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自噬调控T淋巴细胞功能在疾病发生发展中作用的研究进展

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中国肿瘤生物治疗杂志 2021年第3期28卷 215-224页

作者：杨艺刘沁颖郑秋红陈立福州大学生物和医药技术研究院福建福州350002 福建省肿瘤医院&福建医科大学附属肿瘤医院福建省肿瘤生物治疗重点实验室福建福州350014

自噬作为一种重要的胞内代谢途径,已被证实普遍存在于多种细胞中,其功能的异常易引发癌症、肝病、糖尿病和心脏病等疾病。自噬在T淋巴细胞自身发育分化及调节T淋巴细胞免疫功能方面也扮演着重要角色,T淋巴细胞自噬异常会造成其免疫功能... 详细信息

自噬作为一种重要的胞内代谢途径,已被证实普遍存在于多种细胞中,其功能的异常易引发癌症、肝病、糖尿病和心脏病等疾病。自噬在T淋巴细胞自身发育分化及调节T淋巴细胞免疫功能方面也扮演着重要角色,T淋巴细胞自噬异常会造成其免疫功能紊乱进而引发炎症、感染和自身免疫性等疾病。鉴于自噬在调控T淋巴细胞功能和疾病发生发展中的重要作用,本文重点阐述自噬调控T淋巴细胞稳态、存活、增殖、衰老、代谢、免疫功能,以及在包括肿瘤在内的多种疾病发生发展中作用的研究进展。

关键词： T淋巴细胞功能自噬免疫抗肿瘤疾病

IL-7的诱导表达增强靶向GPC3 CAR-T细胞的增殖及体外抗肿瘤活性

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中国肿瘤生物治疗杂志 2024年第10期31卷 951-956页

作者：龚福生陈珊珊郑秋红刘沁颖福建医科大学肿瘤临床医学院福建省肿瘤医院福建省肿瘤生物治疗重点实验室福建福州350014 福建医科大学附属厦门弘爱医院细胞治疗研究中心福建厦门361000

目的:探讨IL-7的诱导表达对靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)嵌合抗原受体基因修饰T淋巴细胞(CAR-T细胞)的增殖和体外抗肿瘤活性的影响。方法:通过无缝克隆将GPC3 CAR序列片段插入GV400载体的Bam HⅠ/Eco RⅠ位置,构建第二代CAR慢病毒载体... 详细信息

目的:探讨IL-7的诱导表达对靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)嵌合抗原受体基因修饰T淋巴细胞(CAR-T细胞)的增殖和体外抗肿瘤活性的影响。方法:通过无缝克隆将GPC3 CAR序列片段插入GV400载体的Bam HⅠ/Eco RⅠ位置,构建第二代CAR慢病毒载体GPC3-BBZ及GPC3-BBZ-NFAT-IL-7,以293T细胞包装相应的慢病毒载体后,感染人T细胞制备CAR-T细胞。实验分为未转导T细胞(NT)组、GPC3-BBZ CAR-T细胞组、GPC3-BBZ-NFAT-IL-7 CAR-T细胞组。采用流式细胞术检测各组CAR-T细胞中CAR的表达水平,qPCR法检测经GPC3蛋白激活的CAR-T细胞中IL-7 m RNA的表达水平,细胞计数法检测CAR-T细胞在GPC3抗原刺激下的增殖能力,ELISA检测CAR-T细胞在受到肿瘤细胞刺激后IL-7、IFN-γ和TNF-α的分泌水平。应用实时细胞分析(RTCA)技术检测CAR-T细胞对人肝癌Huh-7细胞的杀伤作用。结果:成功构建慢病毒载体GPC3-BBZ和GPC3-BBZ-NFAT-IL-7,制备出靶向GPC3的CAR-T细胞。经GPC3抗原激活后,GPC3-BBZ-NFAT-IL-7 CAR-T细胞可有效表达IL-7 mRNA(P<0.01),其表现出更强的增殖能力(P<0.05)。与GPC3-BBZ CAR-T细胞相比,GPC3-BBZ-NFAT-IL-7 CAR-T细胞与GPC3阳性靶细胞Huh-7细胞共培养后,分泌更高水平的IL-7、IFN-γ和TNF-α(P<0.01或P<0.001)。RTCA结果显示,GPC3-BBZ-NFAT-IL-7 CAR-T细胞对GPC3阳性Huh-7细胞的杀伤活性显著高于GPC3-BBZ CAR-T细胞(P<0.05)。结论:成功制备可诱导表达IL-7的靶向GPC3的CAR-T细胞,IL-7的诱导表达增强靶向GPC3 CAR-T细胞的免疫活性,在体外展现出较强的肿瘤细胞杀伤能力。

