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西方蜜蜂四个亚种酯酶同工酶型和苹果酸脱氢酶Ⅱ同工酶基因型的遗传差异

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动物学报 2002年第6期48卷 828-832页

作者：童富淡汪俏梅刘艳荷浙江大学动物科学学院杭州310029

The esterase (EST) and the malate dehydrogenase Ⅱ (MDHⅡ) isozymes in A. mellifera carpatica (C), A. mellifera ssp.(D), “Zhejiang Agricultural University No.1” A. mellifera ligustica (Ea) and A. mellifera carnica (K), and the genotypes of MDHⅡ isozymes in four subspecies of A. mellifera were analysed by IEF PAGE. The results indicate that the four subspecies of A. mellifera showed the same EST zymogram, while A. cerana showed a different EST zymogram, which suggests that the genotypes of EST isozymes in A. mellifera are different from those in A. cerana. The genotypes of the MDHⅡ isozymes in four subspecies of A. mellifera were aa, ab, ac, bb, bc and cc. The C and Ea subspecies exhibited high homozyosity, while D and K displayed high heterozyosity. The allele b appeared to be the highest frequency in C, while the allele c had the highest frequency in Ea. The frequencies of the alleles a, b and c in sub species D were very similar. The alleles a and c were common, while allele b was rare in sub species K. There were highly significant differences in genotype frequencies, allele frequencies, homozyosity and heterozyosity among these four subspecies.

关键词：西方蜜蜂亚种酯酶同工酶型苹果酸脱氢酶Ⅱ 同工酶基因型遗传差异 EST MDHⅡ

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转抗虫基因植物对蜜蜂的影响

昆虫知识 2001年第4期38卷 258-262页

作者：刘艳荷陈盛禄浙江大学动物科学学院杭州310029

苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因是广泛用于植物抗虫基因工程的两大类基因。Bt毒蛋白对蜜蜂没有明显毒害作用 ,但对草蛉、瓢虫等有益昆虫的繁殖、发育具有不良影响 ,而且在花粉中表达 ,因此转Bt基... 详细信息

苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因是广泛用于植物抗虫基因工程的两大类基因。Bt毒蛋白对蜜蜂没有明显毒害作用 ,但对草蛉、瓢虫等有益昆虫的繁殖、发育具有不良影响 ,而且在花粉中表达 ,因此转Bt基因植物对蜜蜂的影响有待于进一步研究。蛋白酶抑制剂浓度高时 ,对蜜蜂具有明显的毒害作用。随着基因工程技术的发展 ,蛋白酶抑制剂基因表达水平的提高 ,转基因植物必将对蜜蜂产生一些不良影响。蜜蜂仅取食植物的花蜜和花粉 ,可以采用不同的启动子 ,使抗虫基因只在害虫取食部位表达 ,而在花蜜和花粉中不表达 ,以确保既能抗虫。

关键词： Bt毒蛋白蛋白酶抑制剂蜜蜂转抗虫基因植物安全性

斜纹夜蛾核型多角体病毒不同分离株基因序列的同源性分析

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昆虫学报 2008年第8期51卷 817-823页

作者：刘艳荷方继朝江苏省农业科学院植物保护研究所

研究SpltMNPV不同分离株及SpltMNPV分离株与SpliNPV间基因序列的同源性,为SpltMNPV分离株的利用提供理论基础。根据已发表的斜纹夜蛾核型多角体病毒(SpltMNPV)中国株(Zh)基因组全序列(AF527603)和海灰翅夜蛾核型多角体病毒(SpliNPV)Not... 详细信息

研究SpltMNPV不同分离株及SpltMNPV分离株与SpliNPV间基因序列的同源性,为SpltMNPV分离株的利用提供理论基础。根据已发表的斜纹夜蛾核型多角体病毒(SpltMNPV)中国株(Zh)基因组全序列(AF527603)和海灰翅夜蛾核型多角体病毒(SpliNPV)NotI-D片段序列(AF527603)设计引物,PCR方法扩增得到SpltMNPV日本福冈株(Fu)、埃及株(Eg)和小笠原株(Og)的ORF39～ORF42和ORF119～ORF124编码区全序列。SpltMNPV不同分离株及SpltMNPV分离株与SpliNPV间基因序列的相似性比较,Zh株和Og株,Eg株、Fu株和SpliNPV的相似性高,而Zh株和Eg株、Fu株或SpliNPV,Og株和Eg株、Fu株或SpliNPV的相似性都比较低。亦即SpltMNPV3种基因型,B型和C型的同源性高,A型与B型或C型的同源性比较低,但A型与SpliNPV的同源性高;同一基因型内不同分离株(Eg株和Fu株)的同源性高。ETG分子进化分析表明Eg株、Fu株和SpliNPV处于一个分支,而Eg株、Fu株和SpliNPV与Zh株和Og株则处于不同的分支。因此推断Eg株和Fu株为SpliNPV的分离株,而Og株为SpltMNPV的分离株。

