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Construction and identification of Fas-targeting siRNA-expressing plasmid

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Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology) 2005年第7期6卷 673-677页

作者：刘苏虎张王刚张镁朱青田玮 Key Laboratory of Environment and Genes Related to Diseases of Ministry of Education Department of Clinical Hematology Second HospitalXi'an Jiaotong University Xi'an 710004 China Department of Pathology Second Hospital Xi'an Jiaotong University Xi'an 710004 China

Objective: To study the therapeutic potential of Fas inhibition in different diseases, a Fas-targeting siRNA (small interfering)-expressing plasmid was constructed. Methods: The U6 promoter cassette and siFas (small interfering RNA that inhibit Fas expression) template sequence were obtained by PCR method. They were cloned into modified pcDNA3.1. The resultant plasmid pU6-siFas was transfected into P815 cells with lipofectin2000 and selected under G-418-containing culture medium. Fas inhibition in stably transfected cells was detected by immunocytochemistry. Results: The plasmid pU6-siFas efficiently reduced the expression of Fas and conferred G-418 resistance in P815 cells. Conclusion: The successful construction of the siRNA expressing plasmid will facilitate the application of RNA interference technique and lay the foundation for further study of Fas inhibition in the treatment of different diseases such as aplastic anemia and acute liver failure.

关键词： RNA interference Fas protein Plasmid Vector construction

Fas靶向RNA干扰质粒载体的构建及生物活性鉴定

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西安交通大学学报（医学版） 2005年第2期26卷 115-118,123页

作者：刘苏虎张王刚张镁朱青田玮孙静昕西安交通大学第二医院血液科陕西西安710004 西安交通大学第二医院病理科陕西西安710004

目的　构建Fas靶向的RNA干扰质粒载体,为探讨抑制Fas表达在急性再生障碍性贫血治疗中的意义奠定基础。方法　PCR法获得U6启动子序列以及产生siRNA的相应DNA模板序列,将其克隆入改造后的pcDNA3.1,获得RNA干扰载体pU6 siFas。脂质体法将pU... 详细信息

目的　构建Fas靶向的RNA干扰质粒载体,为探讨抑制Fas表达在急性再生障碍性贫血治疗中的意义奠定基础。方法　PCR法获得U6启动子序列以及产生siRNA的相应DNA模板序列,将其克隆入改造后的pcDNA3.1,获得RNA干扰载体pU6 siFas。脂质体法将pU6 siFas导入P815 细胞,免疫组化法检测对P815 细胞Fas表达的抑制情况。结果　所构建的载体pU6 siFas能够干扰P815细胞中Fas的表达,并且具有新霉素抗性,能够用G 418 筛选稳定转化的细胞株。结论　成功构建了抑制小鼠Fas表达的RNA干扰质粒载体。

关键词： Fas蛋白 RNA干扰质粒载体构建

Fas靶向RNA干扰逆转录病毒载体的构建及生物活性鉴定

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中国实验血液学杂志 2005年第5期13卷 827-831页

作者：刘苏虎张王刚张镁朱青田玮西安交通大学第二医院血液科西安710004 西安交通大学第二医院病理科西安710004

本研究构建Fas靶向RNA干扰逆转录病毒载体,为探讨抑制Fas表达在再生障碍性贫血等疾病治疗中的意义、以及为促进RNA干扰技术的广泛开展奠定基础。用PCR方法获得小鼠U6+27启动子盒及产生siRNA的相应DNA模板,然后连同增强绿色荧光蛋白(EGFP... 详细信息

本研究构建Fas靶向RNA干扰逆转录病毒载体,为探讨抑制Fas表达在再生障碍性贫血等疾病治疗中的意义、以及为促进RNA干扰技术的广泛开展奠定基础。用PCR方法获得小鼠U6+27启动子盒及产生siRNA的相应DNA模板,然后连同增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆入商业化逆转录病毒载体pLXSN,以获得逆转录病毒载体穿梭质粒pLXSN/EGFPsiFas。包装、滴定重组逆转录病毒载体,并感染P815细胞,检测绿色荧光蛋白表达情况及对细胞Fas表达的抑制情况。结果表明:构建的逆转录病毒载体pLXSN/EGFPsiFas能够有效被包装并感染靶细胞,在靶细胞内可同时表达siRNA、绿色荧光蛋白以及新霉素抗性。结论:成功构建了抑制小鼠Fas表达的RNA干扰逆转录病毒载体。

