方法将mESC... 详细信息

目的利用转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)技术探讨抗叶酸代谢药物甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)处理的小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESC)基因转录表达的变化,并探讨其可能影响的生物学过程和关键信号通路。方法将mESC分为两组,其中对照组采用完全培养基培养,MTX组在此基础上加入0.12μmol/L MTX药物处理。MTX处理24 h分别收集细胞,提取总RNA进行RNA-seq,获得胚胎早期全基因转录组图谱并采用Deseq2软件筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),采用生物信息学R软件包对MTX组与对照组进行差异基因的功能及通路分析。结果MTX组与对照组的转录组相比,共有365个DEGs,其中144个显著上调表达,221个显著下调。GO(Gene Ontology)功能富集分析显示,生物学过程(biological process,BP)分类集中在肌肉系统发育、肌肉收缩、肌纤维发育等肌肉系统发育过程,细胞组分(cellular component,CC)分类集中在细胞膜组分、肌原纤维、收缩纤维、肌丝、肌节等肌肉组分,分子功能(molecular function,MF)分类集中在跨膜转运蛋白结合活性及膜通道活性。KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)生物功能分析显示DEGs显著性富集的通路在钙信号通路、紧密连接。结论抗叶酸代谢药物甲氨蝶呤能够引起mESC基因组的转录改变,DEGs功能主要与肌肉发育以及肌肉纤维发育相关,同时DEGs富集的关键信号通路主要有肌肉发育相关的膜通道的钙离子信号通路和紧密连接。

关键词：转录组测序甲氨蝶呤差异表达基因叶酸胚胎干细胞

腺病毒六邻体蛋白部分基因的构建表达及表达产物抗原性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华微生物学和免疫学杂志 2002年第4期22卷 433-434页

作者：张勤张霆辛若雷包怡华吴建新首都儿科研究所北京100020

腺病毒是人类呼吸道、胃肠道、眼部等部位许多疾患的重要病原之一，引起人的急性呼吸系统疾病、流行性角膜结合膜炎、咽结合膜热等。在儿童急性感染疾病中，2%-7%是由腺病毒引起的，有时可造成一定范围的流行。由于腺病毒型别较多，给... 详细信息

腺病毒是人类呼吸道、胃肠道、眼部等部位许多疾患的重要病原之一，引起人的急性呼吸系统疾病、流行性角膜结合膜炎、咽结合膜热等。在儿童急性感染疾病中，2%-7%是由腺病毒引起的，有时可造成一定范围的流行。由于腺病毒型别较多，给实验室诊断带来一定困难。在临床时行腺病毒感染的快速诊断时常需要获得特异性强的高效价病毒抗体。而传统的纯化病毒方法制备腺病毒抗体费时、费力，且往往难以得到特异性较高的抗体。本研究通过计算机比较腺病毒六邻体氨基酸序列，结合三维结构图提示的多肽暴露情况以及抗原性预测分析，选择性地表达了若干个抗原性较强的多肽，并对其具有免疫原性进行了初步分析。

关键词：基因表达免疫原性间接免疫荧光法免疫印迹法腺病毒六邻体蛋白

中国人β神经生长因子基因的分子克隆、序列分析及其在哺乳动物细胞中的分泌表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基础医学与临床 1997年第6期17卷 25-29,24页

作者：王爱坤刘哲伟包怡华首都儿科研究所北京市高技术实验室

以正常人血淋巴细胞染色体ＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增出短体前β神经生长因子（ｐｒｅ－ｐｒｏ－β－ＮＧＦ）编码基因。将所得基因片段重组于Ｍ１３噬菌体载体，筛选得到含中国人ｐｒｅｐｒｏ－β－ＮＧＦ基因的克隆。采用Ｓａｎｇｅｒ... 详细信息

以正常人血淋巴细胞染色体ＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增出短体前β神经生长因子（ｐｒｅ－ｐｒｏ－β－ＮＧＦ）编码基因。将所得基因片段重组于Ｍ１３噬菌体载体，筛选得到含中国人ｐｒｅｐｒｏ－β－ＮＧＦ基因的克隆。采用Ｓａｎｇｅｒ单链末端终止法测出其全部的核苷酸序列，该序列与国外文献所报道的仅有一个碱基不同。将该基因亚克隆于真核表达载体ｐＥＶ１，经转染哺乳动物细胞ＢＨＫ后，在培养上清中检测到了成熟型β－ＮＧＦ。

关键词：神经生长因子基因克隆序列分析基因表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

人流感病毒核蛋白的重组表达及其抗原性分析

中华实验和临床病毒学杂志 2008年第3期22卷 208-210页

作者：包怡华辛若雷邓洁王芳钱渊吴建新张霆首都儿科研究所北京100020

目的探索用原核表达的人甲3型流感病毒核蛋白（NP）免疫小鼠所获得的抗重组蛋白抗体检测甲型流感病毒的可行性。方法用Clustal X，Antheprot等软件，对IFV-A3 NP进行分析，确定保守区并分析其抗原性。RT-PCR获得NP基因，分3段克隆NP... 详细信息

目的探索用原核表达的人甲3型流感病毒核蛋白（NP）免疫小鼠所获得的抗重组蛋白抗体检测甲型流感病毒的可行性。方法用Clustal X，Antheprot等软件，对IFV-A3 NP进行分析，确定保守区并分析其抗原性。RT-PCR获得NP基因，分3段克隆NP基因到PET-28（C），并在BL21中诱导表达。经Ni-Agarose亲和层析柱纯化后，免疫BALB／c鼠制备抗重组蛋白抗体。用Western Blot和免疫组化法检测抗重组蛋白抗体与病毒抗原的反应性。结果重组质粒在BL21中高效表达，表达量为15～20mg／L菌液。Western Blot检测显示，抗NP1、NP2、NP3多克隆抗体（1：2000）均对流感病毒NP具有反应性。免疫组化检测也显示，抗NPI、NP2、NP3多克隆抗体对IFV-A3、-Al感染的MDCK细胞有特异性染色，抗体滴度从1：640到1：1280。结论重组表达的NP能够诱导产生高效价多克隆抗体，所产生的抗体与IFV-A3、Al具有交叉免疫反应性。通过生物信息学分析预测抗原性并制备多克隆抗体是可行的，并可望用于流感病毒感染的早期快速诊断的研究中。

关键词：正黏病毒科基因表达调控病毒抗原免疫组织化学计算生物学