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黄连素抗结直肠癌的作用机制研究进展

药学学报 2022年第2期57卷 343-352页

作者：孙强刘茂伦任珊杨寒曾沙陈莉赵晖明天琪徐海波成都中医药大学药学院西南特色中药资源国家重点实验室四川成都611137

结直肠癌是一种严重危害人类生命健康的恶性肿瘤,由于现代社会的饮食结构和生活习惯变化,其发病率和死亡率均逐渐升高。黄连素是一种异喹啉类生物碱,其广泛地存在于黄连等药用植物中。大量证据表明黄连素具有强大的抗炎、抗菌、抗肿瘤... 详细信息

结直肠癌是一种严重危害人类生命健康的恶性肿瘤,由于现代社会的饮食结构和生活习惯变化,其发病率和死亡率均逐渐升高。黄连素是一种异喹啉类生物碱,其广泛地存在于黄连等药用植物中。大量证据表明黄连素具有强大的抗炎、抗菌、抗肿瘤和抗糖尿病等药理作用。尤其,黄连素对于结直肠癌等多种肿瘤具有强烈的抑制作用。在此,本文从抑制结直肠癌细胞增殖和转移、诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期、调节炎症反应、逆转化疗药物耐药性和调节肠道菌群等方面系统综述了黄连素抗结直肠癌作用,旨在阐明临床使用黄连素治疗结直肠癌的机制。

关键词：黄连素结直肠癌炎症抗肿瘤作用机制

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中药调控肿瘤细胞自噬的研究进展

中草药 2021年第10期52卷 3142-3150页

作者：何曼陈莉曾沙孙强赵晖刘茂伦杨寒任珊张梦徐海波成都中医药大学药学院药理系四川成都611137

自噬是细胞自我吞食并通过溶酶体降解丧失功能的废旧细胞器和蛋白质等细胞内物质,以实现循环再利用、产生能量、对抗应激等现象。自噬可分为巨自噬、微自噬、分子伴侣介导的自噬3类。细胞自噬与肿瘤的增殖、凋亡、侵袭、转移和耐药性等... 详细信息

自噬是细胞自我吞食并通过溶酶体降解丧失功能的废旧细胞器和蛋白质等细胞内物质,以实现循环再利用、产生能量、对抗应激等现象。自噬可分为巨自噬、微自噬、分子伴侣介导的自噬3类。细胞自噬与肿瘤的增殖、凋亡、侵袭、转移和耐药性等密切相关。研究发现,中药能够增强肿瘤细胞自噬以诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭与转移、降低肿瘤耐药性,从而发挥抗肿瘤作用。但是,某些中药也可以诱导肿瘤细胞产生保护性自噬,从而促进肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤细胞凋亡。另外,中药也可以抑制肿瘤细胞保护性自噬,以逆转肿瘤耐药性。少数中药还能够双向调控肿瘤细胞自噬。中药调控肿瘤细胞自噬的信号机制主要分为哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)依赖性通路和非m TOR依赖性通路。随着自噬生物学的发展,研究开发基于精准调控细胞自噬的抗癌中药,将助力临床肿瘤的防治。

关键词：自噬肿瘤中药双向调控信号通路

熊果酸通过hedgehog信号通路调控结直肠癌细胞HCT116自噬的机制研究

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中国中药杂志 2021年第5期46卷 1217-1223页

作者：何曼张梦孙强曾沙陈莉赵晖杨寒刘茂伦任珊徐海波成都中医药大学药学院药理系四川成都611137

研究旨在证明熊果酸通过抑制hedgehog信号通路激活结直肠癌HCT116细胞的自噬。采用MTT法测定熊果酸对HCT116细胞活力的影响;结晶紫染色和划痕试验分别检测熊果酸对HCT116细胞增殖和迁移的影响。针对自噬的研究,首先进行时间点的筛选,利... 详细信息

