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阿尔茨海默病相关免疫炎症反应的研究进展

生命科学 2024年第4期36卷 467-476页

作者：于佳欣林淼张文轩劳凤学黄汉昌北京联合大学功能因子与脑科学研究院北京100023 北京联合大学天然产物开发与创新药物研究重点实验室北京100023

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是一种慢性神经退行性疾病,其病理特征表现为细胞内呈现神经原纤维缠结和细胞外形成淀粉样斑块。越来越多的证据表明,包括神经炎症在内的炎症反应可能在AD发病机制中发挥重要作用。机体的免疫细... 详细信息

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是一种慢性神经退行性疾病,其病理特征表现为细胞内呈现神经原纤维缠结和细胞外形成淀粉样斑块。越来越多的证据表明,包括神经炎症在内的炎症反应可能在AD发病机制中发挥重要作用。机体的免疫细胞在感知外界刺激后,释放出的各类细胞因子正是诱发炎症反应和AD早期症状的关键因素。本文总结了在AD发展过程中,一些免疫细胞如小胶质细胞、巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞参与AD初期病理特征发展的机制,探讨不同免疫细胞在AD发生发展中的作用,以加深我们对先天免疫系统与AD发病机制之间关系的认识。

关键词：阿尔茨海默病免疫细胞炎症反应 β-淀粉样蛋白

玉米黄素对内质网应激引发的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

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中国食品学报 2023年第7期23卷 37-44页

作者：商迎辉魏俊李梦洁刘芸如黄汉昌劳凤学北京市生物活性物质和功能食品重点实验室、北京联合大学功能因子与脑科学研究院北京100191

目的:研究玉米黄素对内质网应激引起的细胞凋亡的保护作用。试验分为空白对照组、衣霉素(TM)损伤组(5μg/mL)、玉米黄素保护组(5μmol/L)和损伤加保护组。采用Caspase 3试剂盒检测Caspase 3活性的变化;采用Western Blot法测定凋亡相关蛋... 详细信息

目的:研究玉米黄素对内质网应激引起的细胞凋亡的保护作用。试验分为空白对照组、衣霉素(TM)损伤组(5μg/mL)、玉米黄素保护组(5μmol/L)和损伤加保护组。采用Caspase 3试剂盒检测Caspase 3活性的变化;采用Western Blot法测定凋亡相关蛋白PERK、CHOP,PERK下游信号分子elF2α和ATF4,以及自噬相关蛋白Beclin 1。结果显示:与TM模型组相比,玉米黄素处理后PERK及其下游调控蛋白elF2α和ATF4的表达能力显著下降(P<0.01),Beclin 1的水平显著升高(P<0.01)。与未加自噬抑制剂相比,玉米黄素组的GRP78水平显著升高(P<0.01)。与对照组相比,TM模型组的CHOP蛋白的表达水平极显著升高(P<0.01),而玉米黄素处理组CHOP蛋白的表达水平极显著低于TM模型组(P<0.01)。结论:玉米黄素能减轻由内质网应激引起的损伤作用,并且可逆转TM引起的损伤。其作用机制是:玉米黄素通过抑制PERK通路,进而抑制GRP78与ERS感受器的分离,降低促凋亡因子CHOP的水平,通过调控保护性自噬来缓解ERS。

关键词：玉米黄素内质网应激 SH-SY5Y细胞细胞凋亡

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玉米黄素对衣霉素诱导的SH-SY5Y细胞周期、自噬、凋亡的保护作用

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食品科学 2022年第7期43卷 112-119页

作者：章丽娜李梦洁商迎辉刘芸如黄汉昌劳凤学北京市生物活性物质和功能食品重点实验室北京联合大学功能因子与脑科学研究院北京100191

目的:探讨玉米黄素对衣霉素(tunicamycin,TM)诱导的SH-SY5Y细胞活性、细胞周期、自噬及凋亡的影响。方法:分别设置空白对照组(不作处理)、玉米黄素组(5μmol/L玉米黄素)、TM损伤组(5μg/mL TM)和损伤加保护组(5μmol/L玉米黄素预处理+5... 详细信息

