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核酸疫苗初免-蛋白疫苗加强的免疫策略提高日本血吸虫核酸疫苗免疫效果

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生物工程学报 2013年第6期29卷 814-822页

作者：刘秉春崔新洁罗新松王潇内蒙古大学生命科学学院内蒙古呼和浩特010021 湖南省血吸虫病防治研究所湖南岳阳414000

为研制抗血吸虫疫苗提供实验依据,探讨了抗血吸虫SjGST-32核酸疫苗与蛋白疫苗联合免疫的免疫增强效应及免疫应答特征。将日本血吸虫DNA疫苗VR1012-SjGST-32与重组蛋白疫苗rSjGST-32分别在第0、2和4周免疫小鼠,在第6周攻击感染日本血吸... 详细信息

为研制抗血吸虫疫苗提供实验依据,探讨了抗血吸虫SjGST-32核酸疫苗与蛋白疫苗联合免疫的免疫增强效应及免疫应答特征。将日本血吸虫DNA疫苗VR1012-SjGST-32与重组蛋白疫苗rSjGST-32分别在第0、2和4周免疫小鼠,在第6周攻击感染日本血吸虫尾蚴,攻击感染45 d后剖杀小鼠,计算减虫率、检卵率以及检测肝脏病理变化,观察免疫保护效果;检测小鼠血清中特异性IgG抗体滴度,T细胞增殖反应和抗原特异性CD4+IFN-γ+、CD4+IL-4+和CD4+IL-10+的数量,探讨免疫应答特征。结果显示,DNA初免-蛋白加强的联合免疫组的保护作用优于单独免疫组,显著提高了减虫率(42.3%)和减卵率(59.6%),并且能够显著减轻血吸虫虫卵对肝脏的病理损害;进一步发现,DNA疫苗和蛋白疫苗联合应用增强了机体T淋巴细胞增殖反应、抗体IgG滴度以及抗原特异性CD4+IFN-γ+的产生。这些研究为新型血吸虫疫苗的优化设计和合理应用提供了依据。

关键词：核酸疫苗蛋白疫苗血吸虫免疫效果

Th17/IL-17在金黄色葡萄球菌小鼠乳腺感染模型中的动态变化及功能初探

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Th17/IL-17在金黄色葡萄球菌小鼠乳腺感染模型中的动态变化及功能...

作者：刘秉春内蒙古大学

学位级别：硕士

金黄色葡萄球菌乳腺炎发病机制复杂,深入了解乳腺对金黄色葡萄球菌感染的免疫应答机制,是预防和控制金黄色葡萄球菌乳腺炎发生的关键。Th17细胞亚群及其分泌的主要细胞因子IL-17在胞外细菌感染和介导慢性炎症中发挥重要作用。尤其是最... 详细信息

金黄色葡萄球菌乳腺炎发病机制复杂,深入了解乳腺对金黄色葡萄球菌感染的免疫应答机制,是预防和控制金黄色葡萄球菌乳腺炎发生的关键。Th17细胞亚群及其分泌的主要细胞因子IL-17在胞外细菌感染和介导慢性炎症中发挥重要作用。尤其是最新研究发现,IL-17在防御皮肤金黄色葡萄球菌感染中发挥了重要的免疫保护作用,为预防和治疗金黄色葡萄球菌皮肤感染提供了新的靶点。乳腺作为机体特殊的组织器官,在金黄色葡萄球菌感染后,Th17细胞/IL-17的动态变化规律如何?发挥何种功能?尚无研究报道。本论文在建立金黄色葡萄球菌感染小鼠乳腺炎模型的基础上,以Th17细胞及其主要效应因子IL-17作为研究对象,采用流式细胞术、Real-time PCR和ELISA检测Th17细胞及IL-17在金黄色葡萄球菌感染乳腺炎症中的应答规律,体外试验验证IL-17在刺激牛乳腺上皮细胞分泌细胞因子的作用,初步评价IL-17在金黄色葡萄球菌感染乳腺后发挥的功能,为明确金黄色葡萄球菌乳腺炎的发病机制提供新的实验资料。结果：1.成功建立了金黄色葡萄球菌感染小鼠乳腺炎模型,随感染时间推移,小鼠乳腺炎症加重,乳腺组织中炎性细胞浸润程度增加。2.在攻菌后3、6、9天,Thl、Th2和Th17细胞数显著升高;细胞因子IFN-γ、IL-12(Thl),IL-4、IL-10(Th2),IL17、IL-23(Th17)的表达均上调;ELISA结果显示IL-17／IL-23的表达整个感染阶段均有上调,且在感染后第三天出现峰值。金黄色葡萄球菌在小鼠乳腺中的定植量随感染天数增加而减少,与IL-17的变化呈现负相关。3.在牛乳腺上皮细胞中成功表达了牛IL-17,Real-time PCR显示转染真核表达载体pEGFP-N3-bIL-17后,金黄色葡萄球菌侵染牛乳腺上皮细胞的炎性因子表达水平上调,提示IL-17可能具有促进牛乳腺上皮细胞炎性因子表达的作用。本研究为进一步阐明金黄色葡萄球菌乳腺感染的机制打下了基础,为新治疗方案的开发提供了参考资料。