关键词：肝细胞癌磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 CAR-T细胞 IL-7 诱导表达

RNA干扰抑制γ突触核蛋白的表达对人结肠癌细胞株增殖和侵袭能力的影响

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中华胃肠外科杂志 2016年第4期19卷 446-452页

作者：黄峰许少华叶青郑秋红许扬梅刘沁颖福建省肿瘤医院胃肠肿瘤外科福州350014

目的探讨抑制γ突触核蛋白（SNCG）基因表达对结肠癌细胞株生长及侵袭能力的影响。方法针对SNCG基因的mRNA序列（GENBANK：***003087．2），设计合成干扰SNCG基因表达的RNA（siRNA）有效靶序列及其DNA，与慢病毒骨架质粒GV115（hU6-MCS-... 详细信息

目的探讨抑制γ突触核蛋白（SNCG）基因表达对结肠癌细胞株生长及侵袭能力的影响。方法针对SNCG基因的mRNA序列（GENBANK：***003087．2），设计合成干扰SNCG基因表达的RNA（siRNA）有效靶序列及其DNA，与慢病毒骨架质粒GV115（hU6-MCS-CMV—EGFP）连接并包装．获得实验组慢病毒LV-SNCG-RNAi-EGFP，并用相同步骤构建阴性对照组慢病毒LV-SNCG-NCIEGFP。用两种重组慢病毒分别感染人结肠癌SW1116细胞（实验组：RNAi组，阴性对照组：NC组），荧光显微镜下观察感染后shRNA荧光标签（EGFP）的表达情况；利用实时定量聚合酶链反应（***）检测RNAi组与NC组细胞中SNCG基因表达mRNA的干扰效果；以野生型SW1116细胞为空白对照（野生型组），用Westernblot方法检测RNAi组、NC组和野生型组细胞中SNCG基因表达蛋白的干扰效果；CCK．8细胞增殖实验、软琼脂克隆形成实验和Transwell侵袭实验．用于评价RNA干扰SNCG基因表达对RNAi组与NC组细胞的体外生长及侵袭能力的抑制作用。结果成功构建并获得了稳定表达重组慢病毒的SW1116细胞株，表达慢病毒LV-SNCG-RNAi-EGFP及LV-SNCG-NC-EGFP滴度均为8×10^8Tu／ml。RNAi组SNCG基因相对表达水平（2-△△△）为0．114±0．030，低于于对照NC组的SNCG基因相对表达水平（2-△△Q：1．009±0．161），差异有统计学意义（P=0．009）；RNAi组SNCG基因干扰效率达到76．8％。RNAi组的SNCG蛋白相对表达量为12．001±2．884，低于NC组（蛋白相对表达量：32．445±4，731）和野生型组（蛋白相对表达量：34．308±6．920），差异有统计学意义（P=0．018，P=0．020）。CCK-8细胞增殖实验显示，干扰SNCG基因表达后，RNAi组细胞的体外增殖能力从48h开始受到明显抑制，并持续到120h，与NC组及野生型组差异具有统计学意义（P=0．036）。RNAi组克隆明显偏小，RNAi组平均直径（0．582±0．103）mm，低于NC组[（1．863±0．316）mm]及野生型组[（1．749±0．525）mm]，差异具有统计学意义（P=0．003）；RNAi组克隆形成率为（17．1±3．5）％，低于NC组[（36．5±4．3）％]及野生型组[（33．8±3．9）％]，差异具有统计学意义（尸=O．013，P=0．019）。RNAi组的侵袭个数为（37．4±9．3）个，较NC组[（112．3±8．6）个]及野生型组[（100．0±0．0）个]明显减少，差异具有统计学意义（P=0．008，P=0．007）。而NC组及野生型组在细胞增殖能力、克隆形成数量及侵袭能力方面的差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论SNCG基因表达在结肠癌细胞的生长和侵袭能力方面具有重要作用。

关键词：结肠肿瘤 SNCG基因慢病毒载体 RNA干扰基因转染

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数据可视化的色彩与形式

科技与创新 2018年第6期 39-42页

作者：刘沁颖郁舒兰南京林业大学江苏南京210000

随着信息技术的发展,网民数量急剧增加,网络给人们的生活带来了极大的便利,生活中越来越多的痕迹被网络记录成了数据,大数据的兴起风靡了各行各业。可视化始于计算机图形学,如今与大数据结合,能够帮助人们整理和分析数据信息,显示信息... 详细信息