目的:探讨玉米黄素对衣霉素(tunicamycin,TM)诱导的SH-SY5Y细胞活性、细胞周期、自噬及凋亡的影响。方法:分别设置空白对照组(不作处理)、玉米黄素组(5μmol/L玉米黄素)、TM损伤组(5μg/mL TM)和损伤加保护组(5μmol/L玉米黄素预处理+5μg/mL TM进一步共处理),采用噻唑蓝法检测各处理对SH-SY5Y细胞存活率的影响,从而筛选药物共处理时间;采用流式细胞术测定细胞周期的变化;通过Western blot法测定自噬相关蛋白Beclin1、Beclin1-C和微管结合蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1 light chain 3,LC3)B以及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma 2,BCL2)的表达量。结果:玉米黄素(5μmol/L)能减轻TM对SHSY5Y细胞存活率的抑制作用,与TM损伤组相比,损伤加保护组在处理时间为36 h时差异极显著(P<0.01),48 h时差异显著(P<0.05);而TM损伤组相较于空白对照组在处理24、36、48 h时均表现出极显著差异(P<0.01)。与空白对照组相比,TM处理可以极显著增加细胞周期中G0/G1期细胞数量(P<0.01),显著或极显著增加LC3B(P<0.01)、Beclin1(P<0.05)及Beclin1-C(P<0.05)表达水平,极显著降低G2/M期细胞数量(P<0.01)、抗凋亡蛋白BCL2表达水平(P<0.01)。而玉米黄素联合TM处理与TM损伤组比较,均能减轻TM引起的改变,其中BCL2蛋白水平显著提高(P<0.05)。结论:玉米黄素可减轻TM处理引起的SH-SY5Y细胞周期G1期阻滞、促细胞自噬与促凋亡作用,其作用机制与玉米黄素对细胞存活率、细胞周期分布和自噬、凋亡相关蛋白表达的调节有关。

关键词：玉米黄素 SH-SY5Y细胞细胞周期自噬凋亡

白藜芦醇对内质网应激介导的原代神经元细胞作用机制

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食品科学 2022年第21期43卷 180-190页

作者：刘芸如赵范范叶慧敏商迎辉李梦洁黄汉昌劳凤学北京联合大学功能因子与脑科学研究院北京市生物活性物质和功能食品重点实验室北京100191

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对衣霉素(tunicamycin,TM)诱导内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)模型的神经保护作用及其作用机制。方法:取怀孕18 d孕鼠分离的胎鼠海马神经元进行原代培养,设置对照组(不作处理)、TM组... 详细信息

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对衣霉素(tunicamycin,TM)诱导内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)模型的神经保护作用及其作用机制。方法:取怀孕18 d孕鼠分离的胎鼠海马神经元进行原代培养,设置对照组(不作处理)、TM组(质量浓度2.5μg/mL)、Res组(5μmol/L)和Res+TM组(5μmol/L Res预处理+质量浓度2.5μg/mL TM进一步共处理),采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)检测海马神经元存活率并筛选TM和Res最佳作用浓度和时间;利用流式细胞仪分别检测原代神经元凋亡水平和周期状态,通过Western blot分析细胞ERS、自噬、凋亡和周期的相关蛋白变化。结果:5μmol/L Res预处理10 h后能减轻TM对原代神经元细胞存活率的抑制作用,使神经元细胞周期重激活,促使其由G1/G0期向S期进行。与TM组相比,Res预处理10 h组(R10T组)的葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)、Caspase 3相对表达量极显著或显著降低(P<0.01、P<0.05),而自噬相关蛋白Beclin-1、微管结合蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1 light chain 3,LC3)B相对表达量显著升高(P<0.05),磷酸化糖原合成酶激酶3β(phosphorylated glycogen synthase kinase 3β,p-GSK3β)、凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma 2,Bcl2)蛋白相对表达量高度显著或极显著升高(P<0.001、P<0.01),抑制TM引起的细胞凋亡。结论:Res可以减轻TM引起的原代神经元ERS,对原代神经元起到保护作用,其作用机制与Res对细胞存活率、周期分布和自噬、凋亡相关蛋白表达调节有关。

关键词：白藜芦醇原代神经元阿尔茨海默病内质网应激凋亡与自噬

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Flt3配体在肿瘤免疫治疗中的应用

吉林大学学报（医学版） 2009年第2期35卷 393-396页

作者：劳凤学柳忠辉刘端祺北京军区总医院肿瘤科北京100700 吉林大学基础医学院免疫学教研室吉林长春130021

肿瘤是一类严重威胁人类健康和生命的疾病,因此,有关肿瘤早期诊断和治疗一直是科学研究的热点问题。近年针对肿瘤患者的免疫监视功能缺损,以提高树突状细胞(DC)、T细胞及NK细胞介导的肿瘤免疫治疗为策略的癌症治疗方法已经取得了多项进... 详细信息

