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两次过滤体外分离培养原代血脑屏障内皮细胞

中国组织工程研究与临床康复 2008年第21期12卷 4123-4126页

作者：刘洁晓蒲传强郝延磊解放军总医院神经内科北京市100853

背景：内皮细胞是血脑屏障结构和功能的主要基础，要了解血脑屏障的作用，就必须在体外建立血脑屏障模型。目的：利用幼鼠脑微血管片段模拟血脑屏障内皮细胞的生物学特性，拟建立一种血脑屏障内皮细胞的体外培养技术。设计、时间及地点... 详细信息

背景：内皮细胞是血脑屏障结构和功能的主要基础，要了解血脑屏障的作用，就必须在体外建立血脑屏障模型。目的：利用幼鼠脑微血管片段模拟血脑屏障内皮细胞的生物学特性，拟建立一种血脑屏障内皮细胞的体外培养技术。设计、时间及地点：细胞观察，于2006—04在解放军总医院神经内科实验室完成。材料：清洁级1月龄SD大鼠2只，用于脑组织微血管内皮细胞的制备。方法：取大鼠脑组织，加入D—Hank’s液培养基制备匀浆，149μm滤网过滤后收集滤液，以74μm滤网再次过滤。将滤网上的组织刮下，胶原酶消化后传代扩增。取传1代后的脑组织微血管内皮细胞用于指标检测。主要观察指标：细胞形态变化。锥虫蓝染色计数细胞活性。免疫组织化学染色鉴定。结果：①培养12h后大部分脑微血管片段贴壁，两三天微血管片段周边有成簇的细胞团及单个细胞生长，7～10d细胞生长为致密单层并呈典型鹅卵石样排列。传代细胞4h开始贴壁，培养一两天变为多角形并呈致密单层。②生长7～10d的细胞其活性〉96％。③培养的细胞第Ⅷ因子多克隆抗体免疫组化染色显示胞膜和胞浆呈阳性，胞核为阴性，为血脑屏障内皮细胞。结论：采用两次过滤培养技术可成功分离培养出较理想的原代血脑屏障内皮细胞。

关键词：内皮细胞细胞培养血脑屏障

调节性T细胞治疗实验性小鼠多发性肌炎及机制研究

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南方医科大学学报 2015年第4期35卷 602-605页

作者：石强田成林刘洁晓蒲传强中国人民解放军总医院海南分院神经内科海南三亚572000 中国人民解放军总医院神经内科北京100853

目的探讨CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞对于实验性自身免疫性肌炎(EAM)小鼠的治疗价值及机制。方法免疫磁珠分选技术从BALC/c小鼠脾脏中分选出足量CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞以备回输,观察干预组及未干预组EAM小鼠肌肉组织病理学变化,流式细胞... 详细信息

目的探讨CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞对于实验性自身免疫性肌炎(EAM)小鼠的治疗价值及机制。方法免疫磁珠分选技术从BALC/c小鼠脾脏中分选出足量CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞以备回输,观察干预组及未干预组EAM小鼠肌肉组织病理学变化,流式细胞仪检测两组小鼠脾脏CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表面PD-1及CTLA-4的表达变化,双抗体夹心ELISA法检测外周血IL-10、TGF-β的变化。结果干预组小鼠较未干预组肌肉病理炎性细胞浸润明显减轻,其外周血IL-10、TGF-β含量较未干预组明显升高(P<0.05),脾脏CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表面PD-1及CTLA-4表达明显升高(P<0.05)。结论 CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞回输对于EAM小鼠的治疗效果是通过增加外周血IL-10及TGF-β水平和增高脾脏CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表面PD-1及CTLA-4的表达发挥作用。

关键词：自身免疫性肌炎 CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞流式细胞仪 IL-10 TGF-β PD-1 CTLA-4

缺血性脑卒中血脑屏障内皮细胞ICAM-1的实验研究

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中国神经精神疾病杂志 1998年第S1期24卷 18-20页