关键词：斜纹夜蛾核型多角体病毒分离株基因序列分析同源性系统发育

自然界斜纹夜蛾核型多角体病毒的基因型多态性(英文)

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昆虫学报 2013年第4期56卷 372-378页

作者：刘艳荷王利华方继朝江苏省农业科学院植物保护研究所南京210014 广东海洋大学农学院广东湛江524088

【目的】从基因组序列角度进一步揭示自然界斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus,SpltNPV)的基因型多态性。【方法】病毒克隆A5,F1,X3和X15分别以活体克隆法分离自SpltNPV埃及株、日本福冈株和日本小笠原株... 详细信息

【目的】从基因组序列角度进一步揭示自然界斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus,SpltNPV)的基因型多态性。【方法】病毒克隆A5,F1,X3和X15分别以活体克隆法分离自SpltNPV埃及株、日本福冈株和日本小笠原株。根据SpltNPV基因组全序列(GenBank登录号:AF325155)和海灰翅夜蛾核型多角体病毒(*** NPV,SpliNPV)部分基因序列(GenBank登录号:X99377,X99376和X98924)设计引物,PCR扩增获得A5,F1,X3和X15的多角体蛋白(polyhedrin,polh)基因和ORF18～ORF23序列。【结果】根据多角体蛋白基因序列,X3和X15属于SpltNPV型,而A5和F1属于SpliNPV型。将A5,F1,X3和X15的ORF18～ORF23与SpltNPV和SpliNPV相应的基因序列进行同源性比较。结果发现,F1与SpliNPV以及X3与SpltNPV的核苷酸序列相似性高,但X3的ORF20在172～558nt处缺失387bp。尽管依据多角体蛋白基因序列X15属于SpltNPV型,但对于ORF18～ORF23序列,X15与SpliNPV的相似性高于与SpltNPV的相似性。同样,A5属于SpliNPV型,ORF18～ORF20与SpliNPV相应的核苷酸序列相似性高,但ORF21与SpltNPV相应的核苷酸序列一致性为100%,特别是ORF22,SpltNPV的特有序列出现在A5的基因组中,而且与SpltNPV的ORF22一致性为100%;反过来,ORF23又与SpliNPV相应的核苷酸序列相似性高。【结论】所有这些都表明,SpltNPV在自然界不仅存在基因型多态性,而且即使属于同一基因型,它们的基因组序列也有显著差异。可利用SpltNPV在自然界的这种异质性筛选适宜防治斜纹夜蛾幼虫的株系。

关键词：斜纹夜蛾核型多角体病毒病毒克隆基因型基因组多态性

SEQUENCE ANALYSIS OF A NOVEL INSECT PHOSPHOGLYCERATEMUTASE GENE FROM THE CHINESE HONEYBEE, APIS CERANA

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Entomologia Sinica 2003年第4期10卷 237-244页

作者：李江红王敦安世恒刘艳荷张传溪浙江大学应用昆虫研究所

A clone inserted with 1 104 bp fragment containing a 765bp Open Reading Frame(ORF), encoding a putative 2,3-bisphosphoglycerate(2,3BPG) dependent Phosphoglycerate mutase(dPGAM) that catalyzes the transfer of a phosphate group from the C3 carbon atom to the C2 carbon atom of phosphoglycerate, was screened by mass sequencing from the cDNA library of the venom glands of Apis cerana. The deduced amino acid sequence shared high similarities (39%-88%)with the dPGAM of 7 other organisms, but the similarities with the iPGAM of 4 other organisms were low (10%-12%). Moreover, the alignment of Ac-PGAM with the dPGAMs from 7 other organisms showed that all the active site amino acid residues were conserved. This result shows that Ac-PGAM is a typical dPGAM. Thus, this is the second PGAM gene reported in Insecta. Furthermore, phylogenetic analysis showed that the evolutionary tree of PGAMs reflects the systematic relationship of species.

