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两种细胞洗涤剂制备脱细胞同种生物带瓣管道支架的研究

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中国修复重建外科杂志 2005年第4期19卷 310-313页

作者：冯滨刘迎龙谢宁徐新林阮英卯宋来凤中国医学科学院中国协和医科大学阜外心血管病医院外科中国医学科学院中国协和医科大学阜外心血管病医院病理科北京100037

目的　比较去氧胆酸钠(deoxycholic acid,DOA)和十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulphate,SDS)两种细胞洗涤剂制备脱细胞的同种生物带瓣管道(homograft bioprosthetic tube valved,HBTV)支架的效果,为体外构建组织工程瓣(tissue- engineering heart valve,TEHV)提供同种生物瓣支架材料。　方法　对同种带瓣主动脉管道和带瓣肺动脉管道,分别用含0 .5 % DOA或0 .0 3% SDS的Tris低渗缓冲液共同孵育4 8h,脱去经液氮保存、具有活性的HBTV表面的内皮细胞,固定剂固定后分别进行HE、胶原纤维和弹力纤维染色的光镜观察,以及扫描电镜观察,摄片。　结果　两种洗涤剂均完全地脱去了HBTV表面的内皮细胞,中心部位的成纤维细胞有部分存留;细胞外基质,如胶原纤维和弹力纤维等均较完整地保留下来,其形态结构与脱细胞前无明显改变。　结论　0 .0 3%～0 .1% SDS或0 .5 % DOA的低渗缓冲液对制备HBTV脱内皮细胞支架效果均较佳,有利于HBTV再内皮化时种植细胞的黏附和扩增,可进一步应用于体外构建TEHV的研究。对于脱主动脉壁的细胞,SDS浓度应增至0 .1%为佳。

关键词：细胞洗涤剂带瓣管道脱细胞制备同种带瓣主动脉管道十二烷基硫酸钠弹力纤维染色扫描电镜观察体外构建内皮细胞胶原纤维去氧胆酸钠组织工程瓣 heart valve 同种生物瓣成纤维细胞细胞外基质 acid tube 支架材料

三碘甲腺原氨酸对离体大鼠缺血后心肌左心功能的恢复作用

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中国循环杂志 2000年第6期15卷 367-369页

作者：王旭刘迎龙陈霞张家俊萧明第中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院心外科北京市100037 上海第一人民医院

目的 :观察三碘甲腺原氨酸 (T3)对缺血后心肌左心功能的恢复作用。　　方法 :制作离体大鼠心脏常温缺血模型 ,应用 KH液灌流 30分待心脏活动稳定后 ,分为未缺血组 (n=6 ) ,未缺血 +T3组 (n=6 ) ,缺血再灌注组 (n=7) ,缺血再灌注 + T3组 ... 详细信息

目的 :观察三碘甲腺原氨酸 (T3)对缺血后心肌左心功能的恢复作用。　　方法 :制作离体大鼠心脏常温缺血模型 ,应用 KH液灌流 30分待心脏活动稳定后 ,分为未缺血组 (n=6 ) ,未缺血 +T3组 (n=6 ) ,缺血再灌注组 (n=7) ,缺血再灌注 + T3组 (n=7)。比较缺血再灌注组与缺血再灌注 + T3组心功能指标。　　结果 :对缺血心肌加入 T3灌流 30分后 ,左心室压差与心率乘积 [(L VSP- L VDP)× HR]、收缩期左心室内压上升速度峰值 (+ dp/ dtmax)和舒张期左心室内压下降速度峰值 (- dp/ dtmax)恢复百分率均明显改善。　　结论

关键词：三碘甲腺原氨酸缺血后心肌左心功能心肌缺血

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同卵双胎心脏畸形差异表达基因的分析

中华心血管病杂志 2004年第9期32卷 826-828页

作者：吕小东刘迎龙赵勇刘宗正中国医学科学院心血管病研究所中国协和医科大学阜外心血管病医院先心病研究室北京100037 Cardiac GeneUnit Department of Laboratory Medicineand PathobiologyUniversity of Toronto Canada