作者：郝延磊蒲传强朱克张凤英刘洁晓中国人民解放军总医院神经内科北京100853

目的　探讨高血压大鼠脑卒中过程中血脑屏障 (BBB)内皮细胞细胞间粘附分子 - 1 (ICAM - 1 )的表达。　　方法　采用尼龙线栓堵自发性高血压大鼠和正常血压SD大鼠大脑中动脉建立局灶性永久性脑缺血模型 ,在缺血至梗塞不同时期 ,用免疫组... 详细信息

目的　探讨高血压大鼠脑卒中过程中血脑屏障 (BBB)内皮细胞细胞间粘附分子 - 1 (ICAM - 1 )的表达。　　方法　采用尼龙线栓堵自发性高血压大鼠和正常血压SD大鼠大脑中动脉建立局灶性永久性脑缺血模型 ,在缺血至梗塞不同时期 ,用免疫组化ABC法观察脑组织BBB内皮细胞ICAM - 1表达。　　结果　自发性高血压大鼠脑缺血 1h ,BBB之内皮细胞开始出现ICAM - 1的表达 ,至 6h达高峰 ,并持续至 1 68h;正常血压大鼠则在脑缺血至 3h开始出现ICAM - 1的表达 ,至 1 2h达高峰 ,并持续至 1 2 0h。两种大鼠在缺血早期对侧非缺血区脑组织BBB之内皮细胞亦有少量ICAM - 1的表达。　　结论　自发性高血压大鼠在未缺血时BBB内皮细胞未见ICAM - 1的表达 ;缺血性脑卒中时ICAM - 1开始表达及达高峰时间均早于正常血压大鼠 ,持续时间亦较正常血压大鼠为长。

关键词：自发性高血压大鼠脑缺血血脑屏障细胞间粘附分子-1

实验性超负荷血糖大鼠血脑屏障内皮细胞ICAM-1表达的研究

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解放军医学杂志 2000年第2期25卷 97-99页

作者：郭徽张凤英刘洁晓郝延磊蒲传强解放军总医院济南军区总医院

为了解超负荷血糖条件下有否血脑屏障 (BBB)内皮细胞ICAM 1的表达 ,本研究采用SD大鼠尾静脉注射链脲霉素的方法 ,建立超负荷血糖模型。以免疫组化方法动态观察了 3天至 6个月不同时程的超负荷血糖大鼠脑组织BBB内皮细胞ICAM 1的表达。... 详细信息

为了解超负荷血糖条件下有否血脑屏障 (BBB)内皮细胞ICAM 1的表达 ,本研究采用SD大鼠尾静脉注射链脲霉素的方法 ,建立超负荷血糖模型。以免疫组化方法动态观察了 3天至 6个月不同时程的超负荷血糖大鼠脑组织BBB内皮细胞ICAM 1的表达。发现超负荷血糖 3天时 ,BBB内皮细胞可见有少量ICAM 1表达 ;7～ 1 4天时 ,表达不明显 ;1个月时再次升高 ;3个月时 ,可见大量表达 ,皮层尤为明显 ;6个月时 ,仍保持明显表达 ,底节的表达较 3个月时更加明显 ;正常血糖对照组及阴性对照鼠均未见ICAM 1的表达。提示超负荷血糖能诱导大鼠脑组织BBB内皮细胞ICAM 1的表达 ,尤以长期作用更加明显。

关键词：高血糖症血脑屏障胞间粘附分子1

局灶脑缺血鼠下丘脑室旁核促肾上腺皮质素释放激素的表达

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中华神经科杂志 1998年第3期31卷 156-158页

作者：任明朱克黄旭升张凤英刘洁晓解放军总医院神经内科上海长征医院神经内科

目的探讨脑缺血对下丘脑垂体肾上腺轴的影响。方法动态观察局灶脑缺血鼠下丘脑室旁核（ＰＶＮ）促肾上腺皮质素释放激素（ＣＲＨ）的变化，采用免疫组化方法显示ＰＶＮＣＲＨ的表达。结果正常对照组鼠下丘脑ＰＶＮ有少量ＣＲＨ的表... 详细信息