研究旨在证明熊果酸通过抑制hedgehog信号通路激活结直肠癌HCT116细胞的自噬。采用MTT法测定熊果酸对HCT116细胞活力的影响;结晶紫染色和划痕试验分别检测熊果酸对HCT116细胞增殖和迁移的影响。针对自噬的研究,首先进行时间点的筛选,利用Cell Meter^(TM)Autophagy Assay Kit检测熊果酸作用于HCT116不同时间点的自噬荧光强度;Western blot法检测熊果酸作用于HCT116不同时间点的自噬蛋白P62的表达水平。然后利用Cell Meter^(TM)Autophagy Assay Kit检测不同剂量熊果酸对HCT116细胞自噬荧光强度的影响;Western blot法检测不同剂量熊果酸对HCT116细胞LC3Ⅱ和P62蛋白表达水平的影响。进一步采用AdPlus-mCherry-GFP-LC3B腺病毒转染检测熊果酸对HCT116细胞自噬流的影响;熊果酸与自噬抑制剂氯喹(CQ)联合利用Western blot法检测自噬蛋白LC3Ⅱ的表达水平。在机制方面,通过Western blot法检测熊果酸对HCT116细胞中hedgehog信号通路相关蛋白的影响。实验结果表明,熊果酸抑制HCT116细胞的活性、增殖和迁移;增强HCT116细胞自噬体的荧光强度,同时升高自噬标志蛋白LC3Ⅱ表达水平和抑制P62的表达水平,并且呈时间和剂量依赖性;熊果酸激活HCT116细胞自噬流,表现为熊果酸导致自噬荧光斑点聚集并增强自噬体的荧光强度,而且与单独使用熊果酸相比,联合使用自噬抑制剂CQ能提高LC3Ⅱ的表达水平;熊果酸降低hedgehog信号通路中PTCH1,GLI1,SMO,SHH,c-Myc的表达水平,提高Sufu的表达水平。总之,该研究表明熊果酸激活结直肠癌HCT116细胞自噬,其机制可能是通过抑制hedgehog信号通路活性。

关键词：熊果酸结直肠癌 hedgehog信号通路自噬

基于Hedgehog信号通路的熊果酸诱导结直肠癌SW480细胞凋亡的机制研究

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中草药 2021年第8期52卷 2365-2373页

作者：张梦何曼孙强陈莉曾沙赵晖杨寒刘茂伦任珊徐海波成都中医药大学药学院药理系四川成都611137

目的研究熊果酸通过经典Hedgehog信号通路影响人结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法通过显微镜观察熊果酸对SW480细胞形态的影响;采用MTT比色法检测熊果酸对细胞活力的影响;细胞划痕实验检测熊果酸对细胞迁移的影响;Hoech... 详细信息

目的研究熊果酸通过经典Hedgehog信号通路影响人结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法通过显微镜观察熊果酸对SW480细胞形态的影响;采用MTT比色法检测熊果酸对细胞活力的影响;细胞划痕实验检测熊果酸对细胞迁移的影响;Hoechest/PI染色法观察熊果酸对细胞凋亡的影响;荧光探针法检测熊果酸对细胞线粒体膜电位的影响;Caspase活性检测试剂盒检测熊果酸对细胞凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9的影响;蛋白免疫印迹法检测Hedgehog信号通路相关蛋白SHh、Gli1、Ptch1、Smo、c-Myc、Su Fu及细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平。结果SW480细胞经熊果酸给药后形态发生改变;细胞迁移能力显著下降;线粒体膜电位降低;细胞核出现致密浓染;Caspase-3、Caspase-9活性升高;SW480细胞发生凋亡;Hedgehog信号通路相关蛋白Su Fu的表达水平升高,SHh、Gli1、Ptch1、Smo、c-Myc的表达水平下降;细胞凋亡相关蛋白Bax的表达水平升高,Bcl-2的表达水平下降。结论熊果酸对SW480细胞的生长、增殖具有抑制作用,通过抑制Hedgehog信号通路的激活促进SW480细胞凋亡。

关键词：熊果酸 Hedgehog信号通路人结直肠癌SW480细胞细胞增殖细胞凋亡

基于Hippo信号通路的野黄芩苷抗结直肠癌HCT116细胞的研究

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天然产物研究与开发 2023年第1期35卷 22-32页