目的　寻找单卵双胎其一患房间隔缺损、肺动脉瓣狭窄 ,另一为正常儿童之间的差异表达基因。方法　依据该单卵双胎儿童的白细胞RNA合成cDNA探针 ,差示筛选 8～ 1 0周龄胎儿心脏cDNA文库 ,测定各组克隆的序列 ,结果与GenBank/EMBL/DDBJ核... 详细信息

目的　寻找单卵双胎其一患房间隔缺损、肺动脉瓣狭窄 ,另一为正常儿童之间的差异表达基因。方法　依据该单卵双胎儿童的白细胞RNA合成cDNA探针 ,差示筛选 8～ 1 0周龄胎儿心脏cDNA文库 ,测定各组克隆的序列 ,结果与GenBank/EMBL/DDBJ核酸数据库进行同源性比较 ,所获ESTs进行功能分类 ,并比较患儿与正常儿童表达基因谱的差异。结果　获得在正常儿童表达高于患病儿童 ,或正常儿童表达而患病儿童不表达的已知基因有 34个 ,新ESTs有 5个 ;患病儿童表达高于正常儿童 ,或患病儿童表达而正常儿童不表达的基因有 4 1个 ,新ESTs有 7个。结论　一患先天性心脏病另一正常之单卵双胎儿童进行差示筛选 ,是寻找先天性心脏病相关基因和与心脏发育相关基因的有效方法。本研究发现了一些与先天性房间隔缺损、肺动脉瓣狭窄发生相关的ESTs。

关键词：正常儿童病儿单卵双胎差异表达基因 EST 胎心心脏畸形核酸 cDNA文库克隆

低温保护液肺动脉灌注对合并重度肺高压病儿术后肺组织eNOS和iNOS表达的影响

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中华胸心血管外科杂志 2003年第5期19卷 284-286页

作者：王强刘迎龙范祥明于坤阮英卯中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院外科北京100037 中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院体外循环科北京100037 中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院病理科北京100037

目的　利用免疫组织化学技术研究低温肺保护液对体外循环 (CPB)后内皮源型一氧化氮合酶 (eNOS)和诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)在肺血管内皮细胞、支气管上皮和肺泡巨噬细胞表达的影响。方法　 34例合并重度肺高压的先天性心脏病病儿在常... 详细信息

目的　利用免疫组织化学技术研究低温肺保护液对体外循环 (CPB)后内皮源型一氧化氮合酶 (eNOS)和诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)在肺血管内皮细胞、支气管上皮和肺泡巨噬细胞表达的影响。方法　 34例合并重度肺高压的先天性心脏病病儿在常规低温体外循环下行心内畸形矫治术。分为对照组(2 3例 )和保护组 (11例 ) ,保护组在主动脉阻断后肺动脉内灌注低温肺保护液。两组体外循环后取右下肺组织利用免疫组织化学技术观察肺血管内皮eNOS、支气管上皮iNOS和肺泡巨噬细胞iNOS的表达情况。结果　术后肺血管内皮细胞eNOS表达 ,保护组为 2 2 4± 0 6 0 ,对照组为 0 92± 0 70 (P <0 0 1) ;支气管上皮iNOS表达 ,保护组为 0 88± 0 6 0 ,对照组 2 0 8± 0 6 4 (P <0 0 1) ;肺泡巨噬细胞iNOS表达 ,保护组 10 6± 40 ,对照组 2 80± 75 0 (P <0 0 1)。结论　低温保护液肺动脉灌注可以保持eNOS在肺血管内皮细胞的表达 ,防止肺泡巨噬细胞和气管上皮细胞iNOS的过度表达 ,减轻肺内炎症反应 ,从而减轻CPB后肺高压病儿的肺损伤。

关键词：低温保护液肺动脉灌注术后肺组织 eNOS iNOS 表达肺性高血压心肺转流术

低温肺保护液改善体外循环对肺内中性白细胞凋亡的抑制作用

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中华心血管病杂志 2003年第9期31卷 670-672页

作者：王强刘迎龙龙村李桂芬李莉中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院外科北京100037 中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院体外循环科北京100037 中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院病理科北京100037

