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酵母表面展示技术应用的最新进展

生物工程学报 2023年第11期39卷 4358-4375页

作者：赵黎丽苏炳恺杜姝姝丁文婷刘熔增河南科技大学基础医学院免疫学教研室河南洛阳471023

酵母表面展示(yeastsurfacedisplay,YSD)技术是一种将外源靶蛋白基因序列与特定的载体基因序列融合后导入酵母细胞,利用酵母细胞内蛋白转运机制将靶蛋白表达并定位于酵母细胞表面的技术,最常用的是α-凝集素表达系统。酵母细胞具有真核... 详细信息

酵母表面展示(yeastsurfacedisplay,YSD)技术是一种将外源靶蛋白基因序列与特定的载体基因序列融合后导入酵母细胞,利用酵母细胞内蛋白转运机制将靶蛋白表达并定位于酵母细胞表面的技术,最常用的是α-凝集素表达系统。酵母细胞具有真核细胞翻译后修饰机制,能够帮助目的蛋白正确折叠,可以用来展示各种真核蛋白,包括抗体、受体、酶和抗原肽等。酵母表面展示技术已成为生物技术和生物医学领域的强大蛋白质工程工具,结合流式细胞分选可用于改善蛋白质性质,包括亲和力、特异性、酶功能和稳定性等。本文从文库构建与筛选、抗体工程、蛋白质工程、酶工程和疫苗开发等方面对酵母表面展示技术应用最新进展进行了综述。

关键词：酵母表面展示技术文库构建抗体工程蛋白质工程酶工程口服疫苗

T细胞在1型发作性睡病发病机制中的作用研究进展

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中国比较医学杂志 2023年第2期33卷 119-125页

作者：杜姝姝刘文慧赵黎丽刘熔增河南科技大学基础医学院河南洛阳471023

1型发作性睡病(narcolepsy type 1,NT1)是由下丘脑食欲素(hypocretin,HCRT)神经元缺失引起的一种罕见的睡眠障碍,其主要症状是白天极度嗜睡、猝倒和睡眠紊乱。遗传和环境因素在发作性睡病的发病机制中起着至关重要的作用,特别是携带HLA-... 详细信息

1型发作性睡病(narcolepsy type 1,NT1)是由下丘脑食欲素(hypocretin,HCRT)神经元缺失引起的一种罕见的睡眠障碍,其主要症状是白天极度嗜睡、猝倒和睡眠紊乱。遗传和环境因素在发作性睡病的发病机制中起着至关重要的作用,特别是携带HLA-DQB1*06:02等位基因的个体。大量的遗传学和流行病学证据指向免疫系统,甲型H1N1感染或接种疫苗后,发作性睡病的发病率显著增加,提示H1N1可能是NT1的环境触发因素,但免疫系统引起HCRT神经元破坏的机制尚不清楚。NT1患者中已经检测到靶向HCRT神经元的自身反应性T细胞,其中辅助性CD4^(+)T细胞和细胞毒性CD8^(+)T细胞可能具有致病性,表明NT1的发病机制与T细胞介导的自身免疫有关。本文对T细胞介导NT1发病机制的最新研究进展作一综述。

关键词： 1型发作性睡病自身免疫病分子模拟 H1N1 T细胞

中国汉族人群人类白细胞抗原（HLA）-DM多态性研究及其与强直性脊柱炎（AS）疾病关联分析

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中国汉族人群人类白细胞抗原（HLA）-DM多态性研究及其与强直性脊...

作者：刘熔增华东师范大学

学位级别：硕士

非经典的HLA-DM在外源性抗原加工递呈过程中发挥重要且独特的作用。HLA-DM遗传多态性的变化将导致一些疾病的易感性。先前通常采用PCR-RFLP和PCR-SSOP对HLA-DM分型。和这些方法不同,我们建立了TaqMan PCR分型方法。本研究第一部分利用... 详细信息