关键词： RNA干扰 Fas 再生障碍性贫血逆转录病毒载体绿色荧光蛋白

S100A4蛋白在非小细胞肺癌中的表达与侵袭和转移的关系

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癌症 2006年第9期25卷 1134-1137页

作者：陈香丽张王刚陈小燕孙忠民刘苏虎西安交通大学第二附属医院血液内科陕西西安710004 西安交通大学第一附属医院呼吸内科陕西西安710061

背景与目的:实验证明S100A4在多种恶性肿瘤细胞中高表达,它可能在恶性肿瘤细胞的侵袭和转移等过程中发挥重要作用。本研究探讨S100A4在人非小细胞肺癌中的表达及其与侵袭和转移的关系。方法:采用免疫组化SP法检测41例非小细胞肺癌及6例... 详细信息

背景与目的:实验证明S100A4在多种恶性肿瘤细胞中高表达,它可能在恶性肿瘤细胞的侵袭和转移等过程中发挥重要作用。本研究探讨S100A4在人非小细胞肺癌中的表达及其与侵袭和转移的关系。方法:采用免疫组化SP法检测41例非小细胞肺癌及6例正常肺组织中S100A4蛋白的表达水平。结果:S100A4在非小细胞肺癌中的阳性率(70.7%)显著高于正常肺组织(16.7%)(P0.05)。S100A4的阳性率在有淋巴结转移的非小细胞肺癌中(90.0%)明显高于无淋巴结转移组(52.4%)(P0.05)。结论:S100A4在非小细胞肺癌中的表达上调,且与淋巴结转移、TNM分期和肿瘤大小密切相关,提示S100A4与非小细胞肺癌的侵袭和转移有关。

关键词：肺肿瘤肿瘤转移免疫组化转移相关蛋白(S100A4)

短干扰RNA对人β淀粉样前体蛋白裂解酶基因表达的影响(英文)

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四川大学学报（医学版） 2006年第6期37卷 821-824页

作者：董炜疆冯改丰宫惠琳刘苏虎胡海涛西安交通大学医学院人体解剖学与组织胚胎学系西安710061 西安变通大学医学院第一附属医院病理科西安交通大学医学院第二附属医院血液科

目的探讨β淀粉样前体蛋白裂解酶(β-site APP cleaving enzyme,BACE)的短干扰RNA(short interfering RNAs,siRNA)对BACE在神经母细胞瘤细胞中的表达的影响,为阿尔茨海默病(AD)的治疗提供新的手段。方法采用PCR分别扩增增强型绿色荧光蛋... 详细信息

目的探讨β淀粉样前体蛋白裂解酶(β-site APP cleaving enzyme,BACE)的短干扰RNA(short interfering RNAs,siRNA)对BACE在神经母细胞瘤细胞中的表达的影响,为阿尔茨海默病(AD)的治疗提供新的手段。方法采用PCR分别扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)、U6启动子和靶向BACE的特异性小干扰RNA(siBACE),随后将相应的序列片段克隆入真核表达载体pLXSN,通过限制性内切酶和测序对该重组表达载体pLXSN/ECFP-U6-siBACE进行鉴定;制备稳定高表达BACE基因的神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株,用荧光显微镜和免疫组织化学的方法观察siRNA对BACE表达的影响。结果限制性内切酶酶切和测序结果均表明成功构建了靶向BACE的短干扰RNA的逆转录病毒载体pLXSN/EGFP-U6-siBACE;并能特异性地抑制BACE在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株中的表达。结论成功构建了针对BACE的短干扰RNA的逆转录病毒表达载体pLXSN/EGFP-U6-siBACE,并能有效抑制哺乳动物BACE基因的表达,该研究将为利用RNA干扰技术作为治疗AD的新方法提供重要的实验基础。