作者：杨寒任珊刘茂伦赵晖陶秋唐顺明天琪徐海波成都中医药大学药学院药理系西南特色中药资源国家重点实验室成都611137

本文旨在探究野黄芩苷(scutellarin,SCU)对人结直肠癌HCT116细胞的作用及机制。不同浓度SCU处理人结直肠癌HCT116细胞,采用显微镜观察法、MTT法、平板克隆形成试验、细胞划痕试验、Hoechst 33342/PI双染法、流式细胞术、qRT-PCR以及West... 详细信息

本文旨在探究野黄芩苷(scutellarin,SCU)对人结直肠癌HCT116细胞的作用及机制。不同浓度SCU处理人结直肠癌HCT116细胞,采用显微镜观察法、MTT法、平板克隆形成试验、细胞划痕试验、Hoechst 33342/PI双染法、流式细胞术、qRT-PCR以及Western blot等多种手段进行检测。结果显示,SCU能明显改变HCT116细胞形态,降低细胞活力;抑制HCT116细胞克隆和迁移(P<0.01);诱导细胞核致密浓染,促进细胞凋亡,使细胞凋亡率显著增加(P<0.05或P<0.01)。机制研究结果表明,SCU能显著上调caspase-9、caspase-3的mRNA表达水平(P<0.01),下调Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平(P<0.01),上调Bax的mRNA和蛋白表达水平(P<0.01)。此外,SCU能明显升高MST1、LATS1的mRNA和蛋白表达量(P<0.05或P<0.01),升高p-YAP(Ser127)的蛋白表达量(P<0.05或P<0.01),降低YAP1、TAZ和下游靶点c-Myc的mRNA和蛋白表达量(P<0.05或P<0.01)。综上所述,SCU能通过调节Hippo信号通路的活性,抑制HCT116细胞的增殖和迁移,并诱导细胞凋亡,从而发挥抗结直肠癌的作用。

关键词：野黄芩苷结直肠癌增殖迁移凋亡 Hippo信号通路

白藜芦醇通过调控Notch信号通路诱导结直肠癌HCT116细胞凋亡的研究

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中药药理与临床 2023年第1期39卷 37-43页

作者：任珊杨寒刘茂伦赵晖陶秋唐顺明天琪徐海波西南特色中药资源国家重点实验室成都中医药大学药学院药理系成都611137

目的:基于Notch信号通路探究白藜芦醇抑制人结直肠癌HCT116细胞增殖和诱导凋亡的作用和机制。方法:MTT法检测白藜芦醇对HCT116细胞增殖的影响;显微镜观察白藜芦醇对HCT116细胞形态的影响;细胞划痕实验检测白藜芦醇对HCT116细胞迁移能力... 详细信息

目的:基于Notch信号通路探究白藜芦醇抑制人结直肠癌HCT116细胞增殖和诱导凋亡的作用和机制。方法:MTT法检测白藜芦醇对HCT116细胞增殖的影响;显微镜观察白藜芦醇对HCT116细胞形态的影响;细胞划痕实验检测白藜芦醇对HCT116细胞迁移能力的影响;Hoechst 33342/PI染色法和流式细胞术检测白藜芦醇对HCT116细胞凋亡的影响;Real-time PCR法检测白藜芦醇对细胞凋亡相关因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl2)、Bcl2关联X蛋白(Bax)以及Notch信号通路相关因子缺口蛋白1(Notch1)、齿状蛋白1(Jagged1)、多毛增强子1(Hes1)、原癌基因蛋白(Cmyc)mRNA表达的影响;Western blot法检测白藜芦醇对细胞凋亡相关蛋白BCL-2、BAX以及Notch信号通路相关蛋白Notch1、Jagged1、缺口胞内域1(NICD1)、HES1、CMYC表达的影响。结果:与模型对照组相比,白藜芦醇80μg/mL~160μg/mL时间剂量依赖性地抑制HCT116细胞增殖(P<0.01),7.5、15、30μg/mL白藜芦醇干预改变HCT116细胞形态,明显降低其迁移能力(P<0.05或P<0.01),细胞Hoechst荧光强度从51.45±6.20增加到79.54±6.60(P<0.05),细胞总体凋亡率从(9.14±0.80)%增加到(64.74±3.36)%(P<0.01),此外促凋亡因子Bax mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.01),抑凋亡因子Bcl2 mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01),Notch信号通路中Notch1、Jagged1、NICD1、Hes1、Cmyc mRNA和蛋白表达显著下调,NICD1蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01)。结论:白藜芦醇能够抑制HCT116细胞增殖、迁移,并诱导细胞发生凋亡,其机制可能与抑制Notch信号通路激活相关。