目的探讨脑缺血对下丘脑垂体肾上腺轴的影响。方法动态观察局灶脑缺血鼠下丘脑室旁核（ＰＶＮ）促肾上腺皮质素释放激素（ＣＲＨ）的变化，采用免疫组化方法显示ＰＶＮＣＲＨ的表达。结果正常对照组鼠下丘脑ＰＶＮ有少量ＣＲＨ的表达，脑缺血２天内下丘脑ＰＶＮ无ＣＲＨ的表达，脑缺血第三天后ＣＲＨ的表达明显增多，且一直持续到脑缺血的第八周，而假手术组４周基本恢复正常。结论脑缺血后下丘脑ＰＶＮ的ＣＲＨ分泌细胞立即被激活；长期脑缺血使ＣＲＨ分泌细胞的活动增强。

关键词：脑缺血下丘脑室旁核 CRH

人参皂甙Rg1对大鼠脑源性神经干细胞分化作用的实验研究

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中国神经精神疾病杂志 2008年第2期34卷 109-111页

作者：崔荣太蒲传强刘洁晓毛燕玲解放军总医院神经内科北京100853

目的探讨人参皂甙Rg1对体外培养大鼠大脑皮质神经干细胞(NSC)分化作用的影响。方法利用无血清DMEM/F12(含20ng/mLbFGF和EGF及2%B27)体外培养技术从新生Wistar大鼠大脑皮质中培养NSC,在NSC分化过程中添加不同剂量(20mg/L、40mg/L和80mg/L... 详细信息

目的探讨人参皂甙Rg1对体外培养大鼠大脑皮质神经干细胞(NSC)分化作用的影响。方法利用无血清DMEM/F12(含20ng/mLbFGF和EGF及2%B27)体外培养技术从新生Wistar大鼠大脑皮质中培养NSC,在NSC分化过程中添加不同剂量(20mg/L、40mg/L和80mg/L)人参皂甙Rg1进行干预,以免疫荧光及细胞化学方法对NSC及其分化后的细胞进行鉴定。结果从大脑皮质分离培养的NSC能够表达巢蛋白(Nestin),并具有分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞的能力。在同一接种密度条件下,不同剂量人参皂甙Rg1干预组的Nestin阳性细胞表达数分别为:20mg/L组:(21·5±2·9);40mg/L组:(18·6±2·4);80mg/L组:(16·7±2·2),与对照组(24·8±3·1)比较明显减少(P<0·05)。而人参皂甙Rg1干预组表达神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、半乳糖苷酶(GalC)的阳性细胞数较对照组明显增加(P<0·05)。结论人参皂甙Rg1可能有促进新生大鼠大脑皮质NSC的分化的作用。

关键词：人参皂甙Rgl 神经干细胞细胞培养细胞分化

人参皂甙Rg1对大鼠局灶性脑缺血脑组织神经干细胞增殖的影响

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解放军医学杂志 2007年第8期32卷 842-845页

作者：崔荣太蒲传强刘洁晓毛燕玲解放军总医院神经内科北京100853

目的观察人参皂甙Rg1对大鼠局灶性脑缺血脑组织神经干细胞增殖的影响,探讨其在脑保护及抗衰老作用中的可能机制。方法取成年雄性Wistar大鼠,用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,采用脉冲标记法,经腹腔注射5′-溴脱氧尿苷(BrdU)... 详细信息

目的观察人参皂甙Rg1对大鼠局灶性脑缺血脑组织神经干细胞增殖的影响,探讨其在脑保护及抗衰老作用中的可能机制。方法取成年雄性Wistar大鼠,用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,采用脉冲标记法,经腹腔注射5′-溴脱氧尿苷(BrdU)标记处于增殖状态的神经干细胞,用免疫组织化学单标及双标免疫荧光技术观察人参皂甙Rg1对局灶性脑缺血后BrdU和巢蛋白(nestin)的免疫活性及nestin/BrdU双标阳性细胞的影响,镜下观察脑内神经干细胞的分布,并计数行定量分析。结果局灶性脑缺血后大鼠室管膜下区及海马齿状回有nestin、BrdU及neatin/BrdU双标免疫阳性细胞分布。应用人参皂甙Rg1后,上述各部位阳性细胞数明显增多,与缺血组之间有显著性差异(P<0.01)。结论人参皂甙Rg1具有促使神经干细胞增殖的能力,这可能是其神经保护及抗衰老作用的机制之一。