关键词： RNA干扰 BACE 基因阿尔茨海默病

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小干扰RNA的设计及原理

医学分子生物学杂志 2005年第3期2卷 240-242页

作者：张镁刘苏虎西安交通大学第二医院病理科西安市710004 西安交通大学第二医院血液科西安市710004

RNA干扰技术在人类基因功能研究、药物靶点鉴定等方面备受青睐,并且具有潜在的临床应用价值。但只有设计合理的小干扰RNA (siRNA)才能高效、特异地抑制靶基因表达。本文总结了siRNA序列的一般特点以及设计siRNA的方法和相应原理,并介绍... 详细信息

RNA干扰技术在人类基因功能研究、药物靶点鉴定等方面备受青睐,并且具有潜在的临床应用价值。但只有设计合理的小干扰RNA (siRNA)才能高效、特异地抑制靶基因表达。本文总结了siRNA序列的一般特点以及设计siRNA的方法和相应原理,并介绍了如何利用实验手段,验证RNA干扰的有效性及特异性。从而促进RNA干扰技术的广泛开展。

关键词： RNA干扰小干扰RNA 序列设计

在哺乳动物细胞中用于表达干扰RNA的启动子

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医学分子生物学杂志 2004年第3期1卷 175-177页

作者：刘苏虎张镁张王刚西安交通大学第二医院血液科西安市，710004 西安交通大学第二医院病理科西安市，710004

RNA干扰是由双链RNA诱导的特异性转录后基因表达沉默。目前用于在哺乳动物细胞中表达干扰RNA的启动子分为RNA聚合酶Ⅲ类启动子(polⅢ)及RNA聚合酶Ⅱ类启动子(polⅡ)。不同的启动子及经过不同方法改造后的启动子能满足不同研究目的的需要... 详细信息

RNA干扰是由双链RNA诱导的特异性转录后基因表达沉默。目前用于在哺乳动物细胞中表达干扰RNA的启动子分为RNA聚合酶Ⅲ类启动子(polⅢ)及RNA聚合酶Ⅱ类启动子(polⅡ)。不同的启动子及经过不同方法改造后的启动子能满足不同研究目的的需要,从而极大地拓展了RNA干扰的应用范围。

关键词： RNA干扰启动子哺乳动物细胞

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肾肉瘤样癌1例

诊断病理学杂志 2005年第5期12卷 324-324,i0001页

作者：张镁刘苏虎赵世平王康敏西安交通大学第二医院病理科西安710004 西安交通大学第二医院血液科西安710004

患者男性,56岁.间断性左上腹痛2个月.B超示左肾中极有2个回声结节.静脉肾盂造影示左肾软组织包块.术中见肾中极有一5 cm×6 cm×5 cm肿块,与周围分界清晰,遂行左肾切除术.……

关键词：肾肿瘤癌肉瘤样预后

吲哚胺-2,3-二氧化酶在肿瘤免疫中的作用的探讨

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现代肿瘤医学 2005年第6期13卷 866-868页

作者：孙静昕刘苏虎孙呈祥张王刚西安交通大学第二医院血液科陕西西安710004 陕西省肿瘤医院陕西西安710061

吲哚胺-2,3-二氧化酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,简称IDO)是一种含铁血红素单体蛋白,也是一种黄素依赖酶,可以使色氨酸分解代谢.已有研究表明吲哚胺-2,3-二氧化酶与免疫排斥反应、病原体感染、中枢神经系统疾病(如抑郁)、硬皮病-筋膜... 详细信息

吲哚胺-2,3-二氧化酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,简称IDO)是一种含铁血红素单体蛋白,也是一种黄素依赖酶,可以使色氨酸分解代谢.已有研究表明吲哚胺-2,3-二氧化酶与免疫排斥反应、病原体感染、中枢神经系统疾病(如抑郁)、硬皮病-筋膜炎-嗜酸粒细胞增多综合征以及自身免疫病中的消耗症状等有关.近年来发现该物质在肿瘤免疫过程中也有着重要的作用.本文就其在肿瘤免疫中的作用做一综述.

关键词：吲哚胺-2,3-二氧化酶 1-MT 肿瘤免疫