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基于靶器官铁死亡探讨绿豆汁炙黄药子的炮制减毒机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第10期30卷 70-76页

作者：段雅倩宋玲玲张月月王君明刘鸣昊李亚敏李炳印巫晓慧王彦嵋河南中医药大学呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心豫药全产业链研发河南省协同创新中心郑州450046 河南中医药大学第一附属医院郑州450000

目的:探究绿豆汁炙黄药子的炮制减毒作用,并基于其主要毒性靶器官肝铁死亡探究其减毒机制。方法:60只雄性ICR小鼠随机分为空白组、生黄药子组、水炙黄药子组,绿豆汁炙黄药子1组(黄药子-绿豆10∶1,闷润40 min,130℃炒18 min)、绿豆汁炙... 详细信息

目的:探究绿豆汁炙黄药子的炮制减毒作用,并基于其主要毒性靶器官肝铁死亡探究其减毒机制。方法:60只雄性ICR小鼠随机分为空白组、生黄药子组、水炙黄药子组,绿豆汁炙黄药子1组(黄药子-绿豆10∶1,闷润40 min,130℃炒18 min)、绿豆汁炙黄药子2组(黄药子-绿豆10∶1,闷润80 min,100℃炒14 min)、绿豆汁炙黄药子3组(黄药子-绿豆20∶3,闷润40 min,160℃炒14 min)。生黄药子及各炮制品组均以3 g·kg^(-1)·d^(-1)的剂量分别灌胃对应的95%乙醇提取物药液,空白组灌胃等体积的0.5%羧甲基纤维素钠,1次/d,连续14 d。苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肝脏组织病理变化;生化检测小鼠血清谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,以及肝组织丙二醛(MDA)、亚铁离子(Fe^(2+))、还原型谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平;蛋白免疫印迹法检测铁关键蛋白铁蛋白重链1(FTH1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达水平。结果:HE染色结果显示,空白组小鼠肝组织结构清晰,肝细胞形态正常;生黄药子组与水炙黄药子组小鼠肝细胞胞质疏松、空泡,病理性损伤明显;各绿豆汁炙黄药子组小鼠病理性损伤明显改善。与空白组比较,生黄药子组小鼠血清ALT、AST水平显著升高(P<0.01),肝组织MDA及Fe^(2+)水平显著升高(P<0.01),GSH、SOD水平显著降低(P<0.01),FTH1、GPX4蛋白表达显著下调(P<0.01);与生黄药子组比较,各绿豆汁炙黄药子组小鼠血清ALT、AST水平显著降低(P<0.01),肝组织MDA的水平明显降低(P<0.05,P<0.01),Fe^(2+)水平显著降低(P<0.01),GSH、SOD水平显著升高(P<0.01),FTH1、GPX4蛋白表达显著上调(P<0.01);与水炙黄药子组比较,各绿豆汁炙黄药子组小鼠血清AST水平明显降低(P<0.05,P<0.01),肝组织MDA水平显著降低(P<0.01),SOD水平明显升高(P<0.05,P<0.01),FTH1蛋白表达显著上调(P<0.01),绿豆汁炙黄药子2、3组小鼠血清ALT水平显著降低(P<0.01),肝组织Fe^(2+)水平显著降低(P<0.01),GSH水平明显升高(P<0.05,P<0.01),GPX4蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01)。各绿豆汁炙黄药子组中以绿豆汁炙黄药子3组的减毒效果最佳,即黄药子-绿豆=20∶3,闷润40 min,160℃炒14 min。结论:绿豆汁炙法能够缓解黄药子导致的肝损伤,其减毒机制可能与抑制其靶器官肝脏的铁死亡有关。

关键词：黄药子绿豆药汁炙法肝损伤炮制减毒铁死亡氧化应激

基于主要质控成分含量分析并结合古籍记载和现代演变的生地黄特色炮制评价

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时珍国医国药 2024年第4期35卷 887-891页

作者：龙冰玉张月月王君明巫晓慧刘鸣昊宋玲玲李亚敏何庆文雷一鸣河南中医药大学药学院河南郑州450046 豫药全产业链研发河南省协同创新中心河南郑州川450046 河南中医药大学呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心河南郑州450046 河南中医药大学第一附属医院河南郑州450000

目的基于主要质控成分梓醇和地黄苷D含量分析对生地黄特色炮制进行客观评价。方法采用古籍记载、闷润烘干、闷润冻干三类炮制方法制备生地黄特色炮制品,采用高效液相色谱法(HPLC)测定生地黄特色炮制前后主要质控成分梓醇和地黄苷D含量... 详细信息

