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谷氨酸棒杆菌中蛋氨酸生物合成途径过表达及其竞争支路关键酶钝化

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谷氨酸棒杆菌中蛋氨酸生物合成途径过表达及其竞争支路关键酶钝化

作者：刘诗梦吉林农业大学

学位级别：硕士

蛋氨酸具有的多种生理功能,在食品、医药及饲料行业中具有较高商业价值。因其代谢调控复杂,一直不能发酵法生产,致使氨基酸生产企业和科研人员不断投入精力进行蛋氨酸菌种选育。菌种选育的研究思路基本包含两方面:一方面调控酶的基因表... 详细信息

蛋氨酸具有的多种生理功能,在食品、医药及饲料行业中具有较高商业价值。因其代谢调控复杂,一直不能发酵法生产,致使氨基酸生产企业和科研人员不断投入精力进行蛋氨酸菌种选育。菌种选育的研究思路基本包含两方面:一方面调控酶的基因表达量,通过启动子工程、动态调控等方法提高或降低基因表达量;另一方面改造酶的催化性质,由于蛋氨酸生物合成途径中多个关键酶受到严格的反馈调控,对酶的改造同样十分重要。本实验以谷氨酸棒杆菌为出发菌种,首先过表达天冬氨酸激酶（Aspartate kinase,AK）和高丝氨酸O-乙酰基转移酶（Homoserine acyltransferase,HAT）提高蛋氨酸合成的碳流量。其中AK是源于北京棒杆菌的单体酶,经本实验室改造解除赖氨酸和苏氨酸的协同反馈抑制,酶活为野生型的20-50倍。构建的工程菌经氨基酸产量测定,确定了赖氨酸是主要副产物。为了降低赖氨酸合成途径的碳通量,同时避免敲除该途径导致菌体死亡,选择对赖氨酸合成有重要影响的二氨基庚二酸脱氢酶（Diaminopimelate dehydrogenase,Dap DH）进行体外突变降低酶活,得到的数据为未来弱化赖氨酸途径奠定基础。研究结果如下:1.构建4株过表达AK和HAT的工程菌,提高了蛋氨酸的积累量。以野生型谷氨酸棒杆菌ATCC13032为出发菌种,分别过表达3个不同酶活AK突变体和AK-HAT共表达突变体,构建出4株重组菌,分别是Cg AK/p EC-NC、Cg AK/p EC-S59F、Cg AK/p EC-T65I和Cg AKM/p EC-T65I-met X并进行发酵测试。从转录结果上看,4株菌中AK和HAT的基因转录水平增大,证明成功电转后基因得到表达。从发酵产物上看,4株菌的蛋氨酸产量分别为2.84 g/L、2.92 g/L、3.04 g/L和3.29 g/L,是原菌的1.55倍、1.59倍1.66倍和1.79倍。发现过表达HAT后可以明显降低苏氨酸产量,但不是降低赖氨酸途径碳流的主要原因,为了更好地降低支路碳流,进一步研究赖氨酸合成途径的关键酶。2.构建了Dap DH野生型表达质粒,通过随机突变PCR和高通量筛选获得13个突变体,分别为D120N、D120R、D120T、G151Q、T169H、T169K、R195G、R195H、H244W、H244M、H244S、N270T和N270S。诱导表达和纯化WT Dap DH和突变体,经SDS-PAGE和Western blot验证Dap DH已在大肠杆菌中高效表达。3.对WT Dap DH和突变体进行酶动力学测定,13个突变体中6株突变体酶活增大,7株突变体酶活降低。D120位点、T169位点和R195位点的突变体酶活均低于Cg Dap DH,G151、H244和N270位点的突变体酶活均比Cg Dap DH增高。其中酶活显著降低的是T169H,是WT Dap DH的11%,Km值为29.91,与底物结合能力变差。此外,D120位点突变株酶活均有所下降,D120N下降最明显,是WT Dap DH的18%。酶活力可能受到关键残基侧链性质和与底物结合能力的影响。4.对WT Dap DH和突变体T169H、D120N进行分子动力学模拟,分析酶活降低原因,为日后的改造提供基础。结果表明T169H位点突变破坏了底物结合口袋的氢键网络,使底物不能稳定与酶结合,且突变后导致底物结合口袋结构的改变疏水微环境被破坏,在两方面共同作用下酶活降低。D120位于底物结合口袋入口,突变前通过侧链与附近螺旋上的残基形成氢键,稳定蛋白构象,同时在蛋白表面形成狭窄空腔,有利于底物以特定形态进入结合口袋。突变后120位点的氢键断裂,增大了底物口袋内溶剂可及面积,破坏疏水环境使酶与底物间相互作用力减少,由此降低酶活。

