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miR-99a-3p对山羊乳腺上皮细胞凋亡的调控作用及分子机制研究

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miR-99a-3p对山羊乳腺上皮细胞凋亡的调控作用及分子机制研究

作者：刘闻一西北农林科技大学

学位级别：硕士

乳及乳制品是幼年动物和人类的重要营养来源。乳腺上皮细胞(mammary gland epithelial cells,MECs)是乳汁合成并分泌的场所,其数目和活性决定了泌乳量。细胞凋亡是影响MECs数目的重要因素之一。MECs凋亡在乳腺周期性发育过程中呈现周期... 详细信息

乳及乳制品是幼年动物和人类的重要营养来源。乳腺上皮细胞(mammary gland epithelial cells,MECs)是乳汁合成并分泌的场所,其数目和活性决定了泌乳量。细胞凋亡是影响MECs数目的重要因素之一。MECs凋亡在乳腺周期性发育过程中呈现周期性变化,旨在清除活性低和一部分不需要的细胞,以维持乳腺功能稳定。因此研究MECs凋亡机制对于维持乳腺组织稳态,促进乳腺发挥泌乳功能具有重要意义。miRNAs具有参与调控细胞凋亡的功能。有研究发现,miR-99a-3p在奶山羊干奶期乳腺组织退化过程中高表达,可能参与奶山羊干奶期乳腺组织退化。本课题组前期研究表明miR-99a-3p能够提高山羊乳腺上皮细胞(goat mammary gland epithelial cells,GMECs)内Ca水平,而一定浓度的Ca可诱导细胞凋亡发生。因此推测,miR-99a-3p可能对GMECs凋亡发生具有调控作用,但相关研究尚未见报道。本研究以GMECs为研究对象,首先探究了miR-99a-3p对GMECs凋亡的影响,然后通过生物信息学预测和分子细胞生物学试验验证了miR-99a-3p靶向GPR19调控山羊乳腺上皮细胞凋亡的分子机制。获得结果如下:(1)在GMECs中转染miR-99a-3p mimic和inhibitor后,q RT-PCR和Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞仪技术检测结果显示,过表达miR-99a-3p抑制GMECs凋亡(p一,并通过双荧光素酶活性检测试验证明miR-99a-3p与GPR19存在靶向关系。(3)过表达GPR19后,GMECs中促凋亡蛋白Bax和cleaved Caspase3表达上调(p<0.05),干扰表达GPR19后,则GMECs中促凋亡蛋白Bax和cleaved Caspase3表达下降(p<0.05);结果表明GPR19促进GMECs凋亡。(4)共转染miR-99a-3p inhibitor和Si-GPR19后,在GMECs中抑制GPR19表达挽救了转染miR-99a-3p inhibitor提高的Bax和cleaved Caspase3表达(p<0.05),结果表明miR-99a-3p通过GPR19调控GMECs凋亡。(5)使用U0126(MAPK/ERK1/2抑制剂)处理GMECs后,U0126缓解了过表达GPR19引起的Bax表达(p<0.05),结果表明GPR19通过MAPK/ERK1/2诱导GMECs凋亡。综上所述,本研究阐明miR-99a-3p能够靶向GPR19并通过MAPK/ERK1/2信号抑制GMECs凋亡的分子机制,为揭示GMECs凋亡的分子调控机制积累了资料。

关键词：乳腺上皮细胞凋亡 miR-99a-3p GPR19 MAPK/ERK1/2

正常猕猴玻璃体腔注射人源黑视蛋白腺相关病毒表达及安全性研究

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正常猕猴玻璃体腔注射人源黑视蛋白腺相关病毒表达及安全性研究

作者：刘闻一第三军医大学

学位级别：硕士

目的:首先通过人源黑视蛋白腺相关病毒(p AAV2/8-CMV-h Mel-p2A-YFP)转染离体培养的293T细胞、正常大鼠原代视网膜节细胞、正常大鼠视网膜,验证构建的病毒载体转染及表达性能。进一步通过对猕猴行两种术式(1.直接玻璃体腔注射;2.内界膜... 详细信息