关键词：白藜芦醇结直肠癌细胞凋亡 Notch信号通路凋亡相关因子

基于网络药理学探讨中药半枝莲抗结直肠癌的机制研究

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中药药理与临床 2021年第4期37卷 125-132页

作者：曾沙杨寒赵晖任姗刘茂伦陈莉何曼孙强孟宪丽徐海波西南特色中药资源国家重点实验室成都中医药大学药学院药理系成都611137

目的:通过网络药理学研究探讨半枝莲抗结直肠癌的作用机制,并通过实验验证相关靶点。方法:借助TCMSP数据库检索半枝莲的化学成分和相关靶点。通过蛋白质数据库Uniprot查询对应的基因名,运用Cytoscape3.6.0构建半枝莲的成分-靶点网络,基... 详细信息

目的:通过网络药理学研究探讨半枝莲抗结直肠癌的作用机制,并通过实验验证相关靶点。方法:借助TCMSP数据库检索半枝莲的化学成分和相关靶点。通过蛋白质数据库Uniprot查询对应的基因名,运用Cytoscape3.6.0构建半枝莲的成分-靶点网络,基于KEGG信号通路和GO富集分析,预测半枝莲抗结直肠癌的作用机制。选取结肠癌细胞HCT116进行MTT、划痕、Transwell以及蛋白免疫印迹法验证半枝莲抗结直肠癌的作用机制。结果:检索出半枝莲化学成分主要包括黄芩苷、黄芩黄酮以及槲皮素等;筛选出关键靶基因23个,涉及到Akt1、Ccnd1、Myc、Il-6基因等;通过GO富集分析以及KEGG通路富集筛选得到356条信号通路。MTT、划痕以及Transwell试验表明半枝莲可以明显抑制结直肠癌细胞HCT116的增殖、迁移和侵袭,蛋白免疫印迹试验验证了半枝莲可以下调癌症相关蛋白C-MYC、CCND1的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:通过网络药理学预测并通过实验验证半枝莲可能通过CCND1、MYC相关靶点等发挥抗结直肠癌的作用,揭示了半枝莲抗结直肠癌具有多成分、多靶点和多通路的特点。

关键词：半枝莲网络药理学结直肠癌靶点作用机制

吴茱萸碱通过调控Hedgehog信号通路诱导结直肠癌HCT-116细胞凋亡的研究

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中药药理与临床 2022年第1期38卷 71-77页

作者：孙强刘茂伦杨寒任珊赵晖明天琪唐顺陶秋周丽娟徐海波西南特色中药资源国家重点实验室成都中医药大学药学院药理系成都611137 四川省中医药科学院成都610041

目的:基于Hedgehog信号通路研究吴茱萸碱抑制人结直肠癌HCT-116细胞增殖和诱导凋亡的作用及机制。方法:采用MTT法检测吴茱萸碱对HCT-116细胞和人正常结肠上皮NCM-460细胞增殖的影响;显微镜观察吴茱萸碱对HCT-116细胞形态的影响;结晶紫... 详细信息

