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HBX蛋白反式激活基因XTP4抑制HepG2细胞凋亡

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基础医学与临床 2015年第12期35卷 1591-1595页

作者：时朝辉张梦然王丽丽刘顺爱梁璞吴君成军梁跃东贵州医科大学贵州贵阳550004 首都医科大学附属北京地坛医院传染病研究所北京100015

目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBXAg)反式激活基因4(XTP4)对肝母细胞瘤细胞HepG2细胞凋亡的影响。方法构建XTP4基因的真核表达质粒pc DNA3.1/myc-His(-)A-XTP4(p XTP4)及化学合成XTP4基因的干扰RNA(si XTP4)后,分别将XTP4基因的真核表达... 详细信息

目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBXAg)反式激活基因4(XTP4)对肝母细胞瘤细胞HepG2细胞凋亡的影响。方法构建XTP4基因的真核表达质粒pc DNA3.1/myc-His(-)A-XTP4(p XTP4)及化学合成XTP4基因的干扰RNA(si XTP4)后,分别将XTP4基因的真核表达质粒、干扰RNA及各自的阴性对照(NC、si NC)瞬时转染HepG2细胞中,48 h后进行以下实验:用Western blot验证XTP4在蛋白水平的过表达和干扰表达;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白水平并计算Bcl-2/Bax比值;化学发光法检测胱冬肽酶-3(caspase-3)的活性。结果成功构建了XTP4的真核表达质粒p XTP4、XTP4在蛋白水平过表达和干扰表达。与各自的阴性对照组相比,过表达XTP4的HepG2细胞中,Annexin V+细胞数显著减少(P<0.05),Bcl-2/Bax比值增高(P<0.05),胱冬肽酶-3活性下降(P<0.05);而干扰XTP4表达的HepG2细胞中,Annexin V+细胞数显著增加(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05),胱冬肽酶-3活性上升(P<0.05)。结论 XTP4具有抑制HepG2细胞凋亡的作用,可能是通过增加Bcl-2/Bax的比值实现。

关键词： XTP4基因 HepG2细胞细胞凋亡

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HCV基因6型流行病学研究进展

中国肝脏病杂志（电子版） 2014年第2期6卷 91-93页

作者：冯胜虎杨松刘顺爱王琦张锦前成军首都医科大学附属北京地坛医院传染病研究所北京100015 新发突发传染病研究北京市重点实验室北京100015 首都医科大学附属北京地坛医院内五科北京100015

HCV是慢性肝病和肝癌的主要原因之一。目前全球约有1.7亿人感染HCV病毒。HCV基因多样性程度高，分为至少6种基因型和至少83种基因亚型，这是HCV感染慢性化的一个重要因素。了解HCV各基因型的流行病学特点将有助于临床诊断、治疗和疾病... 详细信息

HCV是慢性肝病和肝癌的主要原因之一。目前全球约有1.7亿人感染HCV病毒。HCV基因多样性程度高，分为至少6种基因型和至少83种基因亚型，这是HCV感染慢性化的一个重要因素。了解HCV各基因型的流行病学特点将有助于临床诊断、治疗和疾病预防。HCV基因6型有多种亚型，同时特殊的传播途径又加快了这种基因型病毒的传播速度，因此了解HCV基因6型的流行病学特点显得越来越重要。现将相关研究进展总结如下。

关键词：流行病学特点 HCV基因基因型病毒感染慢性化基因亚型 HCV病毒基因多样性慢性肝病

转录组及microRNA测序分析研究JFH-1感染Huh7.5.1的HCV细胞模型

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转录组及microRNA测序分析研究JFH-1感染Huh7.5.1的HCV细胞模型

中华医学会第十三次全国感染病学术会议

作者：张锦前刘顺爱高萍王琦梁璞成军首都医科大学附属北京地坛医院传染病研究所北京新发突发传染病重点实验室

研究目的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是慢性肝病的主要病因之一,造成全世界大约170万人感染。HCV感染后50-85%患者快速进展为肝硬化甚至肝癌,最终需要肝移植治疗。α-干扰素(IFN-α)是目前慢性丙型肝炎抗病毒治疗标准方案的基...