关键词：金黄色葡萄球菌乳腺炎 Th17/IL-17 动态变化

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牛奶中乳腺上皮细胞的分离培养及鉴定

生物技术通报 2013年第3期29卷 107-113页

作者：崔新洁王婷刘秉春陶林王潇内蒙古大学生命科学学院呼和浩特010010

旨在建立简便、经济、纯净的牛乳腺上皮细胞的体外培养方法,并对所培养细胞进行鉴定。以新鲜牛奶为材料,离心收集细胞进行原代培养并传代,通过测定生长曲线、乳腺上皮细胞骨架蛋白-角蛋白8和18、β-酪蛋白、核型等对所培养细胞进行鉴定... 详细信息

旨在建立简便、经济、纯净的牛乳腺上皮细胞的体外培养方法,并对所培养细胞进行鉴定。以新鲜牛奶为材料,离心收集细胞进行原代培养并传代,通过测定生长曲线、乳腺上皮细胞骨架蛋白-角蛋白8和18、β-酪蛋白、核型等对所培养细胞进行鉴定,以确定其为乳腺上皮细胞。离心收集到的细胞原代培养3 d后形成多个单克隆,细胞呈典型的铺路石状,同时伴随少量的吞噬细胞,继续培养至单克隆汇合时,细胞表层产生大小不等的乳滴,吞噬细胞大多转移到乳滴中,传代后,得到纯净的乳腺上皮细胞,吞噬细胞随传代而消失;细胞生长曲线呈"S"型,RT-PCR法扩增到了乳腺上皮细胞的骨架蛋白8、18以及β-酪蛋白,细胞免疫组化检测到了细胞角蛋白8,核型为29对端着丝粒常染色体,1对近端着丝粒性染色体。通过以上试验证明,乳汁分离法可以培养纯净的、具有正常分裂增生能力的牛乳腺上皮细胞,建立了乳腺上皮细胞的体外培养模型。

关键词：乳汁牛乳腺上皮细胞细胞骨架蛋白泌乳

天然产物对树突状细胞免疫调节作用的研究进展

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中草药 2018年第5期49卷 1227-1232页

作者：刘秉春袁建龙邱英云升内蒙古医科大学附属医院干细胞研究中心内蒙古呼和浩特010050

树突状细胞(dendritic cells,DCs)是连接先天免疫和获得性免疫的关键。在感染和过敏反应中,DCs作为专职抗原递呈细胞引起T细胞免疫应答,并维持自身抗原免疫耐受。DCs介导的T细胞免疫应答有益于感染性疾病以及癌症等的治疗,同时DCs诱导... 详细信息

树突状细胞(dendritic cells,DCs)是连接先天免疫和获得性免疫的关键。在感染和过敏反应中,DCs作为专职抗原递呈细胞引起T细胞免疫应答,并维持自身抗原免疫耐受。DCs介导的T细胞免疫应答有益于感染性疾病以及癌症等的治疗,同时DCs诱导的免疫耐受在控制自身免疫疾病、过敏或炎性疾病中发挥作用。研究表明多种天然产物能够调控DCs的表型与功能,并在免疫疗法的临床应用中被证明有效。因此,利用天然产物调控DCs免疫功能将为开发有效且低成本的细胞治疗方法提供新的思路。对近年来关于天然产物调控DCs功能的研究进行综述,总结天然产物对DCs表型变化的影响及其对免疫应答和免疫抑制的调控作用。

