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作者：加三三山西医科大学

学位级别：硕士

目的:1.验证Nkx2.1基因在胚胎脑组织正常组和畸形组高通量转录组测序中的表达情况。2.通过全胚胎原位杂交技术确定Nkx2.1基因在小鼠胚胎组织中的时空表达定位。3.初步研究NKX2.1在ATRA诱导的神经管畸形发生过程中的作用机制。方法:1.通... 详细信息

目的:1.验证Nkx2.1基因在胚胎脑组织正常组和畸形组高通量转录组测序中的表达情况。2.通过全胚胎原位杂交技术确定Nkx2.1基因在小鼠胚胎组织中的时空表达定位。3.初步研究NKX2.1在ATRA诱导的神经管畸形发生过程中的作用机制。方法:1.通过在C57BL/6小鼠怀孕胚胎7.5天（E7.5）时,按照体重将一定剂量的全反式维甲酸（ATRA）以灌胃方式注入小鼠体内,建立小鼠胚胎神经管畸形（NTDs）的模型;继续饲养至E8.5、E9.5和E10.5时提取胚胎脑组织;2.通过实时定量聚合酶链式反应（real-time PCR）技术检测E8.5、E9.5和E10.5脑组织中正常组和畸形组Nkx2.1 mRNA水平的表达情况,对RNA测序结果进行验证;3.通过全胚胎原位杂交技术检测Nkx2.1在正常组和畸形组中E8.5、E9.5和E10.5的空间表达情况;4.通过使用脂质体将化学合成的小干扰RNA（siRNA）转染进Neuro-2a细胞干扰Nkx2.1的表达,将实验分为三组:空白对照组（未处理的正常对照组）、阴性对照组（不针对Nkx2.1序列的对照载体质粒转染组）和siRNA-Nkx2.1干扰组（针对Nkx2.1干扰载体质粒转染组）,采用real-time PCR和Western blotting检测转染后Nkx2.1表达结果;5.通过Cell Counting Kit-8法（CCK-8法）检测阴性对照组和siRNA-Nkx2.1干扰组两组细胞增殖能力的变化情况;6.通过流式细胞术检测阴性对照组和sirna-nkx2.1干扰组两组细胞周期的变化情况;7.通过流式细胞术检测阴性对照组、sirna-nkx2.1-24h干扰组（nkx2.1干扰载体质粒转染24h）和sirna-nkx2.1-48h干扰组（nkx2.1干扰载体质粒转染48h）三组细胞凋亡的变化情况;8.通过活化的caspase3染色法,在荧光显微镜下观察阴性对照组、sirna-nkx2.1-24h干扰组和sirna-nkx2.1-48h干扰组三组细胞caspase3的激活情况;9.通过westernblotting检测shh及其下游ptch1、smo的蛋白水平的表达变化;10.统计学分析方法:数据用均数±标准差（x±s）表示,数据分析采用spss17.0软件,p＜0.05表示差异有统计学意义;数据作图使用graphpadprism5软件。结果:1.采用21mg/kg剂量的atra灌胃,成功建立了小鼠胚胎ntds的模型。通过real-timepcr技术检测e8.5、e9.5和e10.5脑组织中,nkx2.1在畸形组表达较正常组明显降低,下降倍数分别约为4倍、20倍、36倍,差异有统计学意义（p＜0.01）;实验数据与rna测序结果一致。2.全胚胎原位杂交技术检测nkx2.1在e8.5正常组的前脑中有微弱表达,e9.5和e10.5在前脑、中脑和后脑各部位有明显表达;而在畸形组各部位几乎均无表达。3.脂质体转染nkx2.1小干扰片段进入neuro-2a细胞,nkx2.1在mrna和蛋白水平表达均降低。在mrna水平,空白对照组、阴性对照组和sirna-nkx2.1干扰组相对表达量分别为1.01±0.09、0.93±0.05和0.35±0.03,sirna-nkx2.1干扰组与空白对照组和阴性对照组比较,差异有统计学意义（p＜0.001）;在蛋白质水平,空白对照组、阴性对照组和sirna-nkx2.1干扰组相对表达量分别为0.76±0.02、0.66±0.12和0.31±0.02,sirna-nkx2.1干扰组与空白对照组和阴性对照组比较,差异有统计学意义（p＜0.001）。***-8法结果得出,转染第1天和第2天,阴性对照组和siRNA-Nkx2.1干扰组两组OD值比较无统计学差异;转染3天后,siRNA-Nkx2.1干扰组的OD值较阴性对照组明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。5.流式结果显示,si RNA-Nkx2.1干扰组的细胞周期中G1期细胞的比例明显低于阴性对照组,阴性对照组和siRNA-Nkx2.1干扰组中G1期细胞的比例分别为（64.23±1.67）%和（49.31±2.51）%,差异有统计学意义（P＜0.01）。6.流式结果显示,siRNA-Nkx2.1干扰组的细胞凋亡率明显高于阴性对照组,且细胞凋亡随时间延长凋亡率逐渐增加;阴性对照组、siRNA-Nkx2.1-24 h干扰组和siRNA-Nkx2.1-48 h干扰组的总凋亡比例分别为（9.93±0.56）%、（12.93±0.63）%和（21.37±1.51）%,不同时间段的干扰组与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。7.活化的Caspase3荧光染色结果显示,与阴性对照组相比,siRNA-