非经典的HLA-DM在外源性抗原加工递呈过程中发挥重要且独特的作用。HLA-DM遗传多态性的变化将导致一些疾病的易感性。先前通常采用PCR-RFLP和PCR-SSOP对HLA-DM分型。和这些方法不同,我们建立了TaqMan PCR分型方法。本研究第一部分利用该方法对1000例中国南北方汉族无关个体进行基因分型,调查中国汉族人群HLA-DMA和HLA-DMB座位各等位基因频率和基因型频率分布,并与国内部分地区人群及国外人群对比;分析DMA-DMB二座位及DMA-DMB-TAP1-TAP2四座位单体型分布特征。第二部分选取110例AS疾病患者和1000例健康无关献血员,利用TaqMan PCR技术对7个DMA和DMB SNPs(single nucleotide polymorphisms)位点进行了基因分型,通过比较中国汉族人群AS疾病与健康对照HLA-DMA/HLA-DMB各SNP位点及等位基因多态性,分析可能的AS疾病易感位点及基因。在1000例中国南北方汉族无关个体中,共检出4种DMA等位基因和6种DMB等位基因。所有位点均符合Hardy-Weinberg平衡定律。DMA*01：01(69.35%)与DMB*01：01(52.5%)在中国汉族中分布最广。DMA-DMB二座位单体型分析发现,DMA*01:01-DMB*01:02、DMA*01:01-DMB*01:03、DMA*01:01-DMB*01:04、DMA*01：02-DMB*01：01、DMA*01：02-DMB*01：05、DMA*01：03-DMB*01：07和DMA*01：04-DMB*01：01单体型存在较强连锁不平衡。而DMA-DMB-TAP1-TAP2四座位单体型分析中表现显著连锁不平衡的则是DMA*01：01-DMB*01：04-TAP1*02：01：01-TAP2*01：02、DMA*01：02-DMB*01：05-TAP1*01：01-TAP2*01：01和DMA*01：01-DMB*01：03-TAP1*04：01-TAP2*01：01单体型。与国外人群对比发现,中国汉族人群在H LA-DMA座位与德国人无显著差异,而与土耳其人、美国白人、口本人、法国人、意大利人存在显著差异;在HLA-DMB座位与德国人、意大利人存在极显著差异。本研究通过对中国汉族人群HLA-DMA和HLA-DMB基因多态性及单体型分析,获得相应的群体遗传学资料,为进一步疾病关联分析奠定了基础。在HLA-DM与AS疾病关联分析中发现,疾病组DMA*01：02基因频率(19.55%)显著低于健康组(28.05%),疾病组DMA*01：02-DMB*01：01单体型频率(17.51%)也显著低于健康组(26.87%);疾病与健康组DMAp496和DMB p590SNP位点等位基因、DMA*01：02等位基因以及DMA*01：02-DMB*01：01单体型分布存在显著差异(p<0.05)。因此,DMA*01：02等位基因和DMA*01：02-DMB*01：01单体型可能对于AS疾病具有保护性作用,未来有必要在其他人群中进一步确认并研究其基因功能。

关键词：中国汉族 HLA-DM 基因频率单体型连锁不平衡强直性脊柱炎疾病关联

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纤溶酶及其衍生物溶栓研究进展

国际药学研究杂志 2014年第3期41卷 313-317页

作者：刘熔增莫炜于敏复旦大学教育部分子医学重点实验室复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系上海200032

当前批准使用的溶栓药物均为纤溶酶原激活剂,其应用受到出血并发症和血栓部位纤溶酶原含量不足的限制。而纤溶酶可被α2-抗纤溶酶迅速中和,避免了出血风险。随着导管输送技术的应用,纤溶酶特有的生化性质使其成为安全有效的直接溶栓药物... 详细信息

当前批准使用的溶栓药物均为纤溶酶原激活剂,其应用受到出血并发症和血栓部位纤溶酶原含量不足的限制。而纤溶酶可被α2-抗纤溶酶迅速中和,避免了出血风险。随着导管输送技术的应用,纤溶酶特有的生化性质使其成为安全有效的直接溶栓药物,小纤溶酶、Δ-纤溶酶、微小纤溶酶等纤溶酶衍生物在临床前及临床试验中亦表现出较高的溶栓效率和较好的止血安全性。本文将对纤溶酶及其衍生物在生化性质、临床前和临床研究等方面取得的进展进行综述。