目的基于主要质控成分梓醇和地黄苷D含量分析对生地黄特色炮制进行客观评价。方法采用古籍记载、闷润烘干、闷润冻干三类炮制方法制备生地黄特色炮制品,采用高效液相色谱法(HPLC)测定生地黄特色炮制前后主要质控成分梓醇和地黄苷D含量并通过熵权法对其赋权评分,基于主要质控成分综合评价生地黄特色炮制品。结果就梓醇、地黄苷D的含量而言,除了焦生地外,生地黄及其各特色炮制品均符合《中国药典》2020版的限量规定;就梓醇含量而言,盐闷冻干品、酒闷冻干品、姜闷冻干品、醋闷冻干品均显著高于生地黄生品(P<0.01),其中尤以盐闷冻干品的含量0.894%为最高,而其他炮制品均显著低于生地黄生品(P<0.01);就地黄苷D含量而言,古籍记载炙法中盐炙品、酒炙品、姜炙品、醋炙品均显著高于生地黄生品(P<0.01)且以盐炙法为高,闷润烘干品中仅盐闷烘干品显著高于生地黄生品(P<0.05),闷润冻干品中仅盐闷冻干品(P<0.01)和姜闷冻干品(P<0.05)显著高于生地黄生品;质控成分梓醇和地黄苷D的熵权法赋权评分结果显示,盐闷冻干品综合评分最高,姜闷冻干品其次,分别比生地黄生品综合评分高21.4%、16.9%。结论生地黄特色炮制(炙法、闷润烘干、闷润冻干)品中质控成分梓醇和地黄苷D的含量均达标,不管是古籍记载炙法还是现代闷润烘干、闷润冻干的生地黄各炮制品,均以盐制法(盐炙法、盐闷烘干、盐闷冻干)炮制质控成分梓醇和地黄苷D的含量为高;盐闷冻干、酒闷冻干、姜闷冻干、醋闷冻干法炮制均能够提升生地黄质控成分的含量,尤以盐闷冻干炮制为优,姜闷冻干炮制其次。

关键词：生地黄古籍记载炮制盐制法闷润冻干法熵权法

LC-MS/MS法比较不同炮制饮片组成的化痰祛湿活血方中20个成分含量

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中华中医药杂志 2022年第11期37卷 6718-6723页

作者：黄亚森张振凌刘鸣昊河南中医药大学郑州450046 河南中医药大学第一附属医院郑州450006

目的:通过LC-MS/MS法探究炮制和煎煮方式对化痰祛湿活血方中20个成分含量的影响。方法:采用LC-MS法建立了测定化痰祛湿活血方中柴胡皂苷a、大黄酚、柴胡皂苷b2、23-乙酰泽泻醇C、柴胡皂苷b1、泽泻醇A、金丝桃苷、槲皮苷、橙皮苷、阿魏... 详细信息

目的:通过LC-MS/MS法探究炮制和煎煮方式对化痰祛湿活血方中20个成分含量的影响。方法:采用LC-MS法建立了测定化痰祛湿活血方中柴胡皂苷a、大黄酚、柴胡皂苷b2、23-乙酰泽泻醇C、柴胡皂苷b1、泽泻醇A、金丝桃苷、槲皮苷、橙皮苷、阿魏酸、橙黄决明素、丹酚酸B、槲皮素、绿原酸、水飞蓟宾、23-乙酰泽泻醇B、丹参酮ⅡA、柴胡皂苷d、山柰酚、芦丁20个成分含量的方法,对比分析将方中泽泻、丹参、郁金、柴胡换成麸炒泽泻、酒丹参、醋郁金、醋柴胡后单煎、混煎4组样品含量的差异。采用Acquity UPLC?BEH RP18色谱柱,流动相为乙腈-0.1%甲酸水梯度洗脱,电喷雾离子源,正负离子模式,分析炮制前后、单煎、混煎的化痰祛湿活血方中20个成分的变化。结果:20个成分在各自浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率为95.33%~101.30%。炮制前后、单煎、混煎造成化痰祛湿活血方中20个成分含量有明显差异,其中阿魏酸、柴胡皂苷d、丹酚酸B、水飞蓟宾、泽泻醇A、丹参酮ⅡA、23-乙酰泽泻醇C、槲皮素对组间差异贡献很大。结论:本研究所建立的方法快速、准确、灵敏度高、重复性好,可为化痰祛湿活血方质量标准的建立提供科学依据;同时,炮制前后、单煎、混煎存在明显的差异,炮制对中医临床方剂影响很大。

关键词：炮制化痰祛湿活血方含量测定液相色谱-质谱联用技术主成分分析偏最小二乘法判别分析成分质量标准

基于“从肺治肝”理论探讨干预细胞焦亡对非酒精性脂肪性肝炎的影响

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中国中医基础医学杂志 2022年第4期28卷 582-585页