关键词：神经管畸形 NKX2.1 细胞凋亡细胞增殖 Shh

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慢病毒转染和电转染原代C57BL/6小鼠神经干细胞的比较

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中国现代医学杂志 2017年第6期27卷 6-9页

作者：加三三胡俊李美宁张凯丽刘志贞山西医科大学生物化学与分子生物学实验室山西太原030001

目的比较慢病毒与电转染两种技术转染小鼠原代神经干细胞的优劣,获得神经干细胞高效转染的方法。方法从C57BL/6小鼠脑组织中提取神经干细胞,进行原代培养;分别进行慢病毒转染和电转染,通过观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达,比较两种转染... 详细信息

目的比较慢病毒与电转染两种技术转染小鼠原代神经干细胞的优劣,获得神经干细胞高效转染的方法。方法从C57BL/6小鼠脑组织中提取神经干细胞,进行原代培养;分别进行慢病毒转染和电转染,通过观察绿色荧光蛋白在细胞中的表达,比较两种转染方法的转染效果,并用噻唑蓝(MTT)法计算相对存活率,比较两种方法转染后对细胞的影响。结果慢病毒与电转染两种转染技术转染神经干细胞48 h后,慢病毒的转染率为(77.6±6.6)%,高于电转染法转染率([29.2±4.8)%],两者比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论对于原代神经干细胞转染,慢病毒转染法比电转染法具有更高的转染效率及长久稳定性,转染后细胞存活率与电转染法接近,因此慢病毒转染法更能满足研究者的需求。

关键词：神经干细胞慢病毒转染电转染

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阿芬太尼与瑞芬太尼全凭静脉麻醉用于鼻内镜手术效果的比较

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临床麻醉学杂志 2023年第11期39卷 1137-1141页

作者：李岩加三三赵冰清汲媛美王丽何涛何晓兰曾毅空军军医大学第一附属医院麻醉与围术期医学科西安市710032

目的比较全凭静脉麻醉(TIVA)应用阿芬太尼或瑞芬太尼对鼻内镜手术(ESS)效果的影响。方法选择择期行鼻内镜手术的患者130例,男62例,女68例,年龄18~64岁,BMI 18~30 kg/m^(2),ASAⅠ或Ⅱ级。随机将患者分为两组:阿芬太尼组(A组)和瑞芬太尼... 详细信息

