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植物对昆虫病原真菌内生化的生物学响应与代谢组学分析

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植物对昆虫病原真菌内生化的生物学响应与代谢组学分析

作者：刘银梅安徽农业大学

学位级别：硕士

昆虫病原真菌（Entomopathogenic fungi,EPF）常用于天牛科（Cerambycidae）、叶蝉总科（Cicadellidea）、蚜总科（Aphidoidea）等园林植物病虫害的生物防治,而球孢白僵菌（Beauveria bassiana）和金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）是昆虫病原真菌中应用最为广泛的种类,在园林植物病虫害防治中具有重要的作用。除了作为生物防治因子外,昆虫病原真菌对植物促生作用的发现,为昆虫病原真菌与植物的生物学关系增添了新的研究内容。球孢白僵菌和金龟子绿僵菌对植物具有的显著促生作用已有报道,但关于昆虫病原真菌的内生化过程、促生机理与抗病性作用的研究还不够深入。本文以玉米作为模式植物,研究了在水培条件下接种球孢白僵菌Bb13和金龟子绿僵菌Ma73菌株,在土培条件下接种球孢白僵菌Bb202菌株后不同周期下玉米的生长指标变化,同时使用选择培养基组织培养回收法和SCAR分子标记法,对玉米根周、植物各组织内的球孢白僵菌和金龟子绿僵菌种群数量和空间分布进行了研究;另外结合前期研究中水培条件下接种球孢白僵菌Bb202后玉米生长指标显著变化,通过玉米代谢组学解析比较,探究球孢白僵菌与玉米互作途径与响应机理,为昆虫病原真菌作为园林植物病害杀虫剂和生长促进剂提供一定参考。本研究中水培与土培两种培养体系下的3种昆虫病原真菌接种菌株Bb13、Ma73和Bb202均对玉米生长有显著促进作用。水培体系下,第35 d时,白僵菌Bb13菌株处理组的玉米株高、根长、叶长、叶宽、地上鲜重、地下鲜重和总鲜重均显著高于对照组,增长率分别为17.87%、48.26%、20.37%、36.97%、85.54%、81.49%和84.87%;而绿僵菌Ma73菌株处理组株高、叶长、地上鲜重、地下鲜重和总鲜重显著高于对照组,增长率分别为11.76%、17.84%、57.74%、92.71%和63.45%。土培体系下,接种白僵菌Bb202菌株24 d时,处理组株高、根长、叶面积和地上鲜重显著高于对照组,增长率分别为21.19%、20%、33.98%和38.92%,其中根长指标促生最明显。病原接种实验显示,水培体系下,玉米根部接种Bb13和Ma73后可减慢玉米小斑病（Bipolaris maydis）的病斑生长速度;接种病原7 d后,绿僵菌处理组病斑面积要小于对照,而白僵菌处理组对病斑发展则呈现出显著抑制作用。昆虫病原真菌在环境中的种群动态监测结果显示,土壤环境下的种群数量比水培液中要稳定。在土壤与水培两种环境中,昆虫病原真菌在环境中的种群数量呈现出不同的下降趋势。水培体系下,在初始种群密度分别为球孢白僵菌5.92×10～3cells·m L,龟子绿僵菌8.56×10～3 cells·m L条件下,前者14 d时降至7.20 cells·m L,21 d时水培液中已经检测不到球孢白僵菌;而后者在21 d时降至17 cells·m L,28 d时降为0;而在土培体系下,在土壤中球孢白僵菌初始种群密度为2.17×10～7cells·g时,31d后的种群数量仍有1.64×10～6cells·g。昆虫病原真菌在玉米组织中的定殖与内生化研究表明,绿僵菌和白僵菌能在玉米组织中系统定殖并存在组织转移现象。水培和土培体系下,球孢白僵菌和金龟子绿僵菌均能在玉米内定殖,且内生化的球孢白僵菌和金龟子绿僵菌能在组织间转移,形成在根、茎、叶上的系统性定殖。在检测技术上,菌株的SCAR分子标记法比平板组织培养法更加灵敏;水培体系下的根系组织,用平板组织培养法仅在28 d时分离出球孢白僵菌,而用SCAR分子标记则在各时期均检测到球孢白僵菌,检出率为100%。因此真菌的SCAR分子标记技术更适用于内生化真菌的灵敏检测。代谢组学研究表明,在水培体系中接种球孢白僵菌后14 d时,玉米根系组织中一共筛选到181个差异代谢物（DAMs）,其中包括82个上调和99个下调;而根周一共筛选得到291个差异胞外代谢物,其中268个上调,23个下调。在土培体系中,10 d时根系组织中共筛选出236个DAMs（135个上调,101个下调）,17 d时筛选出111个DAMs（70个上调,41个下调）,24 d时筛选出41个DAMs（18个上调,23个下调）,DAMs表现出时序特征。DAMs种类鉴定均为苯丙素类和聚酮化合物、脂质和类脂分子、有机酸及其衍生物、有氧化合物、苯类、有机杂环化合物、生物碱和衍生物、核苷、核苷酸和类似物、木脂素、新木脂素及相关化合物以及有机含氮化合物。水培系统的根周胞外和根系组织DAMs的联合分析发现,接种球孢白僵菌上调了玉米根系胞内和胞外的苯丙烷、多酮类和苯类化合物;另外,脂质和类脂分子在根系中显著上调。KEGG富集分析显示对玉米根部的调控主要集

