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作者：刘苏健山西医科大学

学位级别：硕士

目的构建大鼠Pik3cb短发卡状RNA（shRNA）真核表达载体,确定其转染效率;建立SD大鼠颈静脉分支颈动脉血管移植模型,对建立方法进行改进,并对新生内膜细胞来源进行研究;观察双位点shRNA靶向沉默Pik3cb对PI3K-Akt-mTOR信号通路的影响和其... 详细信息

目的构建大鼠Pik3cb短发卡状RNA（shRNA）真核表达载体,确定其转染效率;建立SD大鼠颈静脉分支颈动脉血管移植模型,对建立方法进行改进,并对新生内膜细胞来源进行研究;观察双位点shRNA靶向沉默Pik3cb对PI3K-Akt-mTOR信号通路的影响和其对血管移植术后再狭窄防治作用。方法根据GenBank数据库提供的Pik3cb基因核苷酸序列,按照shRNA设计原则,设计并合成6条shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并克隆导入载体pGenesil-1,进行酶切鉴定和测序,经预实验后挑选出2条Pik3cb shRNA真核表达载体,分别命名为pU6-Pik3cb-shRNA-1和pU6-Pik3cb-shRNA-2。建立大鼠颈静脉分支颈动脉间置模型,并对建立方法进行改进,术后1d、3d、7d、14d、28d分别取材,组织切片行α-SM-actin和CD-34免疫组化分析新生内膜细胞来源。采用大鼠颈静脉分支颈动脉间置模型,通过PluronicF-127质粒缓释系统在血管吻合完成后进行局部RNA干扰。分6组:A组:正常对照组:25%Pluronic F-127组;B组:pU6-Pik3cb-shRNA-1组;C组:pU6-Pik3cb-shRNA-2组;D组:1/2（shRNA 1+shRNA 2）组;E组:pGenesil-1质粒错配shRNA组;F组:wortmannin阳性对照组。根据实验分组的不同,分别将200μl含有50μg shRNA质粒的Pluronic F-127凝胶,或50μg wortmannin,或空白Pluronic F-127凝胶均匀地涂抹在移植桥血管的周围。一组局部应用pGenesil-1质粒错配shRNA,于术后1d、2d、3d取材,快速冰冻观察转染效果。一组术后3d取材,实时荧光定量PCR和Western blot测定PI3K p110β亚单位mRNA的表达和其下游磷酸化Akt、mTOR和PCNA蛋白表达。另设1d、3d、7d、14d、28d五个观察点,每组30只SD大鼠,免疫组化检测磷酸化Akt308、PCNA表达的高低,TUNEL法检测凋亡细胞的数目;HE染色观察内膜厚度,新生内膜面积。结果成功构建2条大鼠Pik3cb shRNA真核表达载体。转染移植静脉,中膜平滑肌细胞（smooth muscle cell,SMC）转染效率达60%,内皮细胞转染效率达90%以上。成功建立大鼠颈静脉分支颈动脉间置模型并对手术方法进行了改进,通过α-SM-actin和CD-34免疫组化结果推断静脉桥血管新生内膜细胞主要来源于桥血管本身细胞或循环祖细胞。 pU6-Pik3cb-shRNA和wortmannin转染后72 h Pik3cb mRNA和其下游效应分子磷酸化Akt308、磷酸化Akt473、磷酸化mTOR和PCNA蛋白表达均明显下调;转染组和阳性对照组mRNA相对表达量与正常对照组相比分别下降了70.3%、51.8%、59.9%和74.8%;转染组和阳性对照组Phospho-Akt（Thr308）蛋白表达量与正常对照组相比分别下降了88%、80.4%、85.6%和90.5%;转染组和阳性对照组Phospho-Akt（Ser473）蛋白表达量与正常对照组相比分别下降了77.8%、70.8%、74.7%和84.1%;转染组和阳性对照组Phospho-mTOR（Ser2448）蛋白表达量与正常对照组相比分别下降了73.4%、62%、70.5%和80.6%;转染组和阳性对照组PCNA蛋白表达量与正常对照组相比分别下降了61.3%、40.7%、53.3%和76.3%;各组正常对照和阴性对照相比均无统计学意义（P＞0.05）。免疫组化磷酸化Akt308显示各时间点正常对照组和错配质粒组内膜和中膜内侧阳性细胞较多;转染组和阳性对照组内膜和中膜内侧阳性细胞明显减少,在7d和14d减少最明显,与正常对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。14 d时转染组和阳性对照组阳性面积百分比分别为0.6%、0.81%、0.73%和0.53%,正常对照组和错配质粒组阳性面积百分比为1.72%和1.66%;28 d时转染组和阳性对照组阳性面积百分比分别为0.72%、0.78%、0.77%和1.08%,正常对照组和错配质粒组阳性百分比为2.19%和2.01%;各时间点正常对照组和错配质粒组相比差异均无统计学意义（P＞0.05）。免疫组化PCNA显示各时间点正常对照组和错配质粒组内膜和中膜内侧阳性细胞较多;转染组和阳性对照组内膜和中膜内侧阳性细胞明显减少,与转染组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。28 d时转染组和阳性对照组阳性面积百分比分别为0.64%、0.83%、0.72%和1.24%,正常对照组和阴性对照组阳性百分比为2.31%和2.53%;各时间点正常对照组和错配质粒组相