关键词：蛋氨酸天冬氨酸激酶二氨基庚二酸脱氢酶酶学性质分子动力学模拟

思想政治课教学语言运用存在问题及解决策略研究

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思想政治课教学语言运用存在问题及解决策略研究

作者：刘诗梦河北师范大学

学位级别：硕士

一堂成功的思想政治课,需要的不仅是教师过人的知识功底,还需要各种高超的教学技能,而教学语言的运用能力则是其中的重中之重。随着时代的发展,教学语言越来越被教育工作者重视,其直接影响到教学效果以及学生的语言组织表达能力。思想... 详细信息

一堂成功的思想政治课,需要的不仅是教师过人的知识功底,还需要各种高超的教学技能,而教学语言的运用能力则是其中的重中之重。随着时代的发展,教学语言越来越被教育工作者重视,其直接影响到教学效果以及学生的语言组织表达能力。思想政治课承担着德育的重要责任,作为对学生进行品德教育的前驱者,教师更应加强自身的教学技能尤其是语言运用能力。综上,深入探讨分析本学科的教学语言运用问题及相应的解决策略,意义非凡。本文从笔者自身教育实习所收获高中思想政治课的教学实践的感受与经历以及相关优秀教师的教学实例出发,在已有的国内外相关研究成果的基础上,结合教学语言的基础知识和观点,分析教学语言的运用的重要性。理论联系实际,对在实践运用中出现的问题和原因进行由浅到深的层层剖析,并给出恰当合理的解决策略。全文除引文和结语外共分为三部分:第一部分是思想政治课教学语言及相关理论。首先,对语言、教学语言和思想政治课教学语言的概念理论做出阐述和总结。其次,根据思想政治课性质和特点得出本学科教学语言的性质特点。最后,从性质和特点的角度分析了运用思想政治教学语言的必要性。第二部分为思想政治学科教学语言运用现状及出现的问题。现状分为积极方面和不足方面。部分教师在教学语言体现学科特点上、运用语言规范程度上、教师教学素养上以及教学语言的艺术性四个方面出现问题严重。笔者依据对一线教师的访问、听课、教学实例或自身经验分析总结出各问题出现的原因。第三部分是全篇的重点,探讨了解决思想政治课教学语言运用问题的对策。主要从以下四方面进行探讨:第一,明晰学科特点及功能,合理运用教学语言;第二,规范教学语言的运用标准;第三,注重教师教学素质的培养;第四,运用多种语言艺术,提高思想政治课教学语言的效果。

关键词：思想政治课教学语言对策

逆向教学设计对高中生英语阅读成绩和阅读策略使用影响的实验研究

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逆向教学设计对高中生英语阅读成绩和阅读策略使用影响的实验研究

作者：刘诗梦广州大学

学位级别：硕士

在传统阅读教学中,阅读教学和阅读策略教学大都基于传统正向教学设计模式。然而传统正向教学设计由于缺乏清晰的教学目标指引以及目标达成机制的保障,使得传统阅读教学仍然过于聚焦碎片知识和技能的培养。本研究引入威金斯和麦克泰格的... 详细信息

