检索结果-南通市图书馆

家蚕光泽小眼(varnished eye)突变基因的精细定位

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遗传 2014年第10期36卷 1006-1012,957页

作者：刘春李琼艳荀利杰胡文波吕金风刘茹凤夏庆友家蚕基因组生物学国家重点实验室、农业部蚕桑重点实验室、西南大学重庆400715

家蚕（Bombyx mori）光泽小眼（varnished eye，ve）突变体是家蚕突变品种中少数关于家蚕复眼形态异常的自然隐性突变品种之一，表现为成虫复眼小，表面富有光泽，有瘤状突起；小眼数量少且不规则。经典遗传学连锁图谱将ve基因定位在第... 详细信息

家蚕（Bombyx mori）光泽小眼（varnished eye，ve）突变体是家蚕突变品种中少数关于家蚕复眼形态异常的自然隐性突变品种之一，表现为成虫复眼小，表面富有光泽，有瘤状突起；小眼数量少且不规则。经典遗传学连锁图谱将ve基因定位在第6连锁群32.2座位，但到目前为止，该突变性状的形成机理仍不清楚。文章以突变品种ve和对照品种Dz为亲本，杂交产生的F1代雄个体与轮回亲本ve雌个体回交产生的BC1代为材料进行ve基因的精细定位。通过对ve低密度连锁图谱分析发现，ve基因被定位在SNP3~SNP6之间，物理图谱距离大约为1.2 Mb。利用1563个BC1代个体构建ve高密度连锁图谱，最终将ve基因定位在SNP5~SNP61之间，物理图谱距离大约为221.8 kb。通过家蚕基因数据库对ve最终定位区域内进行预测基因检索，发现有6个预测基因。对6个预测基因进行生物信息学分析和测序，这些候选基因都有可能参与家蚕复眼形成，但在编码区没有发现ve特异的突变位点；对这些候选基因进行表达分析，发现编号为BGIBMGA013642的候选基因在ve复眼形成过程中的表达量明显比正常对照Dz低，推测该基因为最佳候选基因。

关键词：家蚕光泽小眼 SNP标记精细定位候选基因

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脑膜炎奈瑟菌核酸检测试剂国家参考品的研制

中国医药生物技术 2022年第3期17卷 268-270页

作者：李江姣刘茹凤李康黄洋徐潇石继春王春娥梁丽陈驰叶强中国食品药品检定研究院中国医学细菌保藏管理中心北京102629

脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm),又名脑膜炎双球菌或脑脊髓膜炎双球菌,是一种革兰氏阴性菌,根据荚膜多糖可分为A、B、C、D、X、Y、Z、29E、W135、L、H、I、K等13个血清群,主要寄居在人体鼻咽部,可通过飞沫传播。人感染脑膜炎... 详细信息

脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm),又名脑膜炎双球菌或脑脊髓膜炎双球菌,是一种革兰氏阴性菌,根据荚膜多糖可分为A、B、C、D、X、Y、Z、29E、W135、L、H、I、K等13个血清群,主要寄居在人体鼻咽部,可通过飞沫传播。人感染脑膜炎奈瑟菌可引起败血症或流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)等急性呼吸道传染病,常伴随着较高的死亡率[1-3]。建立高效的Nm检测方法对流脑的临床诊断有重要的意义。

关键词：流行性脑脊髓膜炎飞沫传播脑膜炎奈瑟菌国家参考品脑膜炎双球菌荚膜多糖血清群临床诊断

淋病奈瑟球菌国家参考品菌株的分子生物学特征分析

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军事医学 2015年第7期39卷 569-570,F0003页

作者：王春娥刘茹凤石继春李康陈琼陈翠萍叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的对中国医学细菌保藏管理中心收集保藏的淋病奈瑟球菌(NG)国家参考品菌株进行分子生物学特征分析。方法对13株NG国家参考品菌株进行16S rRNA和隐蔽性质粒cppB基因扩增和分析,并采用多位点序列分型(MLST)、NG多抗原序列分型(NG-MAST)... 详细信息