目的:首先通过人源黑视蛋白腺相关病毒(p AAV2/8-CMV-h Mel-p2A-YFP)转染离体培养的293T细胞、正常大鼠原代视网膜节细胞、正常大鼠视网膜,验证构建的病毒载体转染及表达性能。进一步通过对猕猴行两种术式(1.直接玻璃体腔注射;2.内界膜剥除+玻璃体腔注射)病毒注射,观察该病毒在灵长类动物体内的转染及表达,并对比两种术式对病毒表达的影响;探索正常猕猴视网膜节细胞表达人源黑视蛋白的对光反应功能;观察手术方式及病毒在猕猴体内转染的安全性。为该光遗传治疗策略在治疗人视网膜变性疾病提供理论基础和实践指导。方法:1.将构建的共表达人源黑视蛋白及YFP荧光蛋白的腺相关病毒,通过体外转染离体细胞(293T细胞系,正常大鼠原代视网膜节细胞)及在体转染正常大鼠视网膜观察人源黑视蛋白及YFP的表达,验证该病毒的转染、表达能力。2.将3只正常猕猴的6眼分为两组,3只右眼为一组,行后段玻璃体切除+内界膜剥除+C3F8气体填充+玻璃体腔注射30μL构建的腺相关病毒(病毒滴度9.71×1012v.p/mL);3只左眼为一组,直接玻璃体腔注射30μL病毒,注射病毒3个月后腹腔注射戊巴比妥钠将猕猴安乐死,取下视网膜计数猕猴视网膜YFP阳性细胞,对比内界膜剥除对病毒转染效率的影响,并采用全细胞膜片钳技术记录YFP阳性细胞的对光反应功能。3.术前及术后1月、2月、3月对猕猴行眼底照相、自发荧光、OCT等眼部形态学检测;术前及术后3月对猕猴的FERG、FVEP指标进行检测,并行统计学分析,观察病毒的注射及手术的处理是否会引发严重的眼部并发症。4.术前及术后3个月对猕猴外周血中炎症因子、肝功能、肾功能等血液检验学指标进行检测,并行统计学分析,研究我们所使用的腺相关病毒是否会引起正常猕猴全身严重的免疫、炎症反应。5.术后3个月腹腔注射戊巴比妥钠将猕猴安乐死,对心脏、肝脏、肾脏等全身脏器行组织病理学观察,研究我们所使用的腺相关病毒是否会引起基因突变,导致肿瘤等疾病的发生。结果:1.构建的人源黑视蛋白腺相关病毒在体外细胞系(293T细胞系、原代神经元)及正常啮齿类动物(LE大鼠)视网膜均有较好的转染力,可共表达人源黑视蛋白及YFP荧光蛋白。2.构建的人源黑视蛋白腺相关病毒在正常猕猴视网膜有较好的转染力,YFP荧光蛋白主要表达于节细胞,视网膜铺片可见YFP阳性细胞的分布均为周边高,中央低,内界膜剥除眼和直接玻璃体腔注射眼之间未见统计学差异。3.全细胞膜片钳技术记录到470nm蓝光刺激时,猕猴视网膜YFP阳性神经节细胞能够对光反应,产生内向电流及动作电位。4.术前及术后1月、2月、3月眼底照相、眼底自发荧光、OCT等形态学检测结果表明:内界膜剥除眼术后可见内界膜剥除证据,未见手术并发症,眼部功能学检测(FERG,FVEP)术前及术后3个月比较无统计学差异。5.血液检验学指标结果表明:猕猴肝功能、肾功能、心肌酶谱、炎性因子等指标术前及术后3月对比未见统计学差异。6.全身各脏器石蜡切片HE染色未见明显病理学改变。结论:1.证实了构建的人源黑视蛋白腺相关病毒转染及表达能力正常,可共表达人源黑视蛋白及YFP荧光蛋白。2.证明了在正常猕猴非感光视网膜神经节细胞能够通过光遗传学技术表达人源黑视蛋白,获得对光反应功能。3.建立了猕猴后段玻璃体切除+内界膜剥除+C3F8气体填充+玻璃体腔注射病毒的手术方式,研究了正常猕猴玻璃体腔注射和内界膜剥除+玻璃体腔注射两种转染方式对转染率的影响,确定了直接玻璃体腔注射转染的优势。4.证明了通过光遗传学技术在灵长类动物视网膜表达人源黑视蛋白的安全性。