随着信息技术的发展,网民数量急剧增加,网络给人们的生活带来了极大的便利,生活中越来越多的痕迹被网络记录成了数据,大数据的兴起风靡了各行各业。可视化始于计算机图形学,如今与大数据结合,能够帮助人们整理和分析数据信息,显示信息分布、挖掘信息规律、预判未来的发展。可视化以视觉传达,通过人们对图像信息的理解,使大脑快速发现并记录信息内容。当然,科学的可视化方案会使数据分析事半功倍。简要阐述了可视化的涵义,介绍了其色彩与形式,以帮助人们高效率地设计可视化方案。

关键词：大数据可视化色彩数据展现形式

气相色谱-质谱联用法测定液体调味料中4种氯丙醇的含量

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中国酿造 2023年第1期42卷 226-230页

作者：刘沁颖侯靖毛燕妮卢跃鹏周晓婷武汉食品化妆品检验所湖北武汉430040 国家市场监管重点实验室(食用油质量与安全) 湖北武汉430040

选取酱油、鱼露与水解植物蛋白液为试验样品,建立了液体调味料中3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)、2-氯-1,3-丙二醇(2-MCPD)、1,3-二氯-2-丙醇(1,3-DCP)和2,3-二氯-1-丙醇(2,3-DCP)的气相色谱-质谱联用(GC-MS)检测方法。以样品加入稳定同位素... 详细信息

选取酱油、鱼露与水解植物蛋白液为试验样品,建立了液体调味料中3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)、2-氯-1,3-丙二醇(2-MCPD)、1,3-二氯-2-丙醇(1,3-DCP)和2,3-二氯-1-丙醇(2,3-DCP)的气相色谱-质谱联用(GC-MS)检测方法。以样品加入稳定同位素内标后进行固相支持液液萃取,以10 mL正己烷淋洗,15 mL乙酸乙酯洗脱,氮吹近干后,七氟丁酰基咪唑衍生,产物经DB-5MS柱分离,质谱采用选择离子监测模式检测。结果表明,四种氯丙醇在0.005~1.6μg/mL质量浓度范围内呈良好线性关系,3-MCPD、2-MCPD、1,3-DCP和2,3-DCP的检出限分别为2.0μg/kg、2.0μg/kg、5.0μg/kg、5.0μg/kg,定量限分别为5.0μg/kg、5.0μg/kg、10μg/kg、10μg/kg,加标回收率在82.4%~107.0%范围内,精密度实验结果的相对标准偏差(RSD)在0.85%~8.58%范围内。该方法前处理简便,定量准确可靠,可用于液体调味料中四种氯丙醇含量的检测。

关键词：液体调味料氯丙醇气相色谱-质谱联用法

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Crm1在中心体的定位以及功能研究

Crm1在中心体的定位以及功能研究

市售植物油中氯丙醇酯和缩水甘油酯污染水平研究

中国细胞生物学学会第九次会员代表大会暨青年学术大会

作者：刘沁颖于晶莹张传茂北京大学生命科学学院

Crm1是真核细胞中最重要的出核转运蛋白之一,主要负责带有出核转运信号(nuclear export signal,NES) 序列蛋白的出核转运。由 Crm1介导的蛋白质出核转运过程包括几个步骤：首先,Crm1识别 NES 货物蛋白并与之结合,进一步与 Ran-GTP 结合... 详细信息

Crm1是真核细胞中最重要的出核转运蛋白之一,主要负责带有出核转运信号(nuclear export signal,NES) 序列蛋白的出核转运。由 Crm1介导的蛋白质出核转运过程包括几个步骤：首先,Crm1识别 NES 货物蛋白并与之结合,进一步与 Ran-GTP 结合而形成出核转运复合体;出核转运复合体在 Crm1的介导下,通过

关键词： Crm 1 gamma tubulin 中心体 NES

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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中国油脂 2024年第9期49卷 85-91页

作者：侯靖卢跃鹏周晓婷赵礼阳刘沁颖刘梦婷武汉食品化妆品检验所武汉430012 国家市场监管重点实验室(食用油质量与安全) 武汉430012 武汉药品医疗器械检验所武汉430075

为了调查市售植物油中氯丙醇酯和缩水甘油酯污染情况并为市场监管和行业质量提升提供技术依据,采用~(13)C同位素稀释-气相色谱-串联质谱法,对市售13种共48批次植物油样品中3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)酯、2-氯-1,3-丙二醇(2-MCPD)酯和缩水... 详细信息

