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小鼠肝癌细胞H22疏水性蛋白质组的比较研究

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小鼠肝癌细胞H22疏水性蛋白质组的比较研究

作者：刘秋均泸州医学院

学位级别：硕士

目的:运用蛋白质组和生物信息学研究技术,结合生物质谱技术,对小鼠肝癌细胞H22与正常肝细胞的疏水性蛋白质组与水溶性蛋白质组进行比较研究,分析鉴定其差异表达的蛋白质,确定疏水性蛋白质在小鼠肝癌细胞H22中的表达变化,为进一步探索疏... 详细信息

目的:运用蛋白质组和生物信息学研究技术,结合生物质谱技术,对小鼠肝癌细胞H22与正常肝细胞的疏水性蛋白质组与水溶性蛋白质组进行比较研究,分析鉴定其差异表达的蛋白质,确定疏水性蛋白质在小鼠肝癌细胞H22中的表达变化,为进一步探索疏水性蛋白质(包括膜蛋白)在肿瘤细胞发生发展及侵袭转移过程中的作用和地位奠定基础。方法:小鼠肝癌细胞H22按常规方法进行培养,正常小鼠肝细胞以组织块贴壁法培养作为对照组实验材料。小鼠肝癌细胞H22培养至指数生长期后,与对照组肝细胞分别以两种不同的方法进行细胞裂解。第一种为常规的细胞裂解法(裂解液由8 mol/L尿素,1% TBP,4% CHAPS,0.2% Bio-Lyte组成),获得肝癌细胞和肝细胞的水溶性蛋白质。第二种为改良的分步提取裂解法,即以冻融法结合强增溶裂解液(由7mol/L尿素,2 mol/L硫脲,50mmol/L DTT, 4% CHAPS,0.2% Bio-Lyte组成)裂解细胞并分步提取,获得肝癌细胞及肝细胞的疏水性蛋白质。Bradford法测定蛋白质含量,双向电泳分离蛋白质。第一向采用pH 4-7的固相pH梯度(IPG)等电聚焦,第二向采用浓度为10%的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。银染并经凝胶成像系统采集获得双向电泳图谱,根据IPG胶条的pI线性梯度和标准分子量Marker,确定蛋白质斑点的pI和MW,用PDQuest 2D分析软件对实验组和对照组的蛋白质电泳图谱进行差异分析,初步筛选出13个具有差异表达的蛋白质。切取蛋白质斑点,应用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)进行检测,获得各蛋白质的肽指纹图谱,结合2-DE图谱中各蛋白质点的pI和MW值,利用Aldente软件进行匹配检索Swiss-Prot数据库,鉴定小鼠肝癌细胞株H22差异表达的疏水性蛋白质。结果:①应用改良的分步提取裂解法所获得的小鼠肝癌细胞H22及正常小鼠肝细胞蛋白质组双向电泳图谱与常规裂解法所获得的双向电泳图谱相比较存在明显差异。②利用质谱技术和生物信息学技术,鉴定了13个与小鼠肝癌细胞H22相关的疏水性蛋白质,其中5个为膜蛋白,其余7个为胞浆或胞核难溶性蛋白。这些蛋白质的生理功能涉及细胞代谢、细胞增殖、细胞信号转导、细胞骨架等。结论:①改良的分步提取裂解法能够从小鼠肝细胞及肝癌细胞中成功分离提取疏水性蛋白质。②应用比较蛋白质组学的研究方法确定了13个与小鼠肝癌细胞H22相关的差异表达的疏水性蛋白质,对进一步探索肿瘤发生发展相关蛋白具有重大意义。