关键词： Sequence analysis phosphoglycerate mutase cDNA Apis cerana

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蜂毒溶血肽的研究进展

昆虫知识 2001年第6期38卷 410-413页

作者：刘艳荷陈盛禄张传溪浙江大学动物科学学院浙江大学应用昆虫研究所杭州310029 浙江大学应用昆虫研究所

蜂毒溶血肽 (melittin)是蜜蜂毒液的主要组分 ,由 2 6个氨基酸残基组成 ,具有两亲性和种的特异性。它的cDNA已经被克隆 ,并以融合蛋白的形式在大肠杆菌Escherichiacoli中进行表达。蜂毒溶血肽的作用机制主要包括脂酶的激活 ,产生第二信... 详细信息

蜂毒溶血肽 (melittin)是蜜蜂毒液的主要组分 ,由 2 6个氨基酸残基组成 ,具有两亲性和种的特异性。它的cDNA已经被克隆 ,并以融合蛋白的形式在大肠杆菌Escherichiacoli中进行表达。蜂毒溶血肽的作用机制主要包括脂酶的激活 ,产生第二信使 ,调节一些酶及离子通道 ;Ca2 +的水平调节 ,影响骨骼肌和心肌的收缩 ;作为脂类代谢的探针。由于蜂毒溶血肽结构简单 ,且抑制病毒复制 ,因此可将其用于癌症的基因治疗及爱滋病的防治。此外 ,蜂毒溶血肽还可作为对一些作用机理进行研究的模型肽。

关键词：蜂毒肽结构表达作用机理应用前景溶血肽

蜜蜂(Apis)苹果酸脱氢酶同工酶的研究进展

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遗传 2002年第5期24卷 586-590页

作者：刘艳荷张传溪陈盛禄胥保华渐江大学应用昆虫研究所杭州310029 浙江大学动物科学学院

苹果酸脱氢酶（MDH）是糖代谢中重要的酶。在西方蜜蜂（Apis mellifera L.）中,MDH分为3个区带MDHⅠ、MDHⅡ和 MDHⅢ。不同级型和不同发育阶段,MDHⅠ和 MDHⅢ变化不大;MDHⅡ呈现多态现象,由a、b、c3个等位基因编码。东方蜜蜂（*** F.）... 详细信息

苹果酸脱氢酶（MDH）是糖代谢中重要的酶。在西方蜜蜂（Apis mellifera L.）中,MDH分为3个区带MDHⅠ、MDHⅡ和 MDHⅢ。不同级型和不同发育阶段,MDHⅠ和 MDHⅢ变化不大;MDHⅡ呈现多态现象,由a、b、c3个等位基因编码。东方蜜蜂（*** F.）的 MDH由 S、F两个等位基因编码,也有报道它是单态性的。MDH在西方蜜蜂研究中应用较多,主要有处女王交配次数;蜂群中的劳动分工;蜜蜂种群遗传组成分析等。MDH和分子生物学的结合研究势必将推动蜜蜂研究的深入和发展。

关键词：蜜蜂苹果酰脱氢酶同工酶研究进展

斜纹夜蛾核型多角体病毒DNA解旋酶序列比较分析

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江苏农业学报 2013年第3期29卷 496-501页

作者：刘艳荷方继朝江苏省农业科学院植物保护研究所江苏南京210014 广东海洋大学农学院广东湛江524088

根据斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus,SpltNPV)基因组全序列设计引物,PCR扩增A6、X8、X15和X17的DNA解旋酶(Helicase)基因,并将得到的序列与SpltNPV及其他核型多角体病毒的helicase基因进行同源性比较和分子进化分析。结果表明,A6、X8和X15与SpltNPV同源性较高,核苷酸序列相似性分别为89%、89%和91%,氨基酸序列相似性均为93%;X17与SpltNPV2和甜菜夜蛾核型多角体病毒(Spodopteraexguia NPV,SeNPV)同源性高,核苷酸序列相似性分别是90%和82%,氨基酸序列相似性分别为92%和83%;而SpltNPV、A6、X8、X15与X17、SpltNPV2、SeNPV的同源性较低,核苷酸序列相似性为52%～54%,氨基酸序列相似性为41%～43%。分子进化分析发现,供试斜纹夜蛾核型多角体病毒分为2组:X17、SpltNPV2、SeNPV处在一个分支,而A6、X8、X15、SpltNPV处在另外一个分支。

关键词：斜纹夜蛾核型多角体病毒 DNA解旋酶基因序列比较

西方蜜蜂正反交苹果酸脱氢酶Ⅱ基因的遗传差异

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农业生物技术学报 2001年第3期9卷 218-237页

作者：刘艳荷陈盛禄童富淡浙江大学生物化学研究所浙江杭州　310029 浙江大学动物科学学院