目的比较全凭静脉麻醉(TIVA)应用阿芬太尼或瑞芬太尼对鼻内镜手术(ESS)效果的影响。方法选择择期行鼻内镜手术的患者130例,男62例,女68例,年龄18~64岁,BMI 18~30 kg/m^(2),ASAⅠ或Ⅱ级。随机将患者分为两组:阿芬太尼组(A组)和瑞芬太尼组(R组)。A组麻醉诱导依次静脉注射咪达唑仑0.02 mg/kg、丙泊酚靶控输注(TCI)3μg/ml、阿芬太尼20μg/kg、罗库溴铵0.6 mg/kg,麻醉维持采用丙泊酚靶控输注复合阿芬太尼泵注。R组麻醉诱导依次静脉注射咪达唑仑0.02 mg/kg、丙泊酚TCI 3μg/ml、瑞芬太尼1μg/kg、罗库溴铵0.6 mg/kg,麻醉维持采用丙泊酚靶控输注复合瑞芬太尼泵注。记录术中高血压、心动过速、低血压、心动过缓等血流动力学不良反应发生情况,术后30、60 min、24 h的疼痛程度,拔管时间,术后24 h内补救镇痛情况和恶心呕吐、皮肤瘙痒、呼吸抑制等不良反应发生情况。结果与R组比较,A组术中低血压发生率明显降低(P<0.05),术后30、60 min无痛发生率明显升高(P<0.05),轻度疼痛和中度疼痛发生率明显降低(P<0.05),苏醒时间明显延长(P<0.05)。两组术后24 h内补救镇痛差异无统计学意义。两组术后恶心呕吐、皮肤瘙痒、呼吸抑制发生率差异无统计学意义。结论在鼻内镜手术中TIVA应用阿芬太尼对术后镇痛的效果明显优于瑞芬太尼,且围术期不良反应发生率明显低于瑞芬太尼,阿芬太尼的苏醒时间略长于瑞芬太尼。

关键词：阿芬太尼瑞芬太尼全凭静脉麻醉鼻内镜手术

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地高辛标记Ucp2基因RNA探针的制备和应用

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中国生物工程杂志 2018年第9期38卷 55-58页

作者：刘志贞加三三张凯丽孙雨晴赵虹郝宇卉牛勃李美宁山西医科大学生物化学与分子生物学教研室太原030001 第四军医大学口腔颌面外科国家重点实验室西安710032 忻州职业技术学院医学系忻州034000 首都儿科研究所生物技术室北京100020

目的：制备用于检测小鼠胚胎早期Ucp2基因表达的地高辛标记的特异性RNA探针。方法：提取小鼠胚胎脑组织总RNA,设计引物,通过RT-PCR方法获取Ucp2基因片段,将其克隆到pGEM-T载体。分别利用Sp6、T7和Ucp2特异性引物,PCR扩增获得转录模板,通... 详细信息

目的：制备用于检测小鼠胚胎早期Ucp2基因表达的地高辛标记的特异性RNA探针。方法：提取小鼠胚胎脑组织总RNA,设计引物,通过RT-PCR方法获取Ucp2基因片段,将其克隆到pGEM-T载体。分别利用Sp6、T7和Ucp2特异性引物,PCR扩增获得转录模板,通过Sp6及T7 RNA聚合酶,获得地高辛标记的正义、反义Ucp2 RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后,通过全胚胎原位杂交分析制备探针的特异性和杂交效果。结果：成功获得Ucp2基因正义、反义探针,反义探针能高效灵敏检测到Ucp2基因在小鼠胚胎Ed9.5、Ed10.5神经系统呈现高表达,而正义探针未能检测到表达信号。结论：成功制备了特异高效的地高辛标记Ucp2 RNA原位杂交探针,为进一步研究Ucp2基因在小鼠胚胎组织中的表达,尤其在神经组织的定位奠定基础。

关键词： Ucp2 RNA探针全胚胎原位杂交

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下丘脑背内侧核线粒体钙离子单向转运蛋白参与小鼠慢性炎性痛调控的研究

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空军军医大学学报 2024年第12期45卷 1382-1386页

作者：曹秋霞钟海星何晓兰加三三刘慧青王佳佳卢波陈骏萍杭州医学院基础医学与法医学院浙江杭州310059 空军军医大学西京医院麻醉科陕西西安710032 宁波市第二医院麻醉科浙江宁波315010

目的探讨下丘脑背内侧核(DMH)在慢性炎性疼痛中的作用,对其中的线粒体钙离子单向转运蛋白(MCU)是否参与疼痛调节进行研究。方法采用雄性C56BL/6小鼠,左脚掌注射完全弗氏佐剂(CFA)或生理盐水造模,3 d后取材进行MCU及c-Fos的免疫荧光染色... 详细信息