肿瘤是一类严重威胁人类健康和生命的疾病,因此,有关肿瘤早期诊断和治疗一直是科学研究的热点问题。近年针对肿瘤患者的免疫监视功能缺损,以提高树突状细胞(DC)、T细胞及NK细胞介导的肿瘤免疫治疗为策略的癌症治疗方法已经取得了多项进展,基于Flt3配体(FL)免疫治疗就是其中之一。FL是主要表达于造血干细胞/祖细胞上的Ⅲ型酪氨酸激酶受体Flt3的配体,是一种与早期造血调控有关的生长因子。FL联合其他细胞因子,能够在体内外显著地扩增DC,刺激T细胞和NK细胞增殖,为肿瘤免疫治疗提供了良好的基础。目前采用FL治疗乳腺肿瘤、前列腺肿瘤、颅内肿瘤等,已经显示了其在肿瘤免疫治疗领域中的良好临床应用前景。

关键词： Flt3配体肿瘤免疫治疗树突细胞自然杀伤细胞

稳定表达的人自身免疫调节因子HeLa细胞的建立及鉴定

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吉林大学学报（医学版） 2003年第2期29卷 155-157页

作者：于春雷杨辉劳凤学柳忠辉李一吉林大学基础医学院免疫学教研室吉林长春130021 解放军空军第二航空学院医院

目的 :建立稳定表达人自身免疫调节因子 ( autoimmune regulator,AIRE)的细胞株。方法 :用 Fu GENE6转染试剂将含 AIRE c DNA的真核表达载体转染 He La细胞 ,经 G41 8筛选阳性克隆。继续培养 4周 ,用荧光显微镜观察、流式细胞仪 ( FACS... 详细信息

目的 :建立稳定表达人自身免疫调节因子 ( autoimmune regulator,AIRE)的细胞株。方法 :用 Fu GENE6转染试剂将含 AIRE c DNA的真核表达载体转染 He La细胞 ,经 G41 8筛选阳性克隆。继续培养 4周 ,用荧光显微镜观察、流式细胞仪 ( FACS)检测和免疫印迹法检测 AIRE基因在 He La细胞中的稳定表达情况。结果 :经荧光显微镜、流式细胞仪及免疫印迹法检测 ,证实 AIRE基因得到了稳定表达。结论 :在 Fu GENE6转染试剂的介导下 ,AIRE基因在 He

关键词：自身免疫自身免疫调节因子基因转染 HeLa细胞

益生菌类保健食品中双歧杆菌计数不确定度的评定

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中国食品学报 2021年第10期21卷 227-232页

作者：商迎辉李梦洁刘芸如黄汉昌劳凤学北京联合大学功能因子与脑科学研究院生物化学工程学院北京100191

依据《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》(GB 4789.35-2016),益生菌类保健食品中的双歧杆菌计数的样品稀释和加样过程中,既可以使用1 mL无菌吸量管也可以使用微量移液器。本研究的目是比较两种量具对双歧杆菌计数的测量不... 详细信息

依据《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》(GB 4789.35-2016),益生菌类保健食品中的双歧杆菌计数的样品稀释和加样过程中,既可以使用1 mL无菌吸量管也可以使用微量移液器。本研究的目是比较两种量具对双歧杆菌计数的测量不确定度产生的影响。根据中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布的《测量不确定度评定与表示》(JJF 1059.1-2012),对益生菌类保健食品中双歧杆菌计数的测量不确定度进行评定。不确定度评定主要从影响较大的样品制备、样品稀释、加样和重复检测等几方面进行,样品的双歧杆菌计数过程中样品稀释和加样时分别使用1 mL无菌吸量管和微量移液器。当包含率在95%时,使用吸量管进行稀释和加样时,样品中双歧杆菌计数检测结果的扩展不确定度U为0.28,样品双歧杆菌数的对数值区间为9.35~9.91,样品中双歧杆菌数的置信区间为(2.2~8.1)×10^(9)CFU/g。以移液器作为稀释和加样量具,扩展不确定度U为0.36,样品中双歧杆菌数的对数值区间为9.43~10.15,样品双歧杆菌数的置信区间为(2.7~14)×10^(9)CFU/g。益生菌类保健食品中双歧杆菌的数量较大,稀释倍数大,因此样品稀释引入的不确定度均较大,约占90%。样品稀释和加样过程中使用吸量管与使用移液器相比,使用吸量管带入的不确定度均略小,而使用吸量管对A类不确定度的影响比使用移液器略大。使用吸量管双歧杆菌计数检测结果的扩展不确定度略低。另外,使用两种量具对同一益生菌类保健食品中双歧杆菌进行计数,结果差异显著。

