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家蚕微粒子虫极管蛋白4和5的鉴定及极管蛋白4在侵染中的作用

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家蚕微粒子虫极管蛋白4和5的鉴定及极管蛋白4在侵染中的作用

作者：刘柯柯西南大学

学位级别：硕士

微孢子虫是一类专性细胞内寄生的单细胞真核生物,寄主广泛,能感染几乎所有无脊椎动物和脊椎动物,乃至人类。家蚕微粒子虫是最早被鉴定的微孢子虫之一;作为家蚕最主要的病害,它对世界蚕丝行业造成了巨大的经济损失。因此,检测与防控家蚕... 详细信息

微孢子虫是一类专性细胞内寄生的单细胞真核生物,寄主广泛,能感染几乎所有无脊椎动物和脊椎动物,乃至人类。家蚕微粒子虫是最早被鉴定的微孢子虫之一;作为家蚕最主要的病害,它对世界蚕丝行业造成了巨大的经济损失。因此,检测与防控家蚕微粒子虫对蚕业生产具有重要意义。微孢子虫具有一个非常特殊的极管构造,它是微孢子虫特有的侵染结构,由多种极管蛋白组成;极管不溶于SDS、1%Triton X-100、1-10%HO和三氯甲烷等,可溶于β-巯基乙醇、DTT等还原剂,其独特的溶解特性与极管上蛋白组分特性密切相关。迄今微孢子虫极管蛋白在侵染中的作用机制尚不明确。本研究以家蚕微粒子虫假定极管蛋白4(NbPTP4)和假定极管蛋白5(NbPTP5)作为研究对象,对其定位特征、宿主互作靶蛋白的筛选及其在侵染中的作用进行分析,为阐明微孢子虫侵染宿主的分子机制奠定基础。本研究首先对NbPTP4和NbPTP5的序列进行了生物信息学分析,并通过重组融合蛋白的原核表达与纯化、多克隆抗体制备,进行了免疫荧光定位分析;然后利用免疫共沉淀的方法对NbPTP4与宿主互作靶蛋白进行了筛选,最后对NbPTP4与其互作靶蛋白在微孢子虫侵染过程中的作用进行研究。主要结果为以下四个方面:1.家蚕微粒子虫NbPTP4和NbPTP5的生物信息学分析通过与海伦微孢子(E.hellem)、兔脑炎微孢子虫(E.cuniculi)PTP4和PTP5的同源序列比对,成功获得了两个编码家蚕微粒子虫假定极管蛋白NbPTP4和NbPTP5的基因NbPTP4和NbPTP5。生物信息学分析发现:NbPTP4编码222个氨基酸,预测分子质量25.3 kDa、pI 7.56,无信号肽,不存在任何已知功能域;NbPTP5编码271个氨基酸,预测分子质量32.5 kDa、pI 8.68,无信号肽,无已知功能域。此外,NbPTP4中含有5个半胱氨酸,其中4个位点在其他种属微孢子虫PTP4中高度保守,NbPTP5中含有11个半胱氨酸,推测半胱氨酸可通过形成分子间或分子内二硫键在极管蛋白之间的相互作用中发挥重要作用。2.NbPTP4和NbPTP5的定位特征分析以家蚕微粒子虫基因组为模板,成功构建了pET-32a(+)-NbPTP4和pET-32a(+)-NbPTP5原核表达载体,分别制备相应蛋白的多克隆抗体。Western blot结果表明,制备的抗体可以与原核表达的NbPTP4、NbPTP5及家蚕微粒子虫孢子总蛋白中的NbPTP4、NbPTP5特异地发生免疫反应。间接免疫荧光实验(Indirect immunofluorescence assay,IFA)结果显示两种蛋白的抗体均能与发芽孢子的极管特异结合;免疫电镜(IEM)观察发现anti-NbPTP4的免疫胶体金颗粒能定位于家蚕微粒子虫的极管上。以上结果表明,NbPTP4和NbPTP5为家蚕微粒子虫的极管蛋白。不同于前期研究中NbPTP1、NbPTP2和NbPTP3的定位特征,NbPTP4和NbPTP5定位于极管的前端和锚定盘周围的位置,暗示NbPTP4和NbPTP5可能在极管与宿主细胞互作、极管弹出等方面发挥重要功能。3.NbPTP4细胞结合能力分析及宿主互作靶蛋白筛选与鉴定微孢子虫在未侵染宿主时极管能够稳定、规则地盘绕在孢子内;当外界环境发生改变时,孢子能迅速弹出极管,刺破宿主细胞膜,孢原质能通过中空极管运输到宿主细胞中。极管在微孢子虫侵染宿主过程中与宿主直接接触,它极有可能与宿主之间存在互作关系。细胞结合实验结果显示:NbPTP4重组融合蛋白能与BmE细胞粘附。利用Co-IP方法寻找与NbPTP4互作的宿主靶蛋白,通过对蛋白质谱结果分析,筛选到与NbPTP4互作的宿主靶蛋白可能为家蚕的Tubulin类蛋白、BmHSC70-4等。对Bmtubulinα的定位进行分析,发现Bmtubulinα在未透化处理和透化处理的细胞膜上均有荧光信号,说明Bmtubulinα在宿主细胞内外膜上均有表达。后续利用酵母双杂交、Far-western和Co-IP方法,证实NbPTP4与家蚕Bmtubulinα蛋白存在互作关系。推测家蚕微粒子虫弹出极管后,定位于极管前端NbPTP4可以与宿主细胞表面的Bmtubulinα发生相互作用,在微孢子虫的侵染过程中发挥作用。4.NbPTP4及其宿主互作靶蛋白对家蚕微粒子虫侵染的影响为了进一步研究NbPTP4与Bmtubulinα在微孢子虫侵染宿主过程中的作用,分别利用抗体封闭实验及蛋白竞争实验,证明了当NbPTP4和Bmtubulinα的相互作用受到影响时,家蚕微粒子虫对宿主的侵染率会受到抑制,进一步确认了家蚕微粒子虫NbPTP4与家蚕宿主Bmtubulinα在微孢子虫侵染过程中的重要性。综上所述,本研究对家蚕微粒子虫极管蛋白4(NbPTP4)和极管蛋白5(NbPTP5)进行了鉴定,并对极管蛋白4(NbPTP4)的功能进行了分析,发现了与家