研究目的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是慢性肝病的主要病因之一,造成全世界大约170万人感染。HCV感染后50-85%患者快速进展为肝硬化甚至肝癌,最终需要肝移植治疗。α-干扰素(IFN-α)是目前慢性丙型肝炎抗病毒治疗标准方案的基础,但只有约50-60%%的患者能够获得持续病毒学应答(SVR)而且治疗存在显著的副作用。因此,进一步深入研究HCV感染及其致病机制非常必要。材料和方法为了明确HCV感染的发病及致病机制,我们利用Illumina的深度测序技术,对JFH-

关键词：

来源： cnki会议评论

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19例SARS死亡病例免疫学特征分析

中国公共卫生 2004年第1期20卷 1-2页

作者：董庆鸣何忠平庄辉宋淑静张剑平刘顺爱姚均刘志英冯鑫戴旺苏北京地坛医院病毒研究中心 100011 北京大学医学部微生物系

目的　总结 19例严重急性呼吸综合征 (SARS)死亡病例的免疫学特点。方法　分析SARS死亡病例的一般临床特征 ,并用流式细胞仪检测T淋巴细胞及其亚群、NK和B细胞绝对计数 ,并与艾滋病 (AIDS)患者及正常对照组比较。结果　SARS死亡病例的... 详细信息

目的　总结 19例严重急性呼吸综合征 (SARS)死亡病例的免疫学特点。方法　分析SARS死亡病例的一般临床特征 ,并用流式细胞仪检测T淋巴细胞及其亚群、NK和B细胞绝对计数 ,并与艾滋病 (AIDS)患者及正常对照组比较。结果　SARS死亡病例的淋巴细胞总数、T、T4和T8淋巴细胞绝对数均显著低于AIDS组及正常对照组(P <0 0 0 1) ,4项指标最低值分别为 85个 /mm3 、3 8个 /mm3 、2 6个 /mm3 和 14个 /mm3 ;SARS组的T4/T8淋巴细胞比值高于AIDS组 (P <0 0 0 1) ,与正常对照组无显著性差异 (P =0 8663 ) ;NK和B淋巴细胞低于正常组 (P <0 0 0 1) ,最低值分别为 2个 /mm3 和 17个 /mm3 。结论　SARS患者的细胞和体液免疫功能明显低下。检测T淋巴细胞及其亚群、NK和B细胞绝对数有助于判断SARS患者的病情和预后。

关键词：严重急性呼吸综合征(SARS) 获得性免疫缺陷综合症(AIDS) 免疫淋巴细胞

HBVB／C混合基因型对慢性乙型肝炎干扰素α抗病毒疗效的影响

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中华实验和临床病毒学杂志 2013年第6期27卷 443-445页

作者：任玉莲李明慧刘顺爱张禄雪穆彩琴张璐路遥华文浩张书凤谢尧北京大学地坛医院教学医院 100015 首都医科大学附属北京地坛医院肝病中心内四科首都医科大学附属北京地坛医院肝病中心检验科首都医科大学传染病研究所

目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者B／C混合基因型乙型肝炎病毒（HBV）感染与干扰素α（IFN—α）治疗效果的相关性。方法经IFN—α治疗的HBeAg阳性B／C混合基因型CHB患者，采集治疗基线及治疗12周后血清，扩增HBV全基因组并进行克隆，... 详细信息

目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者B／C混合基因型乙型肝炎病毒（HBV）感染与干扰素α（IFN—α）治疗效果的相关性。方法经IFN—α治疗的HBeAg阳性B／C混合基因型CHB患者，采集治疗基线及治疗12周后血清，扩增HBV全基因组并进行克隆，每份标本17—20个克隆测序并进行序列分析及分子进化分析。结果2例HBeAg阳性B／C混合基因型感染CHB患者，优势病毒株均为C型毒株。经IFN-α治疗后，1例发生完全病毒学应答，1例发生部分病毒学应答并且治疗后B基因型病毒株完全清除。完全应答者与部分应答者治疗前C基因型准种复杂度为0．5562VS0．6305，部分病毒学应答者治疗后全基因组准种复杂度高于治疗前C基因型准种复杂度（0．6305VS0．7200），全基因组核苷酸水平的平均遗传距离高于治疗前（0．00454VS0．00648核苷酸替换／位点）。结论（1）B／C混合基因型感染CHB患者优势病毒株为C型毒株。（2）B基因型病毒株对干扰素的敏感性高于C基因型，B／C混合基因型感染患者治疗后病毒准种复杂度及准种多样性升高。