作者：尚东方刘鸣昊张丽慧马庆亮赵文霞河南中医药大学研究生院郑州450046 河南中医药大学第一附属医院郑州450004

“肝升肺降”是中医的经典理论,指的是“肝升于左,肺降于右”的生理功能,组成了人体的气机枢纽。肝肺功能的正常发挥关系到人体的气机、血行和津液代谢,病理情况下可能引起“痰湿瘀浊”在肝脏的沉积,出现非酒精性脂肪性肝炎(non-alcohol... 详细信息

“肝升肺降”是中医的经典理论,指的是“肝升于左,肺降于右”的生理功能,组成了人体的气机枢纽。肝肺功能的正常发挥关系到人体的气机、血行和津液代谢,病理情况下可能引起“痰湿瘀浊”在肝脏的沉积,出现非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic fatty liver disease,NASH),临床上用苇茎汤加减“从肺治肝”、涤浊化瘀,取得了较好的疗效。在NASH的发病机制中炎症和肠道菌群紊乱都起着重要作用。现代研究发现脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)等可以诱导肝脏内的巨噬细胞焦亡,放大肝脏的炎症反应,这一过程类似于“痰湿瘀浊”在肝脏的形成和积聚,中医理论认为“肝与大肠相通”而“肺与大肠相表里”,故基于“从肺治肝”理论探讨中药干预细胞焦亡对NASH的治疗作用,可以为中医经典理论和中医药治疗NASH提供微观依据。

关键词：肝升肺降从肺治肝焦亡非酒精性脂肪性肝炎

化痰祛湿活血方对脂多糖诱导的巨噬细胞焦亡形态的影响

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临床肝胆病杂志 2022年第9期38卷 2016-2019页

作者：刘鸣昊刘素彤尚东方张丽慧顾亚娇赵文霞河南中医药大学第一附属医院脾胃肝胆科郑州450000

目的化痰祛湿活血方对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞焦亡形态的影响及机制研究。方法复制体外LPS诱导活化RAW264.7细胞模型,分为空白组,模型组,化痰祛湿活血方高、中、低剂量组,对照组。经相应的含药血清干预24 h。扫描电子显微镜观察... 详细信息

目的化痰祛湿活血方对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞焦亡形态的影响及机制研究。方法复制体外LPS诱导活化RAW264.7细胞模型,分为空白组,模型组,化痰祛湿活血方高、中、低剂量组,对照组。经相应的含药血清干预24 h。扫描电子显微镜观察各组细胞形态。免疫荧光对GSDMD-N进行定量定位分析。结果空白组细胞形态圆形规整,表面光滑;对照组细胞肿胀,表面有褶皱,包膜有隙,符合细胞焦亡形态。对照组细胞表面有气泡状突出物,伪足明显。细胞膜有孔隙,高剂量组细胞形态无肿胀,表面粗糙有伪足,胞膜上未见明显孔隙。低剂量和中剂量组细胞肿胀,细胞膜表面粗糙有孔隙,有伪足伸出。免疫荧光结果显示,与空白组相比模型组GSDMD-N阳性染色强度明显增加,对照组与中药组较模型组GSDMD-N阳性染色强度均有减弱。结论化痰祛湿活血方可改善巨噬细胞焦亡现象,减少GSDMD-N表达。

关键词：脂肪肝巨噬细胞细胞焦亡

化痰祛湿活血方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠模型肝细胞线粒体超微结构的影响

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临床肝胆病杂志 2022年第8期38卷 1780-1783页

作者：刘素彤张丽慧顾亚娇刘鸣昊郭敏赵晨露赵文霞河南中医药大学第一附属医院脾胃肝胆科郑州450000

目的探讨化痰祛湿活血方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠模型肝细胞形态的影响。方法48只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、易善复组、化痰祛湿活血方组,每组12只。模型组和药物组大鼠第2周开始给药及造模,空白组给予普通饲料,另外3组给予... 详细信息