关键词：人源黑视蛋白腺相关病毒猕猴内界膜剥除后段玻璃体切割玻璃体腔注射

工具性与价值性:AIGC艺术双重面向的审美选择

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美术研究 2024年第2期 118-121页

作者：崔昊刘闻名吉林大学马克思主义学院 130015 沈阳建筑大学设计艺术学院 110168

数字时代,AIGC的诞生为艺术发展带来了新的机遇和挑战。AIGC本质上是基于海量数据、强大算法、高效生成的数字输出,赋予了艺术创作与传播前所未有的技术支持,但主体性的缺失决定了其依然是一种艺术工具。工具性对于价值性的冲击,导致了A... 详细信息

数字时代,AIGC的诞生为艺术发展带来了新的机遇和挑战。AIGC本质上是基于海量数据、强大算法、高效生成的数字输出,赋予了艺术创作与传播前所未有的技术支持,但主体性的缺失决定了其依然是一种艺术工具。工具性对于价值性的冲击,导致了AIGC艺术的审美异化倾向。在守正创新的基础上,复归AIGC艺术真善美的价值取向,实现工具性与价值性的有机统一,是消解审美异化的题中之义。以历史的、人民的、艺术的、美学的价值立场审视AIGC艺术,完善了艺术鉴赏的价值标准和评价体系,有助于创作思想性与艺术性相统一的优秀艺术作品,推动中国艺术的健康发展。

关键词： AIGC艺术工具性审美异化价值取向

JIP1基因敲除对青年小鼠视网膜形态和突触蛋白表达的影响

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第三军医大学学报 2019年第6期41卷 563-569页

作者：张洁琼刘闻一林森叶剑陆军军医大学(第三军医大学)大坪医院眼科重庆400042

目的探讨JIP1基因对青年小鼠视网膜结构和突触蛋白表达的影响。方法选择1月龄JIP1基因敲除(JIP1-KO)雄鼠和野生型C57雄鼠各12只,通过HE染色观察1月龄野生型C57小鼠和JIP1-KO小鼠视网膜厚度变化,采用Western blot和免疫组化方法检测野生... 详细信息

目的探讨JIP1基因对青年小鼠视网膜结构和突触蛋白表达的影响。方法选择1月龄JIP1基因敲除(JIP1-KO)雄鼠和野生型C57雄鼠各12只,通过HE染色观察1月龄野生型C57小鼠和JIP1-KO小鼠视网膜厚度变化,采用Western blot和免疫组化方法检测野生型C57小鼠和JIP1-KO小鼠视网膜神经节细胞标志物(neuronal classⅢβ-Tubulin,TUJ1)、神经丝蛋白(neurofilament, NF)和突触后密度蛋白95(postsynaptic density protein 95, PSD95)、突触素(synaptophysin, SYN)表达。结果 1月龄野生型C57小鼠视网膜全层、外核层(outer nuclear layer,ONL)、内核层(inner nuclear layer,INL)厚度分别为(119.60±11.70)、(41.17±3.59)、(21.90±2.27)μm,JIP1-KO小鼠视网膜全层、ONL层、INL层厚度分别为(110.70±7.21)、(36.83±2.26)、(20.15±1.89)μm,各对应层之间厚度比较均无统计学差异(P>0.05);与野生型C57小鼠相比,JIP1-KO小鼠视网膜中TUJ1、PSD95、SYN表达水平均无统计学差异(P>0.05),TUJ1定位于视网膜神经节细胞层,神经细胞突起NF、PSD95、SYN定位于外网层。结论 JIP1基因敲除对1月龄小鼠视网膜发育影响不显著。

关键词： JIP1 视网膜结构突触蛋白

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助力新质生产力发展——上海职业教育在行动

成才与就业 2024年第4期 4-9页

作者：刘闻亮不详

2024年全国两会期间,新质生产力成为备受关注的热词之一。作为对传统生产力概念的全面升级,新质生产力强调以创新为核心驱动力,更注重生产过程中的科技创新、产业优化和人才培养。在两会的民生主题记者会上,教育部部长怀进鹏表示,“发... 详细信息

2024年全国两会期间,新质生产力成为备受关注的热词之一。作为对传统生产力概念的全面升级,新质生产力强调以创新为核心驱动力,更注重生产过程中的科技创新、产业优化和人才培养。在两会的民生主题记者会上,教育部部长怀进鹏表示,“发展新质生产力,既需要牵引源头创新的基础学科、交叉学科和新兴学科的拔尖人才,也需要服务新型工业化道路的工程技术人才和大国工匠、能工巧匠”。作为培养技术技能人才的主阵地,职业教育在助力新质生产力发展中具有不可替代的重要作用。