关键词：肝炎,乙型,慢性基因型干扰素α 遗传异质性

慢性乙型肝炎干扰素治疗前后树突状细胞的变化及其与疗效相关性研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2012年第2期26卷 120-122页

作者：张艳丽刘凤李明慧郝红晓邓敏成军刘顺爱谢尧首都医科大学附属北京地坛医院肝病中心北京100015 首都医科大学附属北京地坛医院传染病研究所北京100015

目的探讨慢乙肝干扰素α（IFNα）治疗前后髓样树突状细胞（mDC）和浆样树突状细胞（pDC）的变化及其与病毒学、生化学指标的关系。方法采集30例HBeAg阳性慢乙肝患者IFNα治疗前和治疗12周时的外周血，用流式细胞仪检测mDC和pDC的频数及... 详细信息

目的探讨慢乙肝干扰素α（IFNα）治疗前后髓样树突状细胞（mDC）和浆样树突状细胞（pDC）的变化及其与病毒学、生化学指标的关系。方法采集30例HBeAg阳性慢乙肝患者IFNα治疗前和治疗12周时的外周血，用流式细胞仪检测mDC和pDC的频数及CD86表达水平。根据IFNα治疗后生化学指标和病毒学指标变化，把患者分为ALT复常组、ALT未复常组及病毒学应答组、病毒学无应答组，分析IFNα治疗前后不同组DC变化。结果（1）IFNα治疗12周时ALT复常组pDC频率（0．25％±0．14％）较基线（0．18％±0．09％）升高（P=0．023），ALT未复常组mDC频率（0．58％±0．34％）及表面CD86阳性率（61．80％±22．52％）则较基线（分别为0．88％±0．51％，79．92％±25．94％）下降（P=0．025；P=0．036）。（2）IFNα治疗12周时病毒学应答组pDC表面CD86阳性率（46．86±12．22％）较基线（29．42±15．16％）升高（P=0．002），病毒学无应答组的mDC频率（0．51％±0．22％）及表面CD86阳性率（59．63％±22．94％）则较基线（分别为0．94％±0．58％，80．11％±29．34％）下降（P=0．006；P=0．049）。结论慢乙肝干扰素α治疗后，生化和病毒应答与pDC频率和功能增强相关，而mDC频率及功能的降低与IFN治疗后无生化和病毒应答相关。

关键词：肝炎,乙型树突细胞肝炎/治疗干扰素α

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新生儿脐血NK细胞亚群分布及功能研究

中华实验和临床病毒学杂志 2015年第2期29卷 148-150页

作者：陈晓雪李明慧刘梦张丹张璐路遥华文浩宋淑静谢尧刘顺爱成军首都医科大学附属北京地坛医院肝病中心北京100015 首都医科大学附属北京地坛医院检验科北京100015 首都医科大学附属北京地坛医院传染病研究所北京100015

目的探讨新生儿脐血中自然杀伤细胞（natural killer cell）亚群分布和功能.方法收集2013年8月至2013年12月在北京地坛医院妇产科分娩的HBV DNA阴性（＜500拷贝/ml）孕妇所生新生儿脐带血以及正常成人外周静脉血,采用流式细胞术测定... 详细信息

目的探讨新生儿脐血中自然杀伤细胞（natural killer cell）亚群分布和功能.方法收集2013年8月至2013年12月在北京地坛医院妇产科分娩的HBV DNA阴性（＜500拷贝/ml）孕妇所生新生儿脐带血以及正常成人外周静脉血,采用流式细胞术测定全血中NK细胞不同亚群频数及分布以及pDC频数和表面分子（CD80、CD83、CD86）的表达;采用Luminex技术检测两组血清中IFN-r、IFN-a、IL^-10、IL-6水平.结果新生儿CD16＋ CD56＋ NK细胞频数显著低于成人组（19.36±11.41,44.30±9.79,P=0.000）,其中CD16＋ CD56dim NK阳性率显著低于成人组（20.01 ±11.47,43.77±9.72,P=0.000）,但CD16-CD56bright NK在两组中差异无统计学意义;新生儿pDC频数及其表面CD80、CD83、CD86阳性率均显著低于成人组（P=0.000）;脐血中细胞因子IFN-r含量显著低于成人组（P=0.003）,但IFN-a、IL-6和IL-10在两组之间差异无统计学意义.结论新生儿NK细胞和pDC的频数低于成人.