在传统阅读教学中,阅读教学和阅读策略教学大都基于传统正向教学设计模式。然而传统正向教学设计由于缺乏清晰的教学目标指引以及目标达成机制的保障,使得传统阅读教学仍然过于聚焦碎片知识和技能的培养。本研究引入威金斯和麦克泰格的逆向教学设计(又叫追求理解的设计,Understanding by Design,缩写Ub D),旨在探讨其对高中生英语阅读成绩和英语阅读策略使用的影响。本研究旨在解决以下两个研究问题:第一,相比传统正向教学设计,逆向教学设计对高中生英语阅读成绩的影响是否有差异?差异表现如何?第二,相比传统正向教学设计,逆向教学设计对高中生英语阅读策略使用的影响是否有差异?差异表现如何?82名广州大学附属中学的高二学生参加了本次实验,他们被随即分配到实验组和控制组。在实验组实施基于逆向设计的阅读教学,在控制组实施基于传统正向教学设计的阅读教学。实验为期3个月共20课时。在阅读教学的同时,分别对8项阅读策略进行了训练。受试在每项策略训练后进行一次即时测试来检测对即时阅读成绩的影响,即时阅读成绩测试一共8次。训练结束后,进行了一次英语阅读成绩后测和一次阅读策略使用的问卷调查。对所有采集到数据采用了SPSS20.0进行了分析,结果显示:1)基于逆向教学设计的阅读训练能从总体上有效提高参与者的英语阅读成绩。实验组的后测成绩显著高于控制组。此外,基于逆向设计的阅读策略训练可以明显增强受试的即时阅读成绩,其中实验组8项即时测试中的5次成绩均显著高于控制组。2)基于逆向设计的阅读策略训练可以从很大程度上增强受试的阅读策略使用。问卷调查中实验组的策略使用明显高于控制组。因此,与传统正向教学设计相比,逆向教学设计在高中生的英语阅读成绩和阅读策略使用方面具有显著优势,并且基于逆向设计的阅读策略训练只有在训练与文本解读和主题意义挖掘相关的策略时才有显著性优势。本研究对教师利用Ub D进行阅读教学的实践有一定启示作用。

关键词：逆向教学设计追求理解的设计英语阅读策略英语阅读成绩大概念理论

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两类特殊延迟微分方程数值解的振动性分析

两类特殊延迟微分方程数值解的振动性分析

作者：刘诗梦哈尔滨师范大学

学位级别：硕士

本文主要讨论两类特殊的延迟微分方程(即:超前型自变量分段连续延迟微分方程和线性常系数延迟微分方程)数值解的振动性,这两类方程作为数学模型在物理学、生物学等很多领域中有着广泛的应用.因此,发展适用的数值方法和讨论数值解的性状... 详细信息

本文主要讨论两类特殊的延迟微分方程(即:超前型自变量分段连续延迟微分方程和线性常系数延迟微分方程)数值解的振动性,这两类方程作为数学模型在物理学、生物学等很多领域中有着广泛的应用.因此,发展适用的数值方法和讨论数值解的性状态成为既有理论意义又有实际价值的研究课题.文中详细叙述了两类方程的应用背景,回顾了国内外关于这两类方程数值解振动性的研究现状.对于自变量分段连续型延迟微分方程运用方程振动的等价条件,讨论了解析解振动的充要条件.在应用θ-方法去解方程时根据方程本身的特点,把方程的振动性转化为一个差分方程的振动性,再运用差分方程振动等价于其特征方程没有正根这一判定定理,讨论了θ-方法的数值解振动的充要条件,并研究了θ-方法保持原方程振动性的条件.目前关于延迟微分方程数值解振动性的研究只是局限于几类比较特殊的方程,对于一般的延迟微分方程,还没有发现相关的研究成果.本文的最后一章从线性常系数方程入手,运用差分方程振动等价于其特征方程没有正根这一结论,分别讨论了显式欧拉方法,隐式欧拉方法,梯形方法以及θ-方法的数值解的振动性.通过几个重要不等式的应用研究了这几种方法保持原方程振动的条件,并讨论了方程的振动性一定不被保持的条件.