目的探讨下丘脑背内侧核(DMH)在慢性炎性疼痛中的作用,对其中的线粒体钙离子单向转运蛋白(MCU)是否参与疼痛调节进行研究。方法采用雄性C56BL/6小鼠,左脚掌注射完全弗氏佐剂(CFA)或生理盐水造模,3 d后取材进行MCU及c-Fos的免疫荧光染色;在疼痛早期(造模后3 d)和疼痛晚期(造模后14 d)双侧DMH给予MCU激动剂(精胺),给药60 min后进行焦虑行为和/或疼痛行为测试。结果CFA慢性炎性痛显著激活DMH脑区神经元(P加。更为有趣的是,激活MCU可显著增加CFA小鼠静态机械性缩足反射阈值与动态机械性缩足评分(P<0.01),短时间内缓解焦虑情绪(P<0.05,P<0.01)。结论DMH参与慢性炎性痛及其相关焦虑情绪的调控。在DMH脑区外源性给予MCU特异性激动剂精胺可显著缓解慢性炎性痛,这可能与MCU特有的胞内钙离子低阈值关闭特性相关。

关键词：慢性炎性痛下丘脑背内侧核线粒体钙离子单向转运蛋白精胺

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小学科学区域主题教研的实践形式

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教学与管理 2025年第2期 29-33页

作者：史加祥上海市金山区教育学院上海201508

《义务教育科学课程标准(2022年版)》明确科学课程要在整体设计的基础上开展主题教研,创新教研方式和手段,提高针对性与实效性,为教师专业发展提供服务和引领。区域在调查分析教师对科学教育教学改革的专业需求的基础上,探究当前教研活... 详细信息

《义务教育科学课程标准(2022年版)》明确科学课程要在整体设计的基础上开展主题教研,创新教研方式和手段,提高针对性与实效性,为教师专业发展提供服务和引领。区域在调查分析教师对科学教育教学改革的专业需求的基础上,探究当前教研活动中存在的问题与矛盾,设计了基于“多层次支持系统”的主题教研组织框架,细化形成了工作坊、同伴辅导和导师指导等活动方式,在整体分层设计和互动、个性的推进中提升了科学教师对新课标的理解与认识,发展了素养导向下课堂教学实践的能力,为学生核心素养的发展奠定了坚实基础。

关键词：区域主题教研主题教研科学课程标准多层次支持系统教师专业素养

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锂电池相关企业下游河流中锂赋存特征分析

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化工环保 2025年

作者：王富加陈靖肖欣欣王晓伟中国环境科学研究院北京工业大学环境科学与工程学院

以河北省某锂业园区下游河流至入海口的环境介质（河水和沉积物（底泥））为研究对象，分析了河流中锂的赋存特征，评估了其变化趋势以及对环境的潜在危害。研究采用的锂测定方法具有较高的准确度和精密度，锂回收率在75.5%～98.0%，相... 详细信息

以河北省某锂业园区下游河流至入海口的环境介质（河水和沉积物（底泥））为研究对象，分析了河流中锂的赋存特征，评估了其变化趋势以及对环境的潜在危害。研究采用的锂测定方法具有较高的准确度和精密度，锂回收率在75.5%～98.0%，相对标准偏差（n=3）小于5%。研究区域内河流水质指标正常，锂可能以锂离子、碳酸锂沉淀以及有机络合物的形式存在。河水和底泥中的锂含量沿河流流向整体呈上升趋势，河流径流仅能稀释锂含量，但无法消除锂污染，这可能造成环境风险。河水与底泥中锂含量呈显著正相关关系，但由于底泥对锂污染响应缓慢，因此在指示短期排放和长期排放方面具有较大潜力。

关键词：锂锂电池相关企业锂污染赋存特征相关性分析

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超早龄期UHPC力学性能和水化进程研究

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浙江工业大学学报 2025年第1期 22-30页

作者：刘金涛郑柏加张龙杨杨崔娇伟浙江工业大学土木工程学院浙江省工程结构与防灾减灾技术研究重点实验室台州普立德科建筑科技有限公司

超高性能混凝土（Ultra-high performance concrete, UHPC）具有较高的力学性能和耐久性，其早期水化程度剧烈、体积变化大、开裂敏感性较高。基于力学性能及热重试验，分析UHPC超早龄期的拉压强度、拉伸应变、弹性模量和水化进程等时... 详细信息