关键词：天然产物树突状细胞成熟活化免疫激活免疫抑制

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成体神经干细胞诱导方案研究进展

中华神经科杂志 2020年第3期53卷 217-220页

作者：刘秉春袁建龙邱英云升内蒙古医科大学附属医院干细胞研究中心呼和浩特010050

近年来,研究人员致力于构建遗传和表型稳定的神经干细胞系,旨在恢复神经组织不可逆转的功能丧失从而满足临床需求。其中,成人体内维持其多能状态的干细胞也成为研究的焦点之一。随着诱导多能干细胞和体细胞直接转分化为所需细胞类型等... 详细信息

近年来,研究人员致力于构建遗传和表型稳定的神经干细胞系,旨在恢复神经组织不可逆转的功能丧失从而满足临床需求。其中,成人体内维持其多能状态的干细胞也成为研究的焦点之一。随着诱导多能干细胞和体细胞直接转分化为所需细胞类型等技术的发展,基于使用来自胚胎或胎儿神经组织的同种异体神经干细胞的研究方法逐渐成为过去。本文围绕诱导干细胞和重编程体细胞的多能状态维持及诱导神经干细胞的实验方案做一综述。

关键词：成体干细胞多能干细胞细胞培养技术神经系统

BDH2基因在代谢与肿瘤发生发展中的作用与机制

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肿瘤防治研究 2022年第3期49卷 230-234页

作者：刘秉春李康袁建龙内蒙古医科大学附属医院干细胞研究中心肿瘤细胞基因检测应用与研究工程实验室呼和浩特010050 内蒙古医科大学第一临床医学院呼和浩特010050 内蒙古医科大学附属医院检验科呼和浩特010050

肿瘤中的细胞代谢是促进肿瘤发生发展的重要生物学过程,代谢相关的基因正逐渐成为肿瘤治疗的靶点,但对肿瘤进展中的异常代谢及其预后价值仍需要大量研究挖掘。BDH2基因是一种多功能基因,参与多种代谢途径,在铁代谢中起重要的催化合成作... 详细信息

肿瘤中的细胞代谢是促进肿瘤发生发展的重要生物学过程,代谢相关的基因正逐渐成为肿瘤治疗的靶点,但对肿瘤进展中的异常代谢及其预后价值仍需要大量研究挖掘。BDH2基因是一种多功能基因,参与多种代谢途径,在铁代谢中起重要的催化合成作用,同时参与酮体代谢并与脂代谢相关。近年来,研究者发现BDH2在不同类型的肿瘤中发挥的作用并不相同,多种肿瘤的发生发展与BDH2密切相关,本文对BDH2在代谢与肿瘤发生中的作用与机制进行分析、总结与展望。

关键词： BDH2 铁代谢肿瘤发生

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胶质瘤U251细胞外源基因瞬时转染方法的选择

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山东医药 2017年第16期57卷 44-46页

作者：呼格吉乐高乃康刘秉春袁建龙内蒙古医科大学附属医院呼和浩特010050

目的选择一种将外源基因瞬时转入胶质瘤细胞的高效转染方法。方法以去内毒素真核表达载体DsRed2为外源基因,分别采用脂质体Lipofectamine2000转染法、脂质体Viafect转染法以及电转染法,将不同浓度的DsRed2质粒(0.25、0.5、1.0μg)转染... 详细信息

目的选择一种将外源基因瞬时转入胶质瘤细胞的高效转染方法。方法以去内毒素真核表达载体DsRed2为外源基因,分别采用脂质体Lipofectamine2000转染法、脂质体Viafect转染法以及电转染法,将不同浓度的DsRed2质粒(0.25、0.5、1.0μg)转染入胶质瘤U251细胞(以下称胶质瘤细胞,细胞数量均为1.0×105个)。荧光显微镜下采用可见光、红色荧光滤镜观察细胞形态及红色荧光蛋白表达,紫外光滤镜下观察细胞核Hocest33342染色情况,计算转染效率。结果三种方法均能将质粒转染至胶质瘤细胞中,红色荧光蛋白表达效果均良好。转染后的细胞形态基本正常,但表达红色荧光蛋白与未表达红色荧光蛋白的细胞形态差异较大。相同质粒浓度下,电转染法转染后表达红色荧光蛋白的细胞数量多于脂质体Lipofectamine2000转染法、脂质体Viafect转染法。随着质粒浓度的升高,脂质体Viafect转染法和电转染法对胶质瘤细胞的转染效率逐渐升高。相同质粒浓度下,电转染法对胶质瘤细胞的转染效率均高于脂质体Lipofectamine2000转染法和脂质体Viafect转染法(P均<0.01)。结论电转染法对外源基因瞬时转染胶质瘤细胞的转染效率较高,并呈质粒浓度依赖性。