目的:基于Hedgehog信号通路研究吴茱萸碱抑制人结直肠癌HCT-116细胞增殖和诱导凋亡的作用及机制。方法:采用MTT法检测吴茱萸碱对HCT-116细胞和人正常结肠上皮NCM-460细胞增殖的影响;显微镜观察吴茱萸碱对HCT-116细胞形态的影响;结晶紫染色考察吴茱萸碱对HCT-116细胞克隆形成能力的影响;细胞划痕试验检测吴茱萸碱对细胞水平迁移的影响;Hoechest33324/PI染色观察吴茱萸碱对HCT-116细胞凋亡的影响;试剂盒检测吴茱萸碱对HCT-116细胞凋亡相关因子Caspase-9和Caspase-3活性的影响;蛋白免疫印迹试验(Western blotting)检测吴茱萸碱对细胞凋亡相关蛋白BAX、BCL-2、细胞周期相关蛋白Cyclin D1以及Hedgehog信号通路相关蛋白SHH、Gli1、SMO、c-Myc表达的影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测吴茱萸碱对细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Cyclin D1以及Hedgehog信号通路相关因子Shh、Gli1、Smo、c-Myc mRNA表达的影响。结果:吴茱萸碱抑制HCT-116细胞的增殖且在高剂量和长时间给药情况下对人正常结肠上皮NCM-460细胞产生一定的抑制效应。此外,HCT-116细胞经吴茱萸碱5、10、20μmol/L干预后形态发生改变,细胞水平迁移能力和克隆形成能力显著下降,染色质固缩,细胞核呈致密浓染,Caspase-9和Caspase-3活性升高(P<0.01);吴茱萸碱10、20μmol/L作用HCT-116细胞48 h后,Bax mRNA和蛋白表达随吴茱萸碱浓度增高而上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01);吴茱萸10、20μmol/L碱诱导了周期调节因子Cyclin D1 mRNA和蛋白的下调(P<0.01);Hedgehog信号通路中的关键因子Shh、Gli1、Smo、c-Myc mRNA和蛋白表达也在吴茱萸碱干预后显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论:吴茱萸碱抑制HCT-116细胞的生长、增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能涉及抑制Hedgehog信号通路的激活。

关键词：吴茱萸碱结直肠癌细胞增殖细胞迁移细胞凋亡

基于非经典Hedgehog信号通路的熊果酸抗结直肠癌的体外研究

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中药与临床 2022年第3期13卷 36-40页

作者：陈莉刘茂伦杨寒任珊赵晖徐海波西南特色中药资源国家重点实验室成都中医药大学药学院药理系四川成都611137

目的:研究熊果酸对SMO基因沉默的人结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞HCT-116^(hSMO-)增殖、迁移的影响,并揭示熊果酸基于非经典Hedgehog信号通路的抗CRC机制。方法:以SMO基因沉默的非经典Hedgehog信号通路活化的CRC细胞HCT-116^(hSM... 详细信息

目的:研究熊果酸对SMO基因沉默的人结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞HCT-116^(hSMO-)增殖、迁移的影响,并揭示熊果酸基于非经典Hedgehog信号通路的抗CRC机制。方法:以SMO基因沉默的非经典Hedgehog信号通路活化的CRC细胞HCT-116^(hSMO-)为模型,用MTT法检测熊果酸对HCT-116^(hSMO-)细胞增殖的影响;用划痕实验研究熊果酸对HCT-116^(hSMO-)细胞迁移的影响;用qRT-PCR检测熊果酸对HCT-116^(hSMO-)细胞中非经典Hedgehog信号通路相关基因c-Myc、GLI1、SHH、SUFU mRNA水平的影响;用Western Blot检测熊果酸对HCT-116^(hSMO-)细胞中非经典Hedgehog信号通路相关蛋白c-Myc、GLI1、SHH、SUFU表达的影响。结果:熊果酸显著抑制HCT-116^(hSMO-)细胞的增殖和迁移,降低细胞中c-Myc、GLI1、SHH mRNA水平而升高SUFU mRNA水平,并抑制细胞中c-Myc、GLI1、SHH蛋白表达而增强SUFU蛋白表达。结论:熊果酸具有良好的体外抗CRC作用,其机制在于熊果酸能够抑制非经典Hedgehog信号通路活性。

关键词：熊果酸结直肠癌非经典Hedgehog信号通路