目的　体外循环通过抑制体内中性白细胞凋亡 ,延长炎症反应时间。通过观察保护液低温肺灌注对合并重度肺高压患儿体外循环后肺内中性白细胞凋亡的诱导 ,评价低温肺保护液促进术后炎症的消散作用。方法　 34例重度肺动脉高压先心病患儿... 详细信息

目的　体外循环通过抑制体内中性白细胞凋亡 ,延长炎症反应时间。通过观察保护液低温肺灌注对合并重度肺高压患儿体外循环后肺内中性白细胞凋亡的诱导 ,评价低温肺保护液促进术后炎症的消散作用。方法　 34例重度肺动脉高压先心病患儿分为对照组 ( 2 3例 )和肺保护组 ( 11例 )。对照组行常规手术矫治心内畸形 ,保护组于心脏阻断后向肺动脉灌注低温肺保护液 ,此后亦行常规手术完成心内畸形的矫治。手术后留右下肺组织行原位末端标记技术检测肺内中性白细胞凋亡情况。结果　对照组肺内中性白细胞凋亡率为 13 8% ;保护组凋亡率达 5 3 4 %。结论　低温保护液可以改善体外循环对肺内中性白细胞凋亡的抑制作用 ,促进炎症消散。

关键词：低温肺保护液体外循环中性白细胞细胞凋亡抑制作用

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成体干细胞与细胞心肌成形术

中华胸心血管外科杂志 2007年第6期23卷 430-432页

作者：武开宏刘迎龙韩忠朝中国医学科学院心血管病研究所阜外心血管病医院小儿外科中心 100037 中国医学科学院实验血液学国家重点实验室国家干细胞研究中心

目前在心脏外科领域，虽然冠心病的治疗取得很大进展，但由于心肌梗死后无法再生或再生能力有限，心肌梗死及其导致的心力衰竭等心血管疾病仍是危害人类健康的头号疾病。对终末期心力衰竭者，心脏移植可能是唯一的治疗手段，但是，由于... 详细信息

目前在心脏外科领域，虽然冠心病的治疗取得很大进展，但由于心肌梗死后无法再生或再生能力有限，心肌梗死及其导致的心力衰竭等心血管疾病仍是危害人类健康的头号疾病。对终末期心力衰竭者，心脏移植可能是唯一的治疗手段，但是，由于供体缺乏大大限制了其的临床应用，且大量免疫抑制剂的应用还可能降低病人生活质量。细胞治疗，又称细胞心肌成形术，即将细胞移植至心肌梗死区，

关键词：细胞心肌成形术成体干细胞终末期心力衰竭心血管疾病细胞治疗再生能力心肌梗死心脏移植

冷血停搏液对法洛四联症婴幼儿心肌代谢的影响

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中华胸心血管外科杂志 2002年第2期18卷 96-98页

作者：于坤刘迎龙龙村李桂芬吕峰中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院体外循环科北京100037 中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院心外科北京100037

目的　通过临床应用 ,评价冷血停搏液对未成熟心肌代谢的影响。方法　 5 0例行择期法洛四联症根治术病儿随机分为 2组 :对照组用 10℃改良*** 1停搏液 (CCP) ,试验组用冷血停搏液(BCP)。阻断升主动脉前、开放升主动脉 1、3、10min分别... 详细信息

目的　通过临床应用 ,评价冷血停搏液对未成熟心肌代谢的影响。方法　 5 0例行择期法洛四联症根治术病儿随机分为 2组 :对照组用 10℃改良*** 1停搏液 (CCP) ,试验组用冷血停搏液(BCP)。阻断升主动脉前、开放升主动脉 1、3、10min分别由冠状静脉窦和动脉同时取血测定血气、电解质、乳酸、丙二醛 (MDA)等含量。结果　再灌注后BCP组心肌氧摄取率、乳酸摄取率恢复较快 (P <0 0 5 ) ;再灌注各时点两组均出现钾离子释放和MDA升高 ;再灌注后BCP组钙离子摄取较低 (P <0 0 5 )。结论　冷血停搏液对再灌注后的离子平衡、氧代谢、糖代谢恢复优于冷晶体停搏液。