关键词：不确定度保健食品双歧杆菌计数

抗体阻断表面黏附分子DNAM-1和LFA-1对人自然杀伤细胞肿瘤杀伤活性的抑制作用

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中国生物制品学杂志 2010年第11期23卷 1173-1177页

作者：商迎辉张丽劳凤学北京中医药大学北京100029 北京联合大学北京100012

目的探讨抗体阻断表面黏附分子DNAM-1和LFA-1对体外扩增的人自然杀伤(Natural killer,NK)细胞的肿瘤杀伤活性的影响。方法体外活化人外周血单个核细胞来源的NK细胞,并检测其表面黏附分子DNAM-1和LFA-1的表达水平;通过Trans-well阻隔试验... 详细信息

目的探讨抗体阻断表面黏附分子DNAM-1和LFA-1对体外扩增的人自然杀伤(Natural killer,NK)细胞的肿瘤杀伤活性的影响。方法体外活化人外周血单个核细胞来源的NK细胞,并检测其表面黏附分子DNAM-1和LFA-1的表达水平;通过Trans-well阻隔试验,阻断NK细胞与靶细胞接触,考察细胞-细胞直接接触对NK细胞杀伤活性的影响;通过NK细胞毒性试验,引入抗DNAM-1单克隆抗体和抗LFA-1单克隆抗体,阻断相应信号途径,考察相关黏附分子在NK细胞肿瘤杀伤过程中的作用。结果体外活化的NK细胞高表达表面黏附分子DNAM-1和LFA-1。阻断NK细胞与靶细胞接触,NK细胞的肿瘤杀伤效应大大降低。应用单克隆抗体阻断DNAM-1或LFA-1信号途径,可显著降低NK细胞肿瘤的杀伤效应;联合阻断DNAM-1和LFA-1信号途径,可进一步降低NK的细胞杀伤效应。结论细胞-细胞间直接接触是NK细胞发挥肿瘤杀伤效应的重要机制,表面黏附分子DNAM-1和LFA-1介导的信号途径对维持NK细胞肿瘤杀伤活性具有重要意义。

关键词：细胞黏附分子杀伤细胞,天然肿瘤免疫

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重组Lin-7蛋白的表达

吉林大学学报（医学版） 2002年第5期28卷 454-456页

作者：杨煜董辉劳凤学徐桂月张学军柳忠辉吉林大学基础医学院免疫学教研室吉林长春130021 解放军304医院检验科

目的 :表达具有 PDZ功能区的 Lin- 7蛋白 ,并制备抗 Lin- 7蛋白的特异性抗体。方法 :采用质粒构建表达重组 GST- Lin- 7蛋白 ,SDS- PAGE分析表达蛋白 ;以 GST- Lin- 7蛋白为抗原免疫家兔 ,制备抗 Lin- 7多克隆抗体 ,ELISA法检测抗体特... 详细信息

目的 :表达具有 PDZ功能区的 Lin- 7蛋白 ,并制备抗 Lin- 7蛋白的特异性抗体。方法 :采用质粒构建表达重组 GST- Lin- 7蛋白 ,SDS- PAGE分析表达蛋白 ;以 GST- Lin- 7蛋白为抗原免疫家兔 ,制备抗 Lin- 7多克隆抗体 ,ELISA法检测抗体特异性。结果 :重组 GST- Lin- 7蛋白呈分泌型表达于胞浆内 ;制备的抗 Lin- 7抗体与 GST、ARIPs等蛋白无交叉反应。结论 :成功地构建了 Lin- 7蛋白表达质粒 ,并制备了抗 Lin- 7的特异性抗体。

关键词：基因表达抗体重组Lin-7蛋白