关键词：蛋白质组疏水性蛋白质小鼠肝癌细胞双向电泳生物信息学

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初中生“凸透镜成像”学习困难调查与研究

初中生“凸透镜成像”学习困难调查与研究

作者：刘秋均西南大学

学位级别：硕士

四君子汤及党参对小鼠神经细胞蛋白质组表达的影响

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时珍国医国药 2011年第3期22卷 602-603页

作者：严冬梅李敏军刘秋均泸州医学院四川泸州646000

目的通过四君子汤及党参对神经细胞的作用,获得差异性蛋白质,全面评价中药及其复方制剂对细胞的综合生物学效应。方法培养小鼠神经元7 d,随机分为3个组,即四君子汤刺激组、党参刺激组和空白对照组,药物作用20 min,裂解细胞,提取全细胞... 详细信息

目的通过四君子汤及党参对神经细胞的作用,获得差异性蛋白质,全面评价中药及其复方制剂对细胞的综合生物学效应。方法培养小鼠神经元7 d,随机分为3个组,即四君子汤刺激组、党参刺激组和空白对照组,药物作用20 min,裂解细胞,提取全细胞蛋白。双向电泳(2-DE)分离,ImageMaster 2D Platinum软件进行差异表达蛋白质组分析,基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质。结果在小鼠神经元双向电泳图谱上四君子汤组共检出蛋白质斑点410个,党参组共检出蛋白质斑点371个;鉴定了四君子汤组与党参组显著差异蛋白质3种,分别是锌指蛋白148、角蛋白细丝偶联蛋白、神经丝M蛋白,它们均属于磷酸化蛋白质。结论①四君子汤作用于小鼠神经元的表达蛋白质组与党参组比较存在明显的差异,主要表现为斑点数目和灰度值的改变。②四君子汤及党参对小鼠神经元的药理作用很有可能是通过相应的细胞信号转导网络系统来发挥的。

关键词：四君子汤党参神经元蛋白质组

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急性淋巴细胞白血病白细胞的蛋白质组研究

中国药房 2009年第5期20卷 350-352页

作者：何涛段春燕王松郑小莉刘秋均泸州医学院泸州市646000

目的:在建立人外周血白细胞蛋白质组分析方法的基础上,对健康志愿者和急性淋巴细胞白血病(ALL)患者白细胞的蛋白质组进行差异性分析,寻找与ALL相关的蛋白质。方法:收集10例健康志愿者和10例ALL患者外周血标本,分离白细胞,提取白细胞蛋白... 详细信息

目的:在建立人外周血白细胞蛋白质组分析方法的基础上,对健康志愿者和急性淋巴细胞白血病(ALL)患者白细胞的蛋白质组进行差异性分析,寻找与ALL相关的蛋白质。方法:收集10例健康志愿者和10例ALL患者外周血标本,分离白细胞,提取白细胞蛋白质,双向电泳分离蛋白质,PDQuest2D软件对双向电泳图谱进行差异分析,基质辅助的激光解析飞行时间质谱鉴定差异蛋白质。结果:利用PDQuest2D软件对健康志愿者与ALL患者外周血白细胞蛋白质双向电泳图谱进行差异分析,根据基质辅助的激光解析飞行时间质谱鉴定结果确定了与ALL相关的蛋白质有AnnexinA5、cytoskeleton14等。结论:经质谱鉴定和生物信息学分析,确定了蛋白质AnnexinA5、cytoskeleton14与ALL的发生有着密切的关系,为寻找该类型白血病的药物治疗靶点及早期诊断的分子标志物提供了良好的实验依据。

关键词：急性淋巴细胞白血病白细胞蛋白质组生物信息学

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数字资源应用提升小学英语教学效益的思考

发明与创新（初中生） 2015年第3期 16-18页

作者：刘秋均桃源县漆河中心小学

当前，我国正面临着教育信息化浪潮的冲击和技术变革所带来的最为深刻的教育教学改革，这场改革不仅仅是教育形式和学习方式的重大变化，更重要的是它将对学校教育思想、观念、模式、内容和方法产生深刻影响。传统的教学模式以教师为中... 详细信息