关键词：胶质瘤细胞质粒转染方法电转染法转染效率

金黄色葡萄球菌诱导牛原代乳腺上皮细胞的凋亡

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中国农业科学 2013年第15期46卷 3212-3219页

作者：崔新洁胡庆亮李奕平陶琳修磊刘秉春陈媛王潇内蒙古大学生命科学学院

【目的】观察金黄色葡萄球菌能否诱导牛原代乳腺上皮细胞发生凋亡。【方法】先以新鲜牛奶为材料分离培养牛乳腺上皮细胞并鉴定,然后用金黄色葡萄球菌侵染牛乳腺上皮细胞,采用普通光镜和扫描电子显微镜观察金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮... 详细信息

【目的】观察金黄色葡萄球菌能否诱导牛原代乳腺上皮细胞发生凋亡。【方法】先以新鲜牛奶为材料分离培养牛乳腺上皮细胞并鉴定,然后用金黄色葡萄球菌侵染牛乳腺上皮细胞,采用普通光镜和扫描电子显微镜观察金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡的形态学变化;用流式细胞仪(Annexin V/PI双染法)定量检测金黄色葡萄球菌感染对牛乳腺上皮细胞凋亡的诱导作用;RT-PCR检测细胞凋亡通路中关键蛋白caspase 3和caspase 8的变化情况。【结果】从乳汁中分离的细胞经原代培养后,细胞呈典型的铺路石状,细胞表层可产生大小不等的乳滴,RT-PCR法扩增出乳腺上皮细胞的骨架蛋白8特异性条带;免疫荧光细胞染色法结果显示分离培养的牛乳腺上皮细胞表达角蛋白8;金黄色葡萄球菌感染牛乳腺上皮细胞3 h后,可诱导牛乳腺上皮细胞发生凋亡,表现为细胞核皱缩,染色质边缘化和细胞浆内空泡增多等典型凋亡特征;Annexin V/PI双染法检测后发现,与对照组相比,感染组细胞凋亡率明显升高,差异极显著(P﹤0.01);与对照组相比,感染组细胞caspase3及caspase 8表达量明显增高。【结论】金黄色葡萄球菌可以诱导牛原代乳腺上皮细胞凋亡,具有细胞凋亡的典型形态特征和生化特性,凋亡通路可能涉及caspase 3和caspase 8参与的外源性凋亡途径。

关键词：金黄色葡萄球菌牛乳腺上皮细胞细胞凋亡

基于诊断试剂研发的产学研结合教学改革在临床检验诊断学见习中的探索

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内蒙古医科大学学报 2022年第S1期44卷 1-2,5页

作者：刘秉春袁建龙内蒙古医科大学附属医院干细胞实验室/肿瘤细胞基因检测应用与研究工程实验室内蒙古呼和浩特010050 内蒙古医科大学附属医院检验科内蒙古呼和浩特010050

以服务国家发展为导向的“十四五”规划对提升教育供给水平做出了明确要求:包括提升人才供给水平和提高高校科技创新水平。随着现代医疗事业的蓬勃发展,临床检验诊断学人才的培养面临着新的要求和挑战。立足于学科深化人才培养模式改革... 详细信息

以服务国家发展为导向的“十四五”规划对提升教育供给水平做出了明确要求:包括提升人才供给水平和提高高校科技创新水平。随着现代医疗事业的蓬勃发展,临床检验诊断学人才的培养面临着新的要求和挑战。立足于学科深化人才培养模式改革、构建高校创新体系、推动产学研深度融合等政策导向,临床检验诊断学由从前的强调基础和理论的培养模式向培养具有创新意识和科研思维应用转化能力的目标转变。

关键词：临床检验诊断学医学教育诊断试剂产学研结合