关键词：纤溶酶纤溶酶衍生物生物学活性临床前研究溶栓治疗

非经典HLA-Ⅱ类分子HLA-DM/DO研究进展

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中国输血杂志 2010年第11期23卷 986-990页

作者：刘熔增冯明亮刘达庄华东师范大学生命科学学院上海200062 上海市血液中心

HLA-DM和HLA-DO同属于HLA-Ⅱ类相关抗原加工递呈基因,又被称作HLA-Ⅱb类分子.在获得性免疫中, DM分子通过形成二聚体复合物参与肽交换以及Ⅱ类经典分子荷肽(Peptide-loading of MHC classⅡmolecules)[1],然后启动特异性的免疫应答并调... 详细信息

HLA-DM和HLA-DO同属于HLA-Ⅱ类相关抗原加工递呈基因,又被称作HLA-Ⅱb类分子.在获得性免疫中, DM分子通过形成二聚体复合物参与肽交换以及Ⅱ类经典分子荷肽(Peptide-loading of MHC classⅡmolecules)[1],然后启动特异性的免疫应答并调节抗体的产生和免疫复合物的形成,从而清除体内病原体;而DO分子是DM分子功能的负向调节蛋白,两者通过相互作用影响抗原递呈过程,对于维持机体正常免疫至关重要,把二者基因敲除后将导致严重的免疫缺陷或者自身免疫病.现对DM和DO基因从定位,功能及与自身免疫性疾病的相关性等方面做一综述

关键词： HLA-Ⅱ非经典 HLA-DM HLA-DO 基因编码免疫耐受分子表达调控

基于生物信息学的系统性红斑狼疮枢纽基因及治疗药物的分析

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空军航空医学 2023年第1期40卷 62-68页

作者：文路遥张贝周丽卿刘熔增史晓飞河南科技大学临床医学院河南科技大学第一附属医院风湿免疫科河南洛阳471003 河南科技大学基础医学院免疫教研室河南洛阳471003

目的通过生物信息学的方法分析系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)并进行药物预测,为探索SLE的病理机制、寻找潜在靶向药物提供方向。方法从GEO数据库中下载GSE185... 详细信息

目的通过生物信息学的方法分析系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)并进行药物预测,为探索SLE的病理机制、寻找潜在靶向药物提供方向。方法从GEO数据库中下载GSE185047、GSE88884和GSE72509的基因表达数据,使用R语言limma包筛选出各个数据库DEGs并取交集,利用DAVID、STRING等数据库对DEGs富集分析并识别枢纽基因,此外,GSE50635被用来验证枢纽基因。进一步利用miRTarbase数据库识别调控枢纽基因的miRNA并构建miRNA-mRNA调控网络,最后使用DSigDB数据库筛选潜在治疗药物。结果最终得到76个共同DEGs。GO富集分析表明DEGs主要涉及了病毒相关反应及Ⅰ型干扰素信号通路等生物学过程。KEGG富集到了甲型流感病毒、新型冠状病毒(COVID-19)及NOD样受体等信号通路。筛选获得了20个枢纽基因(STAT1、RSAD2、IFIT3、IFIH1、ISG15、DDX58、MX1、IFI44L、IFI44、OAS2、IFIT1、OAS3、OAS1、IFI35、XAF1、IFIT2、DDX60、OASL、IFI6、RTP4)、11个调控枢纽基因的miRNA及7种可能成为治疗SLE潜在药物的小分子化合物。结论筛选到的枢纽基因及靶向药物可能为深入研究SLE病理机制、寻找潜在早期诊断标志物和新型治疗药物提供依据。

关键词：系统性红斑狼疮生物信息学 Ⅰ型干扰素微小RNA 靶向药物

使用Taqman PCR技术建立人类血小板抗原-1～5、15分型体系

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中国输血杂志 2011年第11期24卷 936-938页

作者：沈彤赵玉林刘熔增刘达庄上海市血液中心上海200051 华东师范大学

目的了解上海地区单采血小板献血人群HPA-1～5、15多态性分布,分析评估新的分型技术。方法利用TaqMan PCR技术对500份上海地区单采血小板供者标本进行HPA-1～5、15抗原系统等位基因分型,并随机抽取100份标本使用PCR-SSP技术进行比对。结... 详细信息