关键词：延迟微分方程数值解振动性 θ-方法

4.1R基因缺失对IgE介导的肥大细胞活化的影响

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4.1R基因缺失对IgE介导的肥大细胞活化的影响

作者：刘诗梦郑州大学

学位级别：硕士

研究背景肥大细胞来源于骨髓造血干细胞,其前体在定居的组织(皮肤、神经周围、肠粘膜、呼吸道粘膜等)器官中发育成熟。肥大细胞通过受体识别相关病原体,在机体抵抗病原微生物感染的固有免疫中发挥重要功能,其被活化后通过脱颗粒向周围... 详细信息

研究背景肥大细胞来源于骨髓造血干细胞,其前体在定居的组织(皮肤、神经周围、肠粘膜、呼吸道粘膜等)器官中发育成熟。肥大细胞通过受体识别相关病原体,在机体抵抗病原微生物感染的固有免疫中发挥重要功能,其被活化后通过脱颗粒向周围组织释放组胺、细胞因子、趋化因子等炎性介质参与I型变态反应(过敏反应),还能够导致炎症后期的炎症细胞持续浸润、组织重构及纤维化,因此肥大细胞在过敏,炎症,免疫反应中都发挥着重要作用。肥大细胞的活化受细胞多种分子调控,FcεRI和KIT两个跨膜受体在肥大细胞活化信号起始阶段发挥关键作用。其中FcεRI在肥大细胞中高表达,是肥大细胞活化调控中主要的膜受体。当机体初次接触致敏原,B细胞产生的特异性抗体IgE可与肥大细胞表面的FcεRI结合,促使FcεRI发生交联,使机体处于致敏状态。当同一致敏原再次刺激时,可经IgE/FcεRI活化肥大细胞,最终引起颗粒内组胺的释放以及细胞因子的分泌,从而导致平滑肌收缩、毛细血管扩张、通透性增加,引起过敏反应。尽管对于肥大细胞活化的研究较多,但是针对参与肥大细胞活化关键分子的研究仍然是热点之一。鉴于肥大细胞在过敏反应中的关键作用,研究发现肥大细胞活化的新调控因子对探讨肥大细胞参与的过敏反应具有重要意义。蛋白4.1R是1979年在成熟红细胞中发现的80kDa细胞膜骨架蛋白分子。在红细胞中存在两种形式的蛋白4.1R:135kDa亚型(4.1R135)与80kDa亚型(4.1R80),分别表达于红细胞的不同分化阶段。4.1R是将红细胞跨膜蛋白和血影蛋白-肌动蛋白蛋白骨架网络连接起来的桥梁,对维持红细胞的形状、粘附、脆性及正常生理功能发挥重要作用。拥有FERM结构域的蛋白被称为蛋白4.1超家族,4.1超家族分为5个亚家族:4.1蛋白家族、ERM蛋白家族、踝蛋白相关分子、PTPH和NBL4蛋白。近年来研究发现,4.1蛋白家族除了最初在成熟红细胞中发现的80kDa的细胞膜骨架蛋白分子4.1R,还包括在有核细胞中广泛表达的4.1N、4.1G、4.1B,其中4.1N主要分布在神经系统,4.1B主要分布在脑组织,4.1G广泛分布,而4.1R则在红细胞及同样来源于骨髓多功能造血干细胞的T细胞、B细胞和肥大细胞等免疫细胞中高表达。本课题前期研究显示蛋白4.1R通过抑制T细胞受体TCR介导的信号转导对T淋巴细胞活化及增殖发挥负调控作用,同时实验组前期利用小鼠自身抗原MOG诱导小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)模型,发现4.1R基因敲除小鼠对致敏原反应更敏感。4.1R在不同细胞中的功能正在越来越多的被发现,但是4.1R在固有免疫细胞,如肥大细胞,巨噬细胞等中的功能尚不清楚。研究目的本研究利用课题组已建立的4.1R基因敲除小鼠模型,研究4.1R基因缺失对IgE介导的体外肥大细胞活化和体内过敏反应性疾病的影响,证实细胞膜骨架蛋白4.1R是肥大细胞活化的重要调控因子,为阐明蛋白4.1R对肥大细胞信号转导调控的分子机制奠定基础,对理解和丰富有关肥大细胞活化与调控的理论具有重要意义。研究方法1.取4.1R和4.1R-/-C57BL/6J小鼠股骨和胫骨中的骨髓,用RPMI1640培养基重悬。体外培养四周后收集悬浮细胞,得到BMMC。甲苯胺蓝染色,光镜下比较4.1R和4.1R-/-BMMC生长形态;用FITC标记的anti-mouse FcεRIα抗体和PE标记的anti-mouse CD117共染,流式细胞仪检测分析肥大细胞纯度。2.培养成熟的4.1R和4.1R-/-BMMC,提取总RNA后反转录成cDNA,PCR反应及琼脂糖电泳进行基因型鉴定,测序鉴定肥大细胞中蛋白4.1R剪切体外显子组成。3.利用吸光光度法研究4.1R基因缺失对IgE介导的BMMC脱颗粒的影响。4.利用qRT-PCR方法研究4.1R基因缺失对于BMMC炎症因子IL-6、IL-4、IL-13和TNF-α在不同活化时间点转录水平的影响。5.利用qRT-PCR方法研究4.1R基因缺失对BMMC FcεRI在不同活化时间点转录水平的影响,利用流式细胞仪检测分析4.1R基因缺失对BMMC表面FcεRIα表达的影响。6.建立4.1R和4.1R-/-C57BL/6J小鼠被动皮肤过敏反应模型,吸光光度法比较两种基因型小鼠耳部血管渗透性,将耳朵包埋切片,病理学观察比较两种基因型小鼠组胺释放导致的耳部肿胀程度。7.建立4.1R和4.1R-/-C57BL/6J小鼠迟发相皮肤过敏反应模型,比较两种基因型小鼠耳厚耳重,将耳部包埋切片,病理学观察比较小鼠耳部肥大细胞介导的炎性细胞浸润程度,将切片进行甲苯胺蓝染色,显微镜下统计耳部肥大细胞脱颗粒率。并利用qRT-PCR方法比较两种基因型小鼠耳部炎症因子IL-6转录水平。研究结果1.培养成熟的4.1R和4.1R-/-BMMC经过