关键词：杂仿细胞,天然树突状细胞细胞因子类婴儿新生肝炎病毒,乙型

Treg细胞在慢性HBV感染免疫耐受机制中的作用

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中华实验和临床病毒学杂志 2015年第3期29卷 196-198页

作者：刘梦李明慧陈晓雪张丹张璐路遥华文浩宋淑静谢尧刘顺爱成军北京大学地坛医院教学医院 100015 首都医科大学附属北京地坛医院肝病二科首都医科大学附属北京地坛医院检验科

目的探讨外周血浆细胞样树突状细胞（pDCs）和CD4＋ CD25＋调节性T细胞（Treg）在慢性HBV感染免疫耐受机制中的作用.方法采集慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染免疫耐受期患者和急乙肝恢复半年患者的静脉全血,采用流式细胞仪检测外周血pDC... 详细信息

目的探讨外周血浆细胞样树突状细胞（pDCs）和CD4＋ CD25＋调节性T细胞（Treg）在慢性HBV感染免疫耐受机制中的作用.方法采集慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染免疫耐受期患者和急乙肝恢复半年患者的静脉全血,采用流式细胞仪检测外周血pDCs频数及其表面共刺激分子CD80/CD83/CD86的表达以及CD4＋ CD25＋ Treg细胞的频数.采用Luminex检测血浆细胞因子IFN-α2/IFN-γ/TGF-α/FLT-3 L/IL-1 0/IL-6/IL-17A的含量.结果慢性HBV感染免疫耐受组外周血pDCs频数及CD80/CD83/CD86的表达较急乙肝恢复组,差异均无统计学意义,且血浆IFN-α2水平要显著高于急乙肝恢复组.慢性HBV感染免疫耐受组外周血Treg频数和细胞因子IL-10水平显著高于急乙肝恢复组.结论慢性HBV感染免疫耐受患者外周血pDCs频数和功能未见异常,而Treg频数和细胞因子IL-10水平显著高于正常人群。

关键词：肝炎,乙肝树突细胞 T淋巴细胞白细胞介素10 干扰素α

HCVcore/NS3/NS5A对内源性IFN-β表达影响及其调控机制初步研究

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中国肝脏病杂志（电子版） 2013年第1期5卷 1-5页

作者：董金玲高萍刘顺爱王琦张锦前成军北京大学北京地坛医院教学医院北京100015 首都医科大学附属北京地坛医院传染病研究所北京100015 新发突发传染病研究北京市重点实验室北京100015 首都医科大学附属北京地坛医院北京100015

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)core、NS3、NS5A对内源性IFN-β表达的影响及其调控机制。方法将HCVcore、NS3、NS5A表达载体pcDNA3.1/myc-His-core/NS3/NS5A转染至HepG2细胞,验证蛋白表达之后,采用实时荧光定量PCR和Westernblot及ELISA方法观察3种蛋白对IFN-βmRNA及蛋白水平表达的影响。构建IFN-β全长启动子报告基因表达载体,借助双萤虫素酶活性检测,探讨HCVcore、NS3、NS5A对IFN-β转录水平的调控机制。结果 pcDNA3.1/myc-His-core/NS3/NS5A在HepG2细胞中成功表达,与转染pcDNA3.1/myc-His空载体相比,pcDNA3.1/myc-His-NS3/NS5A过表达时,在mRNA及蛋白水平均能抑制HepG2细胞内IFN-β的表达,与转染空载体的对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。双萤虫素酶活性检测显示,转染IFN-β全长启动子报告基因表达质粒后,与对照组相比,双萤虫素酶活性降低,差异有统计学意义(P<0.05)。pcDNA3.1/myc-His-core过表达时对IFN-β的表达无明显影响。结论 HCVNS3/NS5A在mRNA及蛋白水平能抑制IFN-β表达,并通过其转录水平影响IFN-β表达,core对IFN-β的表达无明显影响。其具体调控机制有待进一步研究。

关键词：肝炎丙型核心蛋白病毒非结构蛋白质类干扰素β 基因表达调控