关键词：血管移植新生内膜再狭窄平滑肌细胞增殖凋亡 RNAi shRNA 载体构建/质粒 Pik3cb PI3K Akt mTOR

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原发性腹膜后肿瘤的诊断与治疗

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第二军医大学学报 2009年第5期30卷 545-548页

作者：夏绍友李荣刘苏健解放军总医院普通外科北京100853 北京航天总医院普通外科北京100076

目的:探讨原发性腹膜后肿瘤(primary retroperitoneal tumor,PRPT)的诊治经验。方法:回顾性分析2000年1月至2008年6月315例PRPT患者的临床资料和随访结果,总结临床诊治经验。结果:315例原发性腹膜后肿瘤良、恶性之比0.55:1。手术治疗294... 详细信息

目的:探讨原发性腹膜后肿瘤(primary retroperitoneal tumor,PRPT)的诊治经验。方法:回顾性分析2000年1月至2008年6月315例PRPT患者的临床资料和随访结果,总结临床诊治经验。结果:315例原发性腹膜后肿瘤良、恶性之比0.55:1。手术治疗294例,完整切除161例,联合切除69例,部分姑息切除64例;21例未行手术。恶性肿瘤完整切除患者预后优于部分切除(P<0.05)。结论:影像学检查可有效诊断PRPT;手术完整切除肿瘤是PRPT治疗的关键,再次手术是复发性PRPT的有效治疗手段。

关键词：腹膜后肿瘤外科手术复发预后

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肺癌基因治疗的研究进展

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山东医药 2008年第19期48卷 151-152页

作者：刘苏健北京航天总医院北京100076

基因治疗作为一种高效、特异性、靶向性强的治疗方法,越来越受到广大医学者的重视[1].随着分子生物学技术的发展和完善,以及对肺癌发病机制等认识日益深化,许多针对靶基因的研究已进入临床实验阶段,现将肺癌基因治疗的研究进展作一综述.

关键词：肺肿瘤基因基因治疗进展

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糖尿病足溃疡的综合治疗73例临床观察

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中国实用内科杂志 2015年第S1期35卷 25-27页

作者：王斌丁明超赵勇王鸿刘苏健迟国庆航天中心医院北京100049

目的总结糖尿病足溃疡的治疗方法。方法选择2007年8月至2014年2月航天中心医院73例糖尿病足溃疡患者在控制血糖、抗感染、改善循环、营养神经等基础治疗情况下,进行介入手术改善下肢动脉供血,并积极的创面处理。结果糖尿病足溃疡患者Wag... 详细信息

目的总结糖尿病足溃疡的治疗方法。方法选择2007年8月至2014年2月航天中心医院73例糖尿病足溃疡患者在控制血糖、抗感染、改善循环、营养神经等基础治疗情况下,进行介入手术改善下肢动脉供血,并积极的创面处理。结果糖尿病足溃疡患者WagnerⅠ级26例及Ⅱ级19例全部愈合;Ⅲ级共15例有12例愈合,3例好转;Ⅳ级共8例有3例愈合,2例好转,2例截趾,1例自动出院;V级共5例有3例最终截肢,术后恢复良好,1例因感染加重而死亡,1例自动出院。总有效率为89.0%,治愈率为82.2%,截肢率为6.8%,病死率1.4%。结论全身综合治疗为基础,正确判断并处理糖尿病足创面,及时给予下肢动脉循环重建,可以减少糖尿病足的致残率,降低截肢率。