关键词：球孢白僵菌金龟子绿僵菌玉米代谢组学促生

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水力旋流器内分离介质流动分布特征数值模拟

石油学报 2006年第2期27卷 129-132,136页

作者：刘晓敏檀润华刘银梅赵立新河北工业大学创新设计研究所天津300130 大庆石油学院机械科学与工程学院黑龙江大庆163318

提出了脱油型水力旋流器参数关系的结构模型,依据建立和修正的分离场的k-ε湍流数学模型,进行了网格划分,确定出边界条件。描述了水力旋流器内部分离介质的三维流动分布特征对分离性能的影响。对旋流器压力场、速度场和分离介质运动迹... 详细信息

提出了脱油型水力旋流器参数关系的结构模型,依据建立和修正的分离场的k-ε湍流数学模型,进行了网格划分,确定出边界条件。描述了水力旋流器内部分离介质的三维流动分布特征对分离性能的影响。对旋流器压力场、速度场和分离介质运动迹线分布特征的数值模拟进行了研究。分析了旋流器内部分离介质流动分布特征的数值模拟结果,实际测试的分布结果与流动场结构中理论计算的分布结果相一致。通过合理控制旋流器操作参数(如流量、压力和分流比等)来实现最佳的分离效果。该研究将为改进水力旋流器结构设计、提高分离性能和降低能耗损失提供参考,也为其更好的推广应用奠定一定的基础。

关键词：水力旋流器分离介质流体流动分布特征湍流数学模型数值模拟

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骨髓间充质干细胞对移植免疫的影响

中国组织工程研究与临床康复 2010年第49期14卷 9264-9267页

作者：刘银梅张鹏厦门大学福建省厦门市361005

背景:近年来研究发现,骨髓间充质干细胞除具有支持体外造血、促进体内造血功能重建外,还具有较低的免疫原性和抑制异体T淋巴细胞增殖的作用,在调节移植免疫方面发挥重要作用,但其机制尚不十分明确。目的:就近年来关于骨髓间充质干细胞... 详细信息