目的对中国医学细菌保藏管理中心收集保藏的淋病奈瑟球菌(NG)国家参考品菌株进行分子生物学特征分析。方法对13株NG国家参考品菌株进行16S rRNA和隐蔽性质粒cppB基因扩增和分析,并采用多位点序列分型(MLST)、NG多抗原序列分型(NG-MAST)技术对菌株进行分子分型。结果 13株菌种均扩增出预期大小的16S rRNA基因片段,与NG模式菌株参考序列(X07714.1)的相似性均>99%;13株菌种均扩增出预期大小的cppB基因;MLST结果显示,13株菌种共分为10个ST型,其中含7个新的ST型;NG-MAST结果显示,13株菌种含9个por等位基因和9个tbpB等位基因,配对后是10个不同的ST型,其中含6个新的ST型。结论该研究完善了NG国家参考品菌株的分子生物学方面的质控指标,为今后NG参考品候选菌株的选择提供了新的技术手段。

关键词：奈瑟球菌,淋病多位点序列分型(MLST) 多抗原序列分型(NG-MAST)

4、6B、9V型肺炎链球菌荚膜多糖血清IgG抗体定量ELISA检测方法的初步验证

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中国生物制品学杂志 2014年第8期27卷 1066-1069,1075页

作者：李红刘茹凤高春艳唐静陈琼叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的对4、6B、9V型肺炎链球菌荚膜多糖血清IgG抗体定量ELISA检测方法进行初步验证。方法以国际参考血清007sp为标准,测定4份国际质控血清的4型、6B型及9V型IgG抗体值,绘制标准曲线,确定检测范围、线性（R2）、检测限及定量限;连续测定... 详细信息

目的对4、6B、9V型肺炎链球菌荚膜多糖血清IgG抗体定量ELISA检测方法进行初步验证。方法以国际参考血清007sp为标准,测定4份国际质控血清的4型、6B型及9V型IgG抗体值,绘制标准曲线,确定检测范围、线性（R2）、检测限及定量限;连续测定该4份国际质控血清的4、6B、9V型IgG抗体各10次,计算回收率,验证该方法的准确性;在同一次试验内连续测定3份本室制备的质控血清的4、6B、9V型IgG抗体各10次,计算变异系数（CV）,验证方法的试验内精密性;在不同次试验间连续测定15份质控血清的4、6B、9V型IgG抗体各10次,计算CV值,验证方法的试验间精密性;利用3份本室制备的质控血清进行抑制试验,验证方法的特异性。结果该方法检测4、6B、9V型IgG抗体的范围分别为0.034～8.325、0.093～22.625和0.066～16.400 ng/ml,R2均大于0.99,检测限分别为0.41、0.64和0.77 ng/ml,定量限分别为1.60、2.66和2.80 ng/ml;该方法检测4份国际质控血清的4、6B、9V型IgG抗体,除96/728和96/770质控血清的4型抗体测定值远远超出理论值外,其他检测结果准确性均良好;该方法的试验内变异系数均小于15%,试验间变异系数绝大多数小于20%;多糖抗原与血清抗体的反应具有特异性,其中,检测4型抗体的特异性最高,检测6B型抗体的特异性略差。结论该方法的检测范围、线性、检测限和定量限均达到可接受标准,准确性、精密性和特异性良好,可用于肺炎球菌疫苗临床血清的检测。

关键词：肺炎链球菌荚膜多糖血清抗体酶联免疫吸附测定验证

家蚕谷胱甘肽-S-转移酶E4基因的组织表达和序列特征及重组蛋白的酶活性分析

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蚕业科学 2012年第4期38卷 624-633页

作者：谭祥聂红毅刘春胡晓明陈全梅刘茹凤赵萍夏庆友家蚕基因组生物学国家重点实验室西南大学重庆400715

昆虫体内的谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)主要行使对异生或内源有毒物质进行代谢解毒的功能。选择家蚕谷胱甘肽-S-转移酶E4的编码基因Bmgste4为靶标,研究其组织表达谱、序列结构特征及原核表达重组蛋白的酶活性。RT-PCR检测不同组织表达特征... 详细信息