目的了解上海地区单采血小板献血人群HPA-1～5、15多态性分布,分析评估新的分型技术。方法利用TaqMan PCR技术对500份上海地区单采血小板供者标本进行HPA-1～5、15抗原系统等位基因分型,并随机抽取100份标本使用PCR-SSP技术进行比对。结果 HPA各等位基因频率分别为HPA-1a:0.999,HPA-1b:0.001,HPA-2a:0.953,HPA-2b:0.047,HPA-3a:0.582,HPA-3b:0.418,HPA-4a:0.999,HPA-4b:0.001,HPA-5a:0.988,HPA-5b:0.012,HPA-15a:0.524,HPA-15b:0.476;有1份标本HPA-5等位基因与SSP检测结果产生差异。结论上海地区HPA各等位基因频率与国内各地区人群分布无明显差异,与中国汉族人群HPA分布情况基本吻合,实验数据经验证符合Hardy-Weinberg平衡定律,实验结果准确可靠;HPA-5差异经测序验证判断可能由PCR-SSP非特异扩增所致;TaqMan技术在HPA抗原系统分型应用中特异性高,反应时间短,具有良好的应用前景,是现有技术方法的一种重要补充。

关键词： HPA TaqMan PCR 基因频率多态性

中国汉族人群HLA-DM多态性与强直性脊柱炎疾病关联分析

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中国输血杂志 2012年第5期25卷 431-436页

作者：刘熔增冯明亮沈彤赵玉林刘达庄上海市血液中心上海200051 华东师范大学生命科学学院华东师范大学生命科学学院生命医学系

目的比较中国汉族人群强直性脊柱炎(AS)与健康对照HLA-DMA/HLA-DMB各SNP位点及等位基因多态性,分析可能的AS疾病易感位点及基因。方法选取110名AS患者和1 000名健康无关献血者,利用Taq-Man PCR技术对7个DMA和DMB SNPs(single nucleotide... 详细信息

目的比较中国汉族人群强直性脊柱炎(AS)与健康对照HLA-DMA/HLA-DMB各SNP位点及等位基因多态性,分析可能的AS疾病易感位点及基因。方法选取110名AS患者和1 000名健康无关献血者,利用Taq-Man PCR技术对7个DMA和DMB SNPs(single nucleotide polymorphisms)位点进行了基因分型,运用SPSS软件及Arlequin3.1软件统计基因频率和单体型相关参数。结果 AS组DMA*01∶02基因频率(19.55%)显著低于对照组(28.05%),AS组DMA*01∶02-DMB*01∶01单体型频率(17.51%)也显著低于对照组(26.87%);AS组与对照组DMA p496和DMB p590 SNP位点多态性、DMA*01∶02等位基因以及DMA*01∶02-DMB*01∶01单体型分布差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DMA*01∶02等位基因和DMA*01∶02-DMB*01∶01单体型可能对于AS疾病具有保护性作用,未来有必要在其他人群中进一步确认并研究其基因功能。

关键词：中国汉族 HLA-DM 多态性强直性脊柱炎疾病相关性

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人工智能“走进”课堂助力精准个性化学习

教育现代化 2020年第44期 114-116页

作者：刘熔增陈霞飞齐静姣河南科技大学

每个学生都有自己的学习特点,传统教学模式采用班级授课制。对于老师来说,想要满足教室里每个学生的需求是极其困难的,也难以顾及学生之间的个体差异。随着大数据与人工智能的发展,个性化精准教学成为可能。人工智能系统可以轻松适应每... 详细信息

每个学生都有自己的学习特点,传统教学模式采用班级授课制。对于老师来说,想要满足教室里每个学生的需求是极其困难的,也难以顾及学生之间的个体差异。随着大数据与人工智能的发展,个性化精准教学成为可能。人工智能系统可以轻松适应每个学生的学习需求,根据学生的优缺点进行针对性的教学,为学生提供个性化学习服务。本文将介绍人工智能如何进入课堂助力精准个性化学习。

关键词：人工智能个性化学习精准教学智能辅导系统