目的探讨化痰祛湿活血方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠模型肝细胞形态的影响。方法48只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、易善复组、化痰祛湿活血方组,每组12只。模型组和药物组大鼠第2周开始给药及造模,空白组给予普通饲料,另外3组给予高脂饲料。依据人与动物剂量折算法:化痰祛湿活血方等效剂量为1.26 g/100 g体质量,多烯磷脂酰胆碱胶囊(易善复)等效剂量为0.01418 g/100 g体质量。模型组灌胃0.9%氯化钠溶液,易善复组灌胃多烯磷脂酰胆碱混悬液,中药组给予灌胃化痰祛湿活血方颗粒混悬液,1次/d,连续10周。透射电子显微镜观察各组大鼠肝脏超微结构级定量分析。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较,方差齐者采用LSD-t检验,方差不齐者采用Dunnett’s T3检验。结果模型组可见肝细胞内有大量脂滴积累,线粒体形态和结构改变,数量减少,内质网数量减少。化痰祛湿活血方组肝细胞内脂滴明显减少,线粒体和内质网数量较模型组明显增加,线粒体膜及结构完整。易善复组肝细胞脂滴相对减少,线粒体数量增加,内质网数量减少,线粒体膜及结构相对完整。定量分析结果显示,与空白组相比,模型组脂滴面积明显增多,线粒体减少,体密度比较差异均有统计学意义(P值均<0.01);药物干预后,易善复组脂滴面积减少、线粒体数目增多,与模型组体密度比较差异均有统计学意义(P值均<0.01);中药组较易善复组脂滴面积减少更多、线粒体数目明显增加,体密度比较差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论化痰祛湿活血方可改善脂质积累,增加线粒体体密度,保护线粒体结构和功能且疗效高于易善复。

关键词：非酒精性脂肪性肝病化痰祛湿活血方线粒体,肝大鼠,Sprague-Dawley

铁死亡的发生机制及其在非酒精性脂肪性肝病/非酒精性脂肪性肝炎发生发展中的作用

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临床肝胆病杂志 2022年第5期38卷 1152-1155页

作者：刘鸣昊刘素彤张丽慧顾亚娇尚东方肖准赵文霞河南中医药大学第一附属医院脾胃肝胆科郑州450000

铁死亡是脂质过氧化驱动、铁依赖的细胞死亡。发生机制与铁稳态失衡、脂质过氧化及SLC7A11-GSH-GPX4抗氧化系统有关。在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)/非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的发生发展中发挥关键作用。抑制铁死亡,几乎可以完全抑制NAS... 详细信息

铁死亡是脂质过氧化驱动、铁依赖的细胞死亡。发生机制与铁稳态失衡、脂质过氧化及SLC7A11-GSH-GPX4抗氧化系统有关。在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)/非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的发生发展中发挥关键作用。抑制铁死亡,几乎可以完全抑制NASH发生。通过对铁死亡发生机制及其在NAFLD/NASH疾病中的作用和进展进行综述,并提出铁死亡研究的策略和技术手段,以期为NAFLD/NASH机制研究提供参考。

关键词：非酒精性脂肪性肝病铁死亡脂质过氧化

PBL联合情景模拟教学法在肝胆病科临床教学的应用

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中国中医药现代远程教育 2023年第15期21卷 1-3页

作者：杨培伟刘鸣昊赵文霞河南中医药大学第一附属医院脾胃肝胆科河南郑州450000 河南中医药大学第一临床医学院河南郑州450046

肝胆病是临床内科学的主要部分,在临床带教的过程中容易出现肝胆病科医师机械地传授知识、学生全程被动接受以致于讲课效果差、学生对知识点不能很好地掌握和理解等问题。文章总结了PBL教学法和情景模拟教学法在肝胆病科临床教学中的特... 详细信息

肝胆病是临床内科学的主要部分,在临床带教的过程中容易出现肝胆病科医师机械地传授知识、学生全程被动接受以致于讲课效果差、学生对知识点不能很好地掌握和理解等问题。文章总结了PBL教学法和情景模拟教学法在肝胆病科临床教学中的特色和优势以及临床具体应用,为高等医学院的肝胆病科临床带教医师提升临床带教水平提供一定的参考。

关键词： PBL教学法情景模拟教学法肝胆病临床教学

细胞焦亡与非酒精性脂肪性肝炎“痰湿瘀”病机的微观联系与治疗

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世界中医药 2023年第17期18卷 2480-2483页

作者：宋艺佳刘鸣昊赵文霞河南中医药大学郑州450000 河南中医药大学第一附属医院郑州450000

细胞焦亡是一种促炎性细胞程序性死亡,在非酒精性脂肪性肝炎发展中扮演重要角色。“痰湿瘀”互结于肝络是非酒精性脂肪性肝炎的核心病机,与细胞焦亡之间可能存在一定的内在联系。因此,通过细胞焦亡与“痰湿瘀”病机的微观联系,探讨中药... 详细信息

细胞焦亡是一种促炎性细胞程序性死亡,在非酒精性脂肪性肝炎发展中扮演重要角色。“痰湿瘀”互结于肝络是非酒精性脂肪性肝炎的核心病机,与细胞焦亡之间可能存在一定的内在联系。因此,通过细胞焦亡与“痰湿瘀”病机的微观联系,探讨中药治疗非酒精性脂肪性肝炎的作用机制,为中药治疗非酒精性脂肪性肝炎的作用机制研究提供新思路。

关键词：非酒精性脂肪性肝炎痰湿瘀细胞焦亡中医病机微观联系治疗中药微观辨证