超高性能混凝土（Ultra-high performance concrete, UHPC）具有较高的力学性能和耐久性，其早期水化程度剧烈、体积变化大、开裂敏感性较高。基于力学性能及热重试验，分析UHPC超早龄期的拉压强度、拉伸应变、弹性模量和水化进程等时变规律。研究结果表明：UHPC超早龄期抗压与抗拉强度发展较快，1 d即可分别达到28 d强度的45%以上；UHPC的拉伸应变随龄期呈现先降低后增加并趋于稳定的规律，UHPC的极限拉伸应变ε在超早龄期仅为77×10-6～92×10-6,而成熟龄期UHPC极限拉伸应变ε为135×10-6～163×10-6;UHPC超早龄期的弹性模量则与抗压强度发展呈现类似的规律，且两者关系符合幂函数发展规律，拉压比稳定在0.06附近；UHPC超早龄期水化进程发展迅速，1 d龄期时水化程度达到20%～30%,较低的水胶比导致UHPC水化程度不高，28 d龄期时水化程度仅为40%～50%。

关键词：超高性能混凝土超早龄期力学性能拉伸应变水化进程

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李白的雪花飘落千年京华

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北京纪事 2025年第1期 82-84页

作者：刘永加

每到寒冬,首都北京都会连降瑞雪,虽然温度骤降以及造成了一些生活麻烦,但同时也给人们带来雪景和乐趣. 1273 年前的唐玄宗天宝十年(751 年)初冬,大诗人李白应朋友之邀,来到了古时候的北京——幽州.就是那么巧,一场异常大的雪纷纷落下,...

每到寒冬,首都北京都会连降瑞雪,虽然温度骤降以及造成了一些生活麻烦,但同时也给人们带来雪景和乐趣. 1273 年前的唐玄宗天宝十年(751 年)初冬,大诗人李白应朋友之邀,来到了古时候的北京——幽州.就是那么巧,一场异常大的雪纷纷落下,这场大雪以及不断飘落的雪花,在浪漫主义诗人李白的眼里,却成了他抒发情怀的由头,于是他写下了千古名句:"燕山雪花大如席,片片吹落轩辕台."

关键词：

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基于“两步浇注”的非线性电导材料涂覆方法及其性能评估

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高电压技术 2025年

作者：邱宇杰潘成潘子君程加明卓然王邸博武汉大学电气与自动化学院电网环境保护全国重点实验室南方电网科学研究院有限责任公司

非线性电导材料表面涂覆具有优异的表面电荷抑制能力并能自适应地调控阻性电场，在直流GIS气-固绝缘结构设计领域广受关注，但目前通过浸渍、刷涂或者喷涂制备的涂层都存在表面光洁度低、均匀性差和重复性不好的问题，这将直接影响涂层... 详细信息

非线性电导材料表面涂覆具有优异的表面电荷抑制能力并能自适应地调控阻性电场，在直流GIS气-固绝缘结构设计领域广受关注，但目前通过浸渍、刷涂或者喷涂制备的涂层都存在表面光洁度低、均匀性差和重复性不好的问题，这将直接影响涂层对表面电荷的抑制效果。为此，本文提出了一种基于“两步浇注”的绝缘子表面涂层制备方法，基于此将非线性电导材料涂覆于锥形绝缘子表面。通过表面形貌测试、表面电荷积聚和直流沿面闪络实验将所提方法与浸渍法、刷涂法、喷涂法进行了对比。结果表明：“两步浇注”法所得涂层表面光滑均匀且无明显缺陷，表面粗糙度相比其它方法大幅下降且表面电荷抑制效果最佳。在-20kV直流电压下，“两步浇注”涂层相比浸渍、刷涂、喷涂法可分别将正、负电荷积聚总量缩减62.7%、68.6%、77.9%与66.7%、20%、67.7%。在直流沿面闪络特性方面，“两步浇注”所得涂层的正、负极性特征沿面闪络电压相比浸渍、刷涂、喷涂法分别提升了2.7%、6.3%、20.7%与4.2%、4.7%、9.9%。进一步，本文结合试样表面粗糙度与表面陷阱分布的测试结果对上述实验现象进行了分析，认为不同涂覆方法下的试样表面粗糙度差异是造成表面电荷分布不同的主要原因，减小表面粗糙度会使试样的表面陷阱能级和密度也随之变小，从而加速电荷在涂层表面的消散过程。

关键词：直流表面涂覆 “两步浇注”法表面电荷积聚闪络

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