当前，我国正面临着教育信息化浪潮的冲击和技术变革所带来的最为深刻的教育教学改革，这场改革不仅仅是教育形式和学习方式的重大变化，更重要的是它将对学校教育思想、观念、模式、内容和方法产生深刻影响。传统的教学模式以教师为中心，往往把学生看成是接收知识的容器，教学方式通常是注入式。信息时代，各类资源的传播与获取变得更加便捷，数字资源也逐步成为了教师开展教育教学的重要资源，如何在小学英语教学中的有效应用数字资源是改变传统教学模式、实现创新人才培养的有效途径，也信息化环境下推进基础教育课程改革的趋势与潮流。

关键词：数字资源英语教学教学效益小学应用教育教学改革传统教学模式教育信息化

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四君子汤对小鼠神经元表达蛋白质组的影响

中药药理与临床 2008年第4期24卷 10-12页

作者：严冬梅李洪刘秋均刘友平杨烨泸州医学院生物化学教研室泸州医学院医学分子生物学实验室泸州646000

目的:研究四君子汤对小鼠神经元表达蛋白质组的影响。方法:培养小鼠神经元7天,随机分为两组,中药组加入500mg/ml的四君子汤,对照组加入等量的培养基,药物作用20分钟,裂解细胞,提取全细胞蛋白。双向电泳(2-DE)分离,Image Master 2D Plati... 详细信息

目的:研究四君子汤对小鼠神经元表达蛋白质组的影响。方法:培养小鼠神经元7天,随机分为两组,中药组加入500mg/ml的四君子汤,对照组加入等量的培养基,药物作用20分钟,裂解细胞,提取全细胞蛋白。双向电泳(2-DE)分离,Image Master 2D Platinum软件进行差异表达蛋白质组分析,基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质。结果:在四君子汤作用于小鼠神经元表达蛋白质组的2-DE图谱上共检出蛋白质斑点410个,其中258个为表达增强的蛋白质斑点;鉴定了与四君子汤作用相关的6种蛋白质,分别是真核翻译起始因子3亚基5、锌指蛋白148、釉丛蛋白作用蛋白11、肌浆网/肌内质网钙ATP酶2、神经丝M蛋白和TRAF家族成员相关的NF--B激动子,它们均属于磷酸化蛋白质。结论:四君子汤作用于小鼠神经元的表达蛋白质组与对照组比较存在明显的差异;四君子汤对小鼠神经元的作用极有可能是通过相应的细胞信号转导网络系统来实现的。

关键词：四君子汤小鼠神经元表达蛋白质组生物信息学

人参皂甙Rbl对人肾小管上皮细胞表达蛋白质组的影响

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中药药理与临床 2012年第2期28卷 23-25页

作者：刘寒张春燕刘秋均赵春玲泸州医学院电教中心泸州医学院生物化学教研室泸州医学院生理教研室泸州646000

目的:研究人参皂甙Rbl对人肾小管上皮细胞表达蛋白质组的影响。方法:人肾小管上皮细胞株(HK-2)常规培养,随机分为两组,实验组加入5μg/ml的Rbl,对照组加入等量的培养基,药物作用20min,裂解细胞,提取全细胞蛋白。双向电泳(2-DE)分离,Imag... 详细信息

目的:研究人参皂甙Rbl对人肾小管上皮细胞表达蛋白质组的影响。方法:人肾小管上皮细胞株(HK-2)常规培养,随机分为两组,实验组加入5μg/ml的Rbl,对照组加入等量的培养基,药物作用20min,裂解细胞,提取全细胞蛋白。双向电泳(2-DE)分离,ImageMaster 2D Platinum v5.0软件进行差异表达蛋白质组分析,基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质。结果:通过对2-DE图谱蛋白斑点的匹配及对比分析,实验组的2-DE图谱共检出蛋白斑点为429个,其中236个为表达增强的蛋白斑点;经质谱鉴定的与Rbl作用相关的4个差异表达的蛋白斑点包括:普通转录因子ⅡH亚基1变体、双链断裂修复蛋白rad-21同源物、富含亮氨酸重复序列蛋白-45、DNA依赖性蛋白激酶,它们均属于磷酸化蛋白质。结论:Rbl作用于人肾小管上皮细胞的表达蛋白质组与对照组相比较存在明显的差异;Rbl对人肾小管上皮细胞的作用极有可能是通过相应的细胞信号转导网络系统来实现的。