关键词：冷血停搏液法洛四联症婴幼儿心肌代谢

肺动脉灌注低温肺保护液抑制肺内实质细胞凋亡的研究

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中华外科杂志 2004年第4期42卷 227-229页

作者：魏波刘迎龙于存涛常勇男李春华中国医学科学院中国协和医科大学阜外心血管病医院先天性心脏病中心北京100037

目的　探讨体外循环中肺动脉灌注低温保护液对肺内实质细胞凋亡的影响。方法　将4 0例行法洛四联症根治术的患儿分为肺保护组和对照组 (各 2 0例 )。肺保护组体外循环期间肺动脉灌注低温肺保护液 ,对照组行常规法洛四联症根治术。 2 0... 详细信息

目的　探讨体外循环中肺动脉灌注低温保护液对肺内实质细胞凋亡的影响。方法　将4 0例行法洛四联症根治术的患儿分为肺保护组和对照组 (各 2 0例 )。肺保护组体外循环期间肺动脉灌注低温肺保护液 ,对照组行常规法洛四联症根治术。 2 0例患儿 (两组各 10例 )术后取右下肺组织活检标本 ,原位末端标记免疫组化染色法检测肺内实质细胞凋亡情况。同时监测围手术期肺功能及临床指标。结果　肺保护组肺内实质细胞凋亡率为 (10± 2 ) % ,而对照组肺内实质细胞凋亡率为 (18± 7) % ,两者比较 ,差异有显著性 (t=- 2 95 ,P <0 0 5 )。肺保护组术后氧指数较对照组高 ,回ICU病房后 0、6和 12h均有显著差异 [分别为 (4 92± 172 )、(4 4 4± 10 4 )、(4 89± 5 8)mmHg和 (36 9± 12 6 )、(347± 10 7)、(340± 119)mmHg ,t =2 5 9,P <0 0 5 ;t=2 88,P <0 0 1;t =5 0 6 ,P <0 0 1];肺保护组呼吸机辅助通气时间短于对照组 [(15± 11)h和 (2 6± 15 )h ,t=- 2 76 ,P <0 0 1]。结论　肺动脉灌注低温保护液可抑制肺组织内实质细胞凋亡。

关键词：肺动脉灌注低温肺保护液细胞凋亡体外循环脱噬作用

Tie-2单克隆抗体鉴定人骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化的内皮细胞

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中国应用生理学杂志 2005年第3期21卷 340-343,i0007页

作者：冯滨刘迎龙冯凯龚茹陈虎南充中心医院心脏外科四川南充637000 中国医学科学院中国协和医科大学阜外心血管病医院北京100037 军事医学科学院全军造血干细胞移植中心北京100850 第三军医大学成都军医学院四川成都610083

目的:体外扩增和定向诱导成人骨髓间充质干细胞(MSCs)向内皮细胞分化,并探讨其可行性和条件.方法:利用Percoll(1 073 g/L)从正常成人骨髓中分离MSCs,用含10%FBS的LG-DMEM培养基进行纯化和扩增培养,流式细胞仪分析鉴定MSCs的纯度.用含VEG... 详细信息

目的:体外扩增和定向诱导成人骨髓间充质干细胞(MSCs)向内皮细胞分化,并探讨其可行性和条件.方法:利用Percoll(1 073 g/L)从正常成人骨髓中分离MSCs,用含10%FBS的LG-DMEM培养基进行纯化和扩增培养,流式细胞仪分析鉴定MSCs的纯度.用含VEGF(10μg/L)的HGDMEM培养基诱导MSCs向内皮细胞定向分化,Tie-2单克隆抗体的免疫组化法和透射电镜(TEM)鉴定其细胞的性质.结果:5.0×105个MSCs在体外扩增15代后,获得了8.0×1012个MSCs,扩增了约1.6×107倍.加入诱导培养体系培养14～21 d,光镜下可观察到内皮细胞呈典型的'鹅卵石'样:90%的细胞Tie-2免疫组化呈阳性反应;TEM下可观察到胞浆内有Weible-palade小体.结论:成人骨髓MSCs在体外具有定向诱导分化为内皮细胞的潜能,为构建心脏组织工程瓣种子细胞的来源提供了可能性.

关键词：骨髓间充质干细胞内皮细胞 Tie-2