关键词：肥大细胞 4.1R 脱颗粒 FcεRI 组胺

数字化水平对政府质量的影响研究 ——基于2010-2020年省级面板数据的实证分析

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数字化水平对政府质量的影响研究 ——基于2010-2020年省级面板数...

作者：刘诗梦华东理工大学

学位级别：硕士

党的十九届五中全会上强调当下社会经济的发展应该以“高质量发展”为总要求,政府作为国家治理重要的参与者,反映了国家治理的水平,对市场、社会、个体的影响无处不在,高质量的政府显然是经济社会各领域高质量发展的关键。数字化的发展... 详细信息

党的十九届五中全会上强调当下社会经济的发展应该以“高质量发展”为总要求,政府作为国家治理重要的参与者,反映了国家治理的水平,对市场、社会、个体的影响无处不在,高质量的政府显然是经济社会各领域高质量发展的关键。数字化的发展为政府治理、社会生产和居民生活等领域带来了深刻变革,中国也在积极推进政府的数字化转型,一种新的数字治理范式正在形成,数字技术成为一种重要的治理工具,数字化水平已然成为解释政府质量的关键变量。数字化水平的提升是否能有效改善中国政府质量?本研究基于2010—2020年31个省(自治区、直辖市)的统计数据,从政府规模、抑制腐败、法治水平、公共物品供给、政府监管、公平公正这六个维度衡量政府质量,进行回归分析检验数字化水平对政府质量的影响,并且分别考察两者关系中注意力分配和区域创新能力的调节效应。研究显示,数字化水平对整体性的政府质量具有显著的正向影响;注意力分配在数字化水平对政府质量的影响中存在调节效应;区域创新能力的调节效应也得到验证。在政府质量各个维度的分析中,数字化水平分别对政府规模、抑制腐败、法治水平、公共物品供给、政府监管具有显著的正向影响;注意力分配强化了数字化水平对抑制腐败、政府监管的影响,但是弱化了数字化水平对政府规模和公共物品供给的影响;区域创新能力强化了数字化水平对抑制腐败、公共物品供给、政府监管的正向影响。本研究丰富了关于政府质量影响因素的研究,也是对有关数字化水平研究的有效补充,研究结论为数字化助力政府质量的改善提供了实证依据,同时为政府质量的提升提供了理论启示和政策参考。

关键词：政府质量数字化水平注意力分配区域创新能力

科教与德育:中国传统文化教育的主要路径思考——评《中国传统文化与教育》

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科技管理研究 2022年第24期42卷 I0018-I0019页