为了调查市售植物油中氯丙醇酯和缩水甘油酯污染情况并为市场监管和行业质量提升提供技术依据,采用~(13)C同位素稀释-气相色谱-串联质谱法,对市售13种共48批次植物油样品中3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)酯、2-氯-1,3-丙二醇(2-MCPD)酯和缩水甘油酯含量进行检测,采用气相色谱-质谱法对植物油中豆甾二烯含量进行检测,分析氯丙醇酯、缩水甘油酯和豆甾二烯含量之间的相关性,并考察精炼工序(脱色、脱臭)对植物油中氯丙醇酯和缩水甘油酯含量的影响。结果表明:所采用的氯丙醇酯和缩水甘油酯检测方法平均回收率为102.0%~110.4%,相对标准偏差小于或等于11.10%,且该方法测试结果均为满意;39批次样品中3-MCPD酯含量超过100μg/kg,范围为126~4252μg/kg,超过欧盟限量的有1批次,超标率为2.1%;32批次样品中2-MCPD酯含量超过100μg/kg,范围为101~2192μg/kg;34批次样品中缩水甘油酯含量超过100μg/kg,范围为109~4593μg/kg,超过欧盟限量的有6批次,超标率为12.5%;未精炼油脂(豆甾二烯含量小于0.1 mg/kg)中氯丙醇酯与缩水甘油酯含量均在定量限(100μg/kg)以下;3-MCPD酯含量与2-MCPD酯含量之间具有明显的相关性,而与缩水甘油酯、豆甾二烯含量之间不具有相关性,缩水甘油酯含量与豆甾二烯含量之间同样不具有相关性;精炼过程,特别是脱臭过程会导致氯丙醇酯与缩水甘油酯的产生。综上,市售植物油中缩水甘油酯污染情况相对较为严重,其污染原因与植物油精炼过程有关,需要引起重视。

关键词：植物油氯丙醇酯缩水甘油酯油脂精炼豆甾二烯

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Ran GTP酶调控细胞核膜重建的分子机理研究

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Ran GTP酶调控细胞核膜重建的分子机理研究

NTF2在核膜重建和核膜损伤修复过程中的功能研究

中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会

作者：卢智刚马妍刘沁颖张传茂北京大学生命科学学院北京大学生命科学学院北京大学生命科学学院北京大学生命科学学院

细胞核膜是细胞核与细胞质之间的界膜,对细胞生命活动起着重要的调控作用。在细胞周期过程中,核膜呈现解聚和重建等动态变化。核膜在细胞分裂前期解体成小膜泡和一些可溶性成分,分散到细胞质中;在分裂后期和末期,这些核膜成分又回到染... 详细信息

细胞核膜是细胞核与细胞质之间的界膜,对细胞生命活动起着重要的调控作用。在细胞周期过程中,核膜呈现解聚和重建等动态变化。核膜在细胞分裂前期解体成小膜泡和一些可溶性成分,分散到细胞质中;在分裂后期和末期,这些核膜成分又回到染色质表面,重新构建核膜。原癌基因产物Ras类蛋白Ran(Ras-like nuclear protein)是近期新发现的一种细胞周期和细胞核物质运输调控蛋白。它是一种GTP酶,分子量较小(25Kd),大量分布于细胞核内。Ran分解GTP 分子需要RanGAP蛋白的刺激和RanBP1蛋白辅助。GTP分解后,在Ran上残余的GDP分子在另一种核蛋白RCC1的调节下被置换为另一个GTP分子,并开始新一轮的GTP分解活动。此外,还有多种Ran结合蛋白,或者作为Ran GTP酶的调控因子,或者作为其效应因子。这些蛋白主要包括 Importin α Importin β、NTF2、CRM1、nucleoporins等等。Ran通过分解GTP, 调节细胞的许多生命活动,如细胞核物质运输、纺锤体组装、核膜重建等。我们近期对Ran调控核膜装配的分子机制作了进一步研究。我们发现,另一种核蛋白和核纤层受体蛋白LBR在Ran调控的核膜装配过程中对核膜前体成分在染色质表面的募集也起极其重要的调节作用。该核蛋自在细胞核解体时与染色质分离,在细胞核重建开始启动时再与染色质结合。LBR 在核膜崩解时,作为膜泡结合蛋白,与小膜泡共存,分散到细胞质中;在核膜重建时,与小膜泡一起回到染色质表面。我们的结果显示,LBR主要通过与importin β,进一步促进核膜重建。根据实验结果我们提出,在核膜重建开始时,该核蛋白与染色质结合,而小膜泡上的LBR与importin β结合, 可能通过importin α,将小膜泡带到染色质表面,与该核蛋白。通过Ran分解GTP等过程,介导小膜泡融合成核膜和核孔复合体组装。本文还将在报道我们新的工作的基础上,对该领域的研究进展作一综合性讨论。

关键词：细胞核物质运输分子机理研究 Ran GTP

来源： cnki会议 cnki会议评论

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NTF2在核膜重建和核膜损伤修复过程中的功能研究