关键词：人参皂甙Rgl 溴脱氧尿苷神经干细胞巢蛋白

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中央核肌病16例临床及病理特点

中华神经科杂志 2014年第6期47卷 408-411页

作者：陈婷蒲传强汪茜刘洁晓毛燕玲解放军总医院神经内科北京100853

目的：分析16例中央核肌病的临床、病理资料，探讨其临床、病理特点和诊断价值。方法对患者行详细的神经系统体检，散发患者和具有家族史的先证者行血清肌酸激酶、肌电图和开放式肌肉组织活体检查，肌肉标本行组织学和酶组织化学染色，... 详细信息

目的：分析16例中央核肌病的临床、病理资料，探讨其临床、病理特点和诊断价值。方法对患者行详细的神经系统体检，散发患者和具有家族史的先证者行血清肌酸激酶、肌电图和开放式肌肉组织活体检查，肌肉标本行组织学和酶组织化学染色，分析并总结其临床和病理特点。结果我科病理诊断中央核肌病占所有拟诊肌病患者的比例为0.127％（6/4724）。患者发病年龄包括幼年期至成年期，常以双下肢无力和眼睑下垂为首发症状，临床呈轻至中度肌无力，4例双睑下垂，仅1例眼肌麻痹，1例面肌无力。该组病例包括1个累及11例患者的常染色体显性遗传家系，该家系发病年龄较散发病例晚，临床表现为眼睑下垂、双下肢无力且以远端为著。病理示具中央核的肌纤维明显增多，Ⅰ型肌纤维萎缩占优势，部分可见核周空晕和轮辐状肌纤维。结论本组中央核肌病表现出临床异质性，而病理特征表现为中央核肌纤维比例增多、Ⅰ型肌纤维萎缩占优势等，可为诊断提供依据。

关键词：先天性活组织检查病理中央核肌病

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管聚集肌病的临床与病理特点

中华神经科杂志 2014年第11期47卷 776-780页

作者：钱芸蒲传强金朝毛燕玲刘洁晓解放军总医院神经内科北京100853

目的探讨管聚集肌病的临床与病理特点.方法采用归纳分析法回顾性分析2000年3月至2013年3月在解放军总医院神经内科初步诊断为肌肉病而进行肌肉活体组织检查的2 137例患者,其中有8例被诊断为管聚集肌病.采用肌肉酶组织化学方法及电镜... 详细信息

目的探讨管聚集肌病的临床与病理特点.方法采用归纳分析法回顾性分析2000年3月至2013年3月在解放军总医院神经内科初步诊断为肌肉病而进行肌肉活体组织检查的2 137例患者,其中有8例被诊断为管聚集肌病.采用肌肉酶组织化学方法及电镜技术观察8例管聚集肌病患者的肌肉组织形态结构.结果本组对象管聚集性肌病的检出率为0.374％（8/2 137）.8例患者皆为男性,5例以发作性肌无力起病,3例以慢性进行性肌无力方式起病.8例患者的临床症状均以肌无力为主.4例患者的肌酸激酶轻度升高,另4例肌酸激酶正常.5例患者的肌电图检查呈肌源性损害,3例无特征性改变.8例患者均无家族史.HE染色提示肌纤维的肌膜下可见成堆的管聚集呈小点状、小片状或小圆形的嗜碱性深紫色均匀细小颗粒样物质;改良Gomori三色染色显示为鲜红色,琥珀酸脱氢酶染色显示为略深蓝色酶活性增高区,还原型辅酶Ⅰ四唑氮还原酶染色显示为明显的深蓝色区域,提示为酶活性明显增强,非特异性酯酶染色显示为深褐色;油红“O”、高碘酸Schiff反应、苏丹黑B、酸性磷酸酶和ATP酶染色则未显示出特殊改变;电镜观察到肌膜下有大量管聚集现象.结论管聚集肌病患者的肌肉酶组织化学及电镜技术具有特殊表现,是诊断本病的关键技术.

关键词：肌病,结构性,先天性活组织检查显微镜检查,电子