关键词：糖尿病足溃疡经皮腔内血管成形术

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靶向Pik3cb shRNA表达载体的构建及其对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

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中华实验外科杂志 2007年第6期24卷 712-714页

作者：刘苏健马丽邓勇志孙宗全陈家军苏刚山西医科大学第二医院心胸外科太原030001 华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科

目的构建大鼠Pik3cb shRNA真核表达载体,并检测其下调大鼠血管平滑肌细胞Pik3cb mRNA表达的效应。方法根据Genbank中大鼠Pik3cb序列设计并合成两条shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并克隆导入载体pGenesil-1,酶切鉴定和测序无误后分别命... 详细信息

目的构建大鼠Pik3cb shRNA真核表达载体,并检测其下调大鼠血管平滑肌细胞Pik3cb mRNA表达的效应。方法根据Genbank中大鼠Pik3cb序列设计并合成两条shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并克隆导入载体pGenesil-1,酶切鉴定和测序无误后分别命名为pU6- Pik3cb-shRNA-1和pU6-Pik3cb-shRNA-2。通过脂质体转染大鼠胸主动脉平滑肌细胞,确定转染效率;通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测Pik3cb mRNA的表达;TUNEL法检测细胞凋亡。结果pU6-Pik3cb-shRNA-1和pU6-Pik3cb-shRNA-2经测序和PCR扩增与原序列相同,转染大鼠平滑肌细胞48 h时转染率为15.7%,荧光定量PCR结果显示转染组Pik3cb mRNA表达明显减少,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05),TUNEL结果显示转染组凋亡细胞明显增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建重组真核表达质粒pU6-Pik3cb-shRNA,并有效下调大鼠胸主动脉平滑肌细胞Pik3cb mRNA的表达,为靶向Pik3cb防治移植血管再狭窄的基因治疗奠定了基础。

关键词： RNA干扰质粒平滑肌

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大鼠Pik3cb短发卡状RNA对平滑肌细胞增殖的影响

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南京医科大学学报（自然科学版） 2008年第10期28卷 1234-1239页

作者：刘苏健刘宏赵京申庆民常程邓勇志马捷北京航天总医院胸外科北京100076 山西医科大学第二医院心胸外科山西太原030001

目的:构建大鼠Pik3cb短发卡状RNA(shRNA)真核表达载体,为利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术从转录后水平抑制血管移植术后移植静脉再狭窄的研究做准备。方法:经预实验设计并合成6条shRNA寡核苷酸片段,酶切鉴定和测序正确后挑选2... 详细信息

目的:构建大鼠Pik3cb短发卡状RNA(shRNA)真核表达载体,为利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术从转录后水平抑制血管移植术后移植静脉再狭窄的研究做准备。方法:经预实验设计并合成6条shRNA寡核苷酸片段,酶切鉴定和测序正确后挑选2条质粒转染入大鼠胸主动脉平滑肌细胞内,48、72h用荧光显微镜观察转染效率,Western blot检测Phospho-Akt(Ser473)蛋白的表达,流式细胞仪分别在24、48、72、96h检测细胞凋亡数目。结果:构建的两条大鼠Pik3cbshRNA经限制性内切酶酶切和DNA测序正确后分别命名为pU6-Pik3cb-shRNA-1和pU6-Pik3cb-shRNA-2,转染平滑肌细胞48h和72h转染率分别为15.7%和10.1%;Westernblot结果显示转染组Phospho-Akt(Ser473)蛋白表达明显下降;流式结果表明pU6-Pik3cb-shRNA-1和pU6-Pik3cb-shRNA-2组凋亡细胞数目明显增加,与对照组相比有统计学意义(P<0.05),各时间点错配质粒组与正常对照组相比差异无统计学意义。结论:成功构建了2条大鼠Pik3cbshRNA真核表达载体,有效促进凋亡,抑制平滑肌细胞增殖,为靶向Pik3cb的RNAi防治血管再狭窄奠定了基础。

关键词：载体构建 Pik3cb shRNA 血管再狭窄 RNAi

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经导管取栓及溶栓治疗急性下肢深静脉血栓

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中国介入影像与治疗学 2015年第12期12卷 719-722页