昆虫体内的谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)主要行使对异生或内源有毒物质进行代谢解毒的功能。选择家蚕谷胱甘肽-S-转移酶E4的编码基因Bmgste4为靶标,研究其组织表达谱、序列结构特征及原核表达重组蛋白的酶活性。RT-PCR检测不同组织表达特征的结果显示,Bmgste4基因在家蚕5龄第3天幼虫的头部、触角、下颚须、表皮、脂肪体、丝腺以及雄性个体的马氏管和雌性个体的卵巢中均有表达,而在血细胞、中肠以及雄性个体的精巢和雌性个体的马氏管中不表达。多序列比对结果显示BmGSTE4具有完整和保守的GST二级结构特征,N端氨基酸残基保守,特别是谷胱甘肽结合位点。构建插入Bmgste4基因开放阅读框片段的重组表达质粒p28-Bmgste4,并转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞进行原核表达后,利用分光光度法测定重组蛋白对通用底物1-氯-2,4-二硝基苯的酶活参数:Km=0.58 mmol/L,Vmax=24.55μmol/(mg.min)。这些结果为进一步研究家蚕体内解毒和抗药性机制以及开发鳞翅目害虫新型生物防治药剂提供了基础信息。

关键词：家蚕谷胱甘肽-S-转移酶E4 基因表达谱多序列比对原核表达酶活性

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白喉棒杆菌核酸检测试剂用国家参考品的研制

中国药事 2023年第12期37卷 1438-1444页

作者：赵丹陈琼李亚南徐潇刘茹凤徐颖华王春娥叶强中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室北京102629

目的:研制白喉棒杆菌核酸检测试剂用国家参考品。方法:将6株白喉棒杆菌和10株非白喉棒杆菌代表性菌株在各自适宜的环境下培养,经菌株鉴定后,制备灭活菌液,对候选参考品进行均匀性和稳定性的评估以及准确性、特异性、重复性和最低检出限... 详细信息

目的:研制白喉棒杆菌核酸检测试剂用国家参考品。方法:将6株白喉棒杆菌和10株非白喉棒杆菌代表性菌株在各自适宜的环境下培养,经菌株鉴定后,制备灭活菌液,对候选参考品进行均匀性和稳定性的评估以及准确性、特异性、重复性和最低检出限的验证研究,并组织3家实验室进行协作标定。结果:研制出白喉棒杆菌核酸检测试剂用候选参考品,由6个阳性参考品、10个阴性参考品、最低检出限参考品和重复性参考品组成。证实该候选参考品均匀性及稳定性良好,准确性、特异性及重复性好,最低检出限可达1.0×10~3~1.0×10~4个菌·m L^(-1)。协作标定结果也进一步表明阳性、阴性、重复性和最低检出限候选参考品均符合国家参考品的各项要求。结论:研制出的白喉棒杆菌核酸检测试剂参考品,可用于相关试剂盒的质量控制和评价。

关键词：白喉棒杆菌核酸检测试剂国家参考品均匀性稳定性

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产气荚膜梭菌核酸检测试剂国家参考品的研制

国际检验医学杂志 2023年第S1期44卷 10-13页

作者：刘茹凤陈驰石继春李康王斌王春娥叶强李茂光中国食品药品检定研究院生物制品检定所细菌多糖和结合疫苗室北京102629

目的研制产气荚膜梭菌(CP)核酸检测试剂国家参考品。方法通过对5株产气荚膜梭菌和7株非产气荚膜梭菌的菌种检定、培养、灭活及分装,组建产气荚膜梭菌核酸检测试剂国家参考品。对参考品进行样品均匀性以及稳定性评估验证,组织3家实验室... 详细信息

目的研制产气荚膜梭菌(CP)核酸检测试剂国家参考品。方法通过对5株产气荚膜梭菌和7株非产气荚膜梭菌的菌种检定、培养、灭活及分装,组建产气荚膜梭菌核酸检测试剂国家参考品。对参考品进行样品均匀性以及稳定性评估验证,组织3家实验室协作标定。结果参考品由5份阳性参考品、7份阴性参考品、3份重复性参考品以及1份最低检出限参考品样本组成,均匀性和稳定性良好。协作标定结果显示:5份阳性参考品检测结果均为产气荚膜梭菌阳性;7份阴性参考品检测结果均为产气荚膜梭菌阴性;重复性参考品检测结果全部为气荚膜梭菌阳性(n=10,CV≤5.00%);参考品最低检出限为1.0×10^(3)个菌/mL。结论建立了产气荚膜梭菌核酸检测试剂国家参考品,建立的国家参考品可用于产气荚膜梭菌核酸检测试剂盒的质量控制。