背景:近年来研究发现,骨髓间充质干细胞除具有支持体外造血、促进体内造血功能重建外,还具有较低的免疫原性和抑制异体T淋巴细胞增殖的作用,在调节移植免疫方面发挥重要作用,但其机制尚不十分明确。目的:就近年来关于骨髓间充质干细胞的免疫调节特性及其在造血干细胞移植中的作用简要综述。方法:由第一作者检索2000/2008PubMed数据库(http://***/PubMed)有关骨髓间充质干细胞对移植免疫影响的文章,检索词为"BMSCs,hematopoietic stem cell transplantation,transplantantion immunity",排除重复性研究。共保留37篇文献归纳总结。结果与结论:骨髓间充质干细胞是存在于骨髓中除了造血干细胞外的另一种干细胞,在免疫反应中可以逃避免疫识别、抑制免疫反应。骨髓间充质干细胞的免疫抑制作用能有效地运用于造血干细胞移植,降低移植物抗宿主病、促进移植物存活等,有广阔的应用前景。但目前为止尚未能建立鉴定骨髓间充质干细胞的统一标准,至今还未能筛选到骨髓间充质干细胞特异性的标记分子;缺乏安全性评价;影响移植物抗宿主病同时是否影响移植物抗白血病效应;以及对肿瘤细胞生长的影响等问题都有待于进一步的研究才能解决。

关键词：移植免疫骨髓间充质干细胞造血干细胞移植免疫抑制细胞鉴定

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钢渣在建材行业中应用的定位分析

混凝土与水泥制品 2011年第11期 68-70页

作者：张宇郝以党柯国炬刘银梅赵蕊中国京冶工程技术有限公司北京100088

概述了钢渣的处理技术,分析了钢渣的基本特性,提出了钢渣在建材行业实现高附加值利用的方法。

关键词：钢渣热闷胶凝性安定性钢铁渣粉

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外来医疗器械清洗质量效果监测评价

中国消毒学杂志 2015年第5期32卷 499-500页

作者：杨惠英余红刘银梅上海市第十人民医院上海200072

目的评价外来器械清洗质量,以便加强质量管理。方法采用隐血试验和蛋白清洗棒检测方法,对某医院租赁的外来器械清洗质量作出评价。结果本次共检测外来手术器械120件,检出残留蛋白污染率为42.50%,隐血试验阳性率为47.50%,ATP荧光法检测RL... 详细信息

目的评价外来器械清洗质量,以便加强质量管理。方法采用隐血试验和蛋白清洗棒检测方法,对某医院租赁的外来器械清洗质量作出评价。结果本次共检测外来手术器械120件,检出残留蛋白污染率为42.50%,隐血试验阳性率为47.50%,ATP荧光法检测RLU超标率为62.50%。共检测该医院消毒供应室处理的手术器械105件,残留蛋白污染率14.29%,隐血试验未检出阳性,ATP荧光法检测全部合格。结论外来手术器械清洗质量差,必须加强外来器械的监督监测与管理,杜绝引入不合格手术器械。

关键词：外来器械清洗质量监督监测管理

2010-2012年围术期抗菌药物预防性应用调查分析

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中华医院感染学杂志 2013年第7期23卷 1670-1672页

作者：余红刘银梅杨惠英王雅梅上海市第十人民医院院感疾控处上海200072

目的了解医院围术期抗菌药物预防应用,促进规范管理抗菌药物的预防应用。方法 2010-2012年每年4、10月对所有出院的手术病例(排除感染病例)进行围术期抗菌药物预防应用回顾性调查,对2010-2012年抗菌药物使用率、使用天数、联合用药进行... 详细信息

目的了解医院围术期抗菌药物预防应用,促进规范管理抗菌药物的预防应用。方法 2010-2012年每年4、10月对所有出院的手术病例(排除感染病例)进行围术期抗菌药物预防应用回顾性调查,对2010-2012年抗菌药物使用率、使用天数、联合用药进行分析。结果 2010-2012年抗菌药物术前30min～2h内使用率分别为96.04%、96.29%和95.15%;围术期未用抗菌药物比例呈上升趋势,分别占25.47%、35.19%、41.49%,其中Ⅰ类切口分别占40.59%、52.99%、60.15%;用药在1d内比例有逐年升高趋势(P3d比例呈降低趋势(P<0.05);一联用药比例分别占65.13%、64.88%、70.69%,有增加趋势(P<0.05),二联用药分别占33.98%、33.73%、28.10%,有降低趋势(P<0.05)。结论医院抗菌药物预防应用越趋规范,但使用率和使用天数仍需进一步加大管理力度,需要多部门参与,共同提高抗菌药物的合理应用。