作者：王斌丁明超刘苏健王鸿迟国庆航天中心医院外周血管介入科北京100049

目的探讨经导管取栓及溶栓技术治疗急性下肢深静脉血栓的临床价值及疗效。方法收集急性下肢深静脉血栓患者117例,其中中央型血栓71例,混合型血栓46例。在下腔静脉滤器保护下,对患者行经大腔导管取栓及溶栓导管溶栓治疗,对合并Cockett综... 详细信息

目的探讨经导管取栓及溶栓技术治疗急性下肢深静脉血栓的临床价值及疗效。方法收集急性下肢深静脉血栓患者117例,其中中央型血栓71例,混合型血栓46例。在下腔静脉滤器保护下,对患者行经大腔导管取栓及溶栓导管溶栓治疗,对合并Cockett综合征者行支架成形治疗。结果手术成功率100%,患肢肿胀、疼痛于术后当日即明显减轻,无肺栓塞发生。110例患者均成功随访12个月,总有效率97.27%(103/110)。结论经导管取栓及溶栓治疗急性下肢深静脉血栓安全、有效。

关键词：静脉血栓形成下肢血栓切除术血栓溶解疗法介入治疗

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适应知识创新工程需要深化图书馆期刊情报工作

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福建图书馆学刊（内刊） 2000年第1期 37-38页

作者：刘苏健中科院福建物构所图书馆福州350002

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血管外科手术切口感染病原菌及耐药性分析

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中华医院感染学杂志 2014年第17期24卷 4295-4297页

作者：刘苏健银彩霞丁明超王意忠航天中心医院外周血管介入科北京100049 解放军总医院麻醉手术中心北京100853

目的分析血管外科手术切口感染病原菌分布及耐药性,有效预防术后切口感染。方法回顾性调查分析2008年1月-2012年12月血管外科收治的各类手术患者635例,分析手术切口感染病原菌分布及耐药性,采用SPSS13.0软件进行统计分析。结果 635例手... 详细信息

目的分析血管外科手术切口感染病原菌分布及耐药性,有效预防术后切口感染。方法回顾性调查分析2008年1月-2012年12月血管外科收治的各类手术患者635例,分析手术切口感染病原菌分布及耐药性,采用SPSS13.0软件进行统计分析。结果 635例手术患者术后发生切口感染16例,感染率为2.52%;送检标本中共分离出病原菌27株,其中革兰阳性菌17株占62.96%,革兰阴性菌10株占37.04%;除对亚胺培南高度敏感外,革兰阳性菌和革兰阴性菌对常用抗菌药物均产生了一定的耐药性。结论通过术前纠正并发症、术中严格无菌操作、彻底冲洗切口、术后合理使用抗菌药物等干预措施,可有效降低血管外科手术切口感染的发生率。

关键词：血管外科切口感染病原菌耐药性

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DAO媒介：驱动未来社会算法化与自组织的元媒介

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新疆师范大学学报(哲学社会科学版) 2024年

作者：喻国明苏健威北京师范大学新闻传播学院北京师范大学传播创新与未来媒体实验平台

DAO媒介是以区块链算法等技术为基础，支持数字社群协同自治的媒介，具有区块链、智能合约与投票等功能特性和要素确权、技术信任、规则构架以及场景聚合等价值禀赋。对于数字生态显露的种种问题，“算法化”是重构数字生态、降解社会... 详细信息

DAO媒介是以区块链算法等技术为基础，支持数字社群协同自治的媒介，具有区块链、智能合约与投票等功能特性和要素确权、技术信任、规则构架以及场景聚合等价值禀赋。对于数字生态显露的种种问题，“算法化”是重构数字生态、降解社会系统复杂性的关键机制，而DAO媒介是支撑“自组织式”算法化的元媒介。DAO媒介与数字文明时代喷发的微粒个体、微资源、微价值、微需求、微场景等相匹配，能够更深度地匹配人的个性与自我，形成有效的趣缘连接，进而极大地释放数字文明的生产力。DAO媒介将深刻影响社会系统的构造，将微粒个体与相关社会要素“包裹”为闭环子系统，支持其准开放的系统边界、有效的异质性整合、可持续的规则重构、子系统与父级系统的持续分化和快速进化，等等。在数字文明时代，DAO媒介将使“重新部落化”的“地球村”变为现实，其驱动构筑的DAO社会将更加多元、更加富有创造力。

关键词： DAO 数字媒介算法自组织社会系统

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