关键词：技术技能人才大国工匠交叉学科工程技术人才拔尖人才源头创新新型工业化道路人才培养

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以赛助创绘出人生新景观

成才与就业 2024年第1期 90-93页

作者：刘闻亮不详

在第九届中国国际“互联网+”大学生创新创业大赛上,陈烈炜作为指导教师带领小伙伴参加的“砷锑纳净科技:高效吸附材料与环境保护融合”项目获得上海赛区职教赛道金奖。消息传来,上海城建职业学院又一次沸腾了!因为,这已不是陈烈炜第一... 详细信息

在第九届中国国际“互联网+”大学生创新创业大赛上,陈烈炜作为指导教师带领小伙伴参加的“砷锑纳净科技:高效吸附材料与环境保护融合”项目获得上海赛区职教赛道金奖。消息传来,上海城建职业学院又一次沸腾了!因为,这已不是陈烈炜第一次获得“互联网+”大学生创新创业大赛金奖了。从2019年的第五届大赛开始,陈烈炜连续5年参加5届大赛,身份也从参赛者变成了指导教师。作为一名“老选手”,在大赛的引领下。

关键词：上海赛区创新创业大赛指导教师互联网小伙伴大学生新景观材料与环境

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2024这些行业将迎利好

成才与就业 2024年第1期 30-33页

作者：刘闻亮(整理) 不详

近日发布的《中国宏观经济形势分析与预测年度报告(2023-2024)》预计,在基准情景下,2024年中国全年实际GDP增速将达4.82%。虽然2023年外部环境复杂严峻,国际政治经济博弈加剧,国内面临多风险因素冲击,但中国经济社会发展大局保持稳定,... 详细信息

近日发布的《中国宏观经济形势分析与预测年度报告(2023-2024)》预计,在基准情景下,2024年中国全年实际GDP增速将达4.82%。虽然2023年外部环境复杂严峻,国际政治经济博弈加剧,国内面临多风险因素冲击,但中国经济社会发展大局保持稳定,供给侧活力得到持续释放,需求侧开始稳步复苏。

关键词：供给侧利好年度报告中国经济社会发展经济形势分析与预测外部环境政治经济博弈持续释放

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在泥土中找到星辰大海

成才与就业 2024年第6期 44-47页

作者：刘闻亮不详

罗剑发出生于江西农村,他从小与泥土为伴,田间地头给他的童年留下不少难忘的回忆。“每到播种的季节,当洒下种子,也就洒下了希望,生活从此多了一份期盼。”罗剑发喜欢泥土蕴含的芳香与勃勃生机,因此在高中毕业时,选择了上海农林职业技... 详细信息

罗剑发出生于江西农村,他从小与泥土为伴,田间地头给他的童年留下不少难忘的回忆。“每到播种的季节,当洒下种子,也就洒下了希望,生活从此多了一份期盼。”罗剑发喜欢泥土蕴含的芳香与勃勃生机,因此在高中毕业时,选择了上海农林职业技术学院的园林技术专业。

关键词：江西农村园林技术专业罗剑泥土勃勃生机职业技术学院

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机器人评标:现状、困境及建议

中国招标 2024年第1期 78-79,82页

作者：刘闻博中国人民大学公共管理学院

在多数招投标从业者的印象里,项目评标往往是由评标委员会牵头完成的,评标专家的打分在这一过程中起到了决定性的作用。如果有一天,评标不再依赖人力,评标专家群体完全被人工智能取代会怎样?近年来,我国许多地方已经开始陆续出现了“评... 详细信息

在多数招投标从业者的印象里,项目评标往往是由评标委员会牵头完成的,评标专家的打分在这一过程中起到了决定性的作用。如果有一天,评标不再依赖人力,评标专家群体完全被人工智能取代会怎样?近年来,我国许多地方已经开始陆续出现了“评标机器人”。这些评标机器人距离真正的人工智能还有多远?“机器人评标”的基本原理是怎样的?

关键词：人工智能机器人评标专家评标委员会招投标项目评标基本原理从业者