作者：尹雨晴刘诗梦范爱菊邢台学院文学院

中国传统文化作为中华民族在历史发展过程中所形成的拥有鲜明民族特性与时代稳定性的文明形态,是本民族形成和发展的根基,即包含抽象的精神文明形态,又包含具体的物质文明形态和行为文明形态。长期以来,党和国家始终高度关注中国传统文... 详细信息

中国传统文化作为中华民族在历史发展过程中所形成的拥有鲜明民族特性与时代稳定性的文明形态,是本民族形成和发展的根基,即包含抽象的精神文明形态,又包含具体的物质文明形态和行为文明形态。长期以来,党和国家始终高度关注中国传统文化的发展与传播,坚持从科教引领与道德培养方面对当代学生进行中国传统文化知识教育。伴随着我国现代化教育的不断革新,中国传统文化教育也迎来了全新的挑战与变革,现代教育发展目标要求中国传统文化要紧密结合社会现代化建设路径与时代发展要求,培养诚实守信、勤劳勇敢、德才兼备的社会新青年。

关键词：传统文化知识中国传统文化教育现代教育发展道德培养文明形态德育勤劳勇敢诚实守信

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融合语境下《想见你》的跨文本改编思路

电影文学 2023年第8期 156-159页

作者：赵培宏刘诗梦邢台学院文学院河北邢台054001

电影《想见你》是由2019年的现象级同名电视剧改编的作品,由原班人马打造,在“穿越”的题材结构基础之上基于电影的体量与特性进行了文本改编。影片沿用了原剧中的主要人物关系,同时对原文本中人物大胆地进行了舍弃与创新,充分体现了跨... 详细信息

电影《想见你》是由2019年的现象级同名电视剧改编的作品,由原班人马打造,在“穿越”的题材结构基础之上基于电影的体量与特性进行了文本改编。影片沿用了原剧中的主要人物关系,同时对原文本中人物大胆地进行了舍弃与创新,充分体现了跨文本改编的互文性特征。同时,电影强化了“穿越”题材的奇观化设定,将重心放置在重构“穿越”时空线索上,沿用原剧经典符号,并建构特殊戏剧冲突空间,延续了“拯救爱人”的创作母题。

关键词：《想见你》互文性人物关系 “穿越” 符号

基于CERES卫星资料的青藏高原有效辐射变化规律

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高原气象 2018年第1期37卷 106-122页

作者：于涵张杰刘诗梦气象灾害预报预警与评估协同创新中心/气象灾害省部共建教育部重点实验室南京信息工程大学江苏南京210044

有效辐射作为地表辐射平衡的重要组成部分,其对大气的加热对辐射平衡,能量平衡以及周边大气环流起着重要的作用。基于2000-2014年的Aqua/CERES卫星产品地表长波辐射及其他相关参数,研究了青藏高原(下称高原)地区全天气和晴天两个不同条... 详细信息

有效辐射作为地表辐射平衡的重要组成部分,其对大气的加热对辐射平衡,能量平衡以及周边大气环流起着重要的作用。基于2000-2014年的Aqua/CERES卫星产品地表长波辐射及其他相关参数,研究了青藏高原(下称高原)地区全天气和晴天两个不同条件下地表有效辐射的时空分布及其成因。结果表明:在高原地区有效辐射呈现出西部地区较大,东南部较小的空间分布。由于高原有效辐射的变化存在区域性的不同,应用经验正交分解方法将高原分为高原西部边缘(Ⅰ区)、中西部腹地(Ⅱ区)、东北(Ⅲ区)和东南(Ⅳ区)4个气候区。有效辐射与地表向上长波辐射的增加(减弱)趋势基本一致,而大气逆辐射的改变对有效辐射的影响在不同气候分区的不同季节呈现出不同的变化趋势,且云通过增加大气逆辐射进而减小有效辐射。在高原中西部腹地(Ⅱ区)以冷平流为主,相对湿度偏低,而在其他三个地区则以暖平流为主,相对湿度偏高。温度平流和大气水汽等因子均通过影响大气逆辐射进而影响有效辐射。研究结果可为认识高原整体非绝热加热特征及影响机理提供参考。

关键词：地表向上长波辐射大气逆辐射有效辐射全天气晴天