关键词：围术期抗菌药物预防性应用

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2009-2013年医院感染流行病学分析

中华医院感染学杂志 2014年第10期24卷 2444-2446页

作者：余红杨惠英刘银梅上海市第十人民医院医院感染与疾病控制处上海200072

目的了解医院感染演变的趋势和分布规律,为医院感染管理政策、目标的制定提供参考依据。方法对2009-2013年所有出院病历进行回顾性调查,用SAS 9.13软件对医院感染发病的科室、部位及病原菌分布进行分析。结果 2009-2013年共出院患者306 ... 详细信息

目的了解医院感染演变的趋势和分布规律,为医院感染管理政策、目标的制定提供参考依据。方法对2009-2013年所有出院病历进行回顾性调查,用SAS 9.13软件对医院感染发病的科室、部位及病原菌分布进行分析。结果 2009-2013年共出院患者306 088例,医院感染3 958例、4 442例次,感染率1.29%、例次感染率1.45%;病死率12.15%,发病密度1.57‰;医院感染发病率、病死率呈逐年下降趋势(P<0.05);感染最高的科室是ICU占14.14%,病死率亦最高,为57.76%;医院感染的常见部位以下呼吸道、泌尿道和手术部位为主,分别占35.70%、23.77%、13.69%;上呼吸道感染构成比逐年下降(P<0.01),手术部位感染构成比逐年上升(P<0.05);医院感染最常见的病原菌为大肠埃希菌,占14.93%,其次是金黄色葡萄球菌、真菌、克雷伯菌属,分别占14.55%、13.79%、13.72%。结论医院感染发病率和病死率虽逐年下降,但手术部位感染成为突出问题,应作为今后感染控制的重点。

关键词：医院感染流行病学调查分析

硫酸铟对V79细胞DNA损伤作用的彗星实验

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工业卫生与职业病 2011年第3期37卷 149-152页

作者：赵静珺肖卫刘银梅王源源苏州大学江苏苏州215123

目的观察硫酸铟对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79)的DNA损伤作用。方法以体外培养的V79细胞为研究对象,四氮唑蓝比色分析法(MTT法)观察不同染毒浓度(0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/L硫酸铟)和不同染毒时间(2、6、12、24 h)的细胞毒性;应用彗... 详细信息

目的观察硫酸铟对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79)的DNA损伤作用。方法以体外培养的V79细胞为研究对象,四氮唑蓝比色分析法(MTT法)观察不同染毒浓度(0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/L硫酸铟)和不同染毒时间(2、6、12、24 h)的细胞毒性;应用彗星实验(单细胞凝胶电泳技术)检测经不同浓度的硫酸铟染毒不同时间后对V79细胞DNA的损伤作用。结果当硫酸铟浓度≥0.5 mmol/L时,各染毒组细胞存活率与对照组比较降低,差异有统计学意义(P<0.05)。各染毒组拖尾率与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),且随着硫酸铟浓度的增加,呈上升趋势;Tail DNA%,尾长,Olive尾矩随染毒剂量增大而增加,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论硫酸铟可以引起V79细胞急性毒性,细胞存活率呈浓度-时间依赖性下降。硫酸铟对V79细胞的DNA有损伤作用,且有明显的剂量-效应关系。

关键词：硫酸铟 MTT实验彗星实验(单细胞凝胶电泳) DNA损伤 V79细胞

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新生儿颅内出血的观察及护理

中国保健营养（下半月） 2010年第11期 165-166页

作者：刘银梅内蒙古鄂尔多斯市中心医院儿科 017000

新生儿颅内出血多是由于分娩时胎儿缺氧或产伤引起，是新生儿病死率和致残率较高的病因之一，多见于早产儿或巨大儿。

关键词：新生儿颅内出血护理胎儿缺氧致残率病死率巨大儿早产儿