关键词：人参皂甙Rb1 人肾小管上皮细胞表达蛋白质组生物信息学

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小鼠肝癌细胞H22膜蛋白组的双向电泳

中华肝脏病杂志 2009年第4期17卷 280-283页

作者：刘秋均李洪严冬梅刘友平杨烨泸州医学院医学分子生物学实验室 646000

目的运用双向电泳及生物信息学技术，对小鼠肝癌细胞H22与正常肝细胞的膜垡白进行比较和鉴定，以期为探索膜蛋白在肝癌发生、发展及侵袭转移过程中的作用提供实验依据。方法运用顺序抽提法结合与双向电泳兼容的膜蛋白抽提试剂盒提取小... 详细信息

目的运用双向电泳及生物信息学技术，对小鼠肝癌细胞H22与正常肝细胞的膜垡白进行比较和鉴定，以期为探索膜蛋白在肝癌发生、发展及侵袭转移过程中的作用提供实验依据。方法运用顺序抽提法结合与双向电泳兼容的膜蛋白抽提试剂盒提取小鼠肝癌细胞H22和小常小鼠肝细胞膜蛋白，用考马斯亮蓝法定量，经舣向凝胶电泳分离、银染，Image Master 2D Platinum软件分析，切取差异蛋白点，采用蔡质辅助激光解吸附飞行时间质谱技术检测，Aldente软件检索Swiss-Prot数据库进行匹配鉴定。结果与正常小鼠肝纠胞膜蛋白双向电泳图谱对比分析鉴定了8个在小鼠肝癌细胞H22中表达明晁增强的膜赁白，分别为硫酸酯酶修饰因子2，蛋白激酶C和肌酸激酶Ⅱ底物蛋白3，序列装配结构组件50同系物，巨噬细胞清道人受体Ⅰ／Ⅱ，非特异生白C9或f135同系物，紧密结合蛋白ZO-2，3羟基3甲基戊二酰辅酶A还原酶，空泡蛋由序列相关蛋白52同系物。结论已鉴定的8个膜蛋白的生理功能涉及细胞代谢、细胞增殖、细胞信号转导、细胞骨架等，且在肝癌细胞H22中表达明显增强，提示小鼠肝癌细胞H22发牛发聪及侵袭转移可能涉及相关膜蛋白生理功能的改变。

关键词：癌肝细胞蛋向质组电泳凝胶双向膜蛋白质类光潜法质量基质辅助激光解吸电离

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ERK信号转导途径具有自适应控制作用

泸州医学院学报 2002年第4期25卷 275-280页

作者：罗波郑小莉刘秋均李洪泸州医学院生物化学教研室四川泸州646000

目的　分别以EGF和mGlu为刺激物来分析和比较ERK和PKC信号转导途径的作用特点和机制。方法 :把两个途径所涉及的每一步生物化学反应转化成化学动力学反应方程 ,确定每一反应方程所对应的动力学参数 ,输入计算机进行模拟数学计算。结果 ... 详细信息

目的　分别以EGF和mGlu为刺激物来分析和比较ERK和PKC信号转导途径的作用特点和机制。方法 :把两个途径所涉及的每一步生物化学反应转化成化学动力学反应方程 ,确定每一反应方程所对应的动力学参数 ,输入计算机进行模拟数学计算。结果 :模拟计算的Time - [ERKPP]t曲线和 [Ca2 + ]t- [PLCβ]t曲线与实验结果相符 ;经过ERK途径产生的活化SHC和双磷酸化ERK随时间变化的浓度曲线呈峰形 ,而经过PKC途径产生的活化PLCβ和活化PKC随时间变化的浓度曲线则呈典型的持续激活曲线。结论 :ERK信号转导途径具有自适应控制作用。

关键词：细胞信号转导自适应控制计算机模拟 ERK信号转导途径