关键词：产气荚膜梭菌核酸检测验证国家参考品

铜绿假单胞菌核酸检测用试剂盒国家参考品的研究

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中国医药生物技术 2022年第2期17卷 168-171,175页

作者：梁丽陈驰石继春王春娥龙新星刘茹凤黄洋李康徐潇李江姣徐颖华叶强中国食品药品检定研究院中国医学细菌保藏管理中心卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)为假单胞菌属的一种革兰氏阴性菌,也被称为绿脓杆菌。在自然界水、土壤与空气中均广泛存在[1]。铜绿假单胞菌污染常见于凉拌菜、熟肉制品、饮用水等食品领域。例如在水源水或成品水中检出铜绿假单... 详细信息

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)为假单胞菌属的一种革兰氏阴性菌,也被称为绿脓杆菌。在自然界水、土壤与空气中均广泛存在[1]。铜绿假单胞菌污染常见于凉拌菜、熟肉制品、饮用水等食品领域。例如在水源水或成品水中检出铜绿假单胞菌,甚至多批次样品的检出率大于10%,为一种重要的水源和食源性致病菌[2-4]。因此在我国饮用天然矿泉水(GB 8537-2016)[5]和包装饮用水(GB 19298-2014)[6]的国家标准中均明确规定不得检出铜绿假单胞菌。此外,在2015年我国颁布的《化妆品安全技术规范》也要求化妆品中不得有铜绿假单胞菌检出[7]。铜绿假单胞菌作为医院内感染的主要病原菌之一,在机体免疫力低下时,例如术后和恶性肿瘤的患者容易感染本菌,且铜绿假单胞菌的耐药性强,在治疗时往往需要使用多种抗生素进行联合用药[8-9]。因此,快速而准确地鉴定出铜绿假单胞菌对保障食品安全和人民健康具有重要的意义。

关键词：铜绿假单胞菌国家参考品核酸检测饮用天然矿泉水医院内感染凉拌菜食源性致病菌熟肉制品

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10株铜绿假单胞菌的全基因组序列分析

微生物学免疫学进展 2022年第1期50卷 46-52页

作者：王春娥石继春徐潇梁丽刘茹凤李康陈驰龙新星叶强徐颖华中国食品药品检定研究院细菌多糖和结合疫苗室(医学细菌保藏研究中心)国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京102629

目的了解不同分离来源铜绿假单胞菌的全基因组基本特征,以此分析基因组多态性及其遗传进化关系。方法选择10株医源性和食源性来源的铜绿假单胞菌代表性菌株,应用Solexa高通量测序技术对其进行全基因组测序,以此进行多位点序列分型(multi... 详细信息

目的了解不同分离来源铜绿假单胞菌的全基因组基本特征,以此分析基因组多态性及其遗传进化关系。方法选择10株医源性和食源性来源的铜绿假单胞菌代表性菌株,应用Solexa高通量测序技术对其进行全基因组测序,以此进行多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST),比较各菌株基因组中携带的耐药基因、毒力基因及插入序列(insertion sequence,IS)元件,并通过比较基因组学分析方法拟合泛基因组和核心基因组积累曲线,筛选核心基因SNP构建系统发育分子进化树。结果10株菌的基因组从6.3~7.0 Mbp大小不一,包含5868~6598个基因,平均G+C含量为67.1%;发现10个菌株各具不同的ST型。在这10个菌株的基因组中,共检测到75种耐药基因,包括抗β-内酰胺酶类、抗氨基糖苷类、抗氟喹诺酮类等;共发现188种毒力基因,不同来源菌株间无明显差异;各菌株之间IS元件种类和数量差异较大。分析发现,铜绿假单胞菌具有开放型泛基因组和稳定型核心基因组;10株菌可分为3个进化分支,且不同分离时间和来源无明显相关性。结论本研究获得10株不同分离来源的铜绿假单胞菌的全基因组序列,初步证实食品及患者分离来源菌株基因组数据无明显相关性,为后续铜绿假单胞菌的分子流行病学和致病性机制研究提供数据参考。

关键词：铜绿假单胞菌全基因组测序耐药基因毒力基因核心基因组