关键词：家蚕微粒子虫极管蛋白4 极管蛋白5 定位宿主靶蛋白

静配中心开展药师干预对促进静脉药物合理使用的效果分析

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山东医学高等专科学校学报 2023年第1期45卷 53-55页

作者：刘柯柯刘莉南阳市第一人民医院河南南阳473000

静脉输注是临床常用治疗手段,药物配置是关键环节。静脉配制中心(Pharmacy intravenous admixture service,PIVAS)是医院药品服务中心,是保障临床用药质量、用药安全性的重要场所。由于工作人员较多,药物配置流程复杂,每日需要配置大量... 详细信息

静脉输注是临床常用治疗手段,药物配置是关键环节。静脉配制中心(Pharmacy intravenous admixture service,PIVAS)是医院药品服务中心,是保障临床用药质量、用药安全性的重要场所。由于工作人员较多,药物配置流程复杂,每日需要配置大量处方,工作量大,容易出现药物配置差错或药物浪费。此外,不合理处方也会增加配药工作量,并可能再次造成配药不合理,恶性循环,增加用药安全隐患。

关键词：静脉药物药物配制药师

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基于深度图像的驾驶人姿态识别

基于深度图像的驾驶人姿态识别

作者：刘柯柯南京理工大学

学位级别：硕士

驾驶人姿态识别是车辆辅助驾驶领域中的一个热门研究内容,是人体姿态识别的一个重要实际应用,研究人体姿态识别方法可以对该实际问题提供借鉴。传统的人体姿态识别是以可见光图像或视频序列为研究对象,提取传统人工特征,训练姿态分类器... 详细信息

驾驶人姿态识别是车辆辅助驾驶领域中的一个热门研究内容,是人体姿态识别的一个重要实际应用,研究人体姿态识别方法可以对该实际问题提供借鉴。传统的人体姿态识别是以可见光图像或视频序列为研究对象,提取传统人工特征,训练姿态分类器或者回归器。然而,可见光图像易受人体外貌差异、环境光照变化的影响,人工设置特征费时费力,难以在如驾驶室环境的实际场景中得到很好的应用。本文主要研究基于深度图像的驾驶人姿态识别,充分利用深度图像的颜色无关特性和包含的深度信息,研究卷积神经网络自动学习层次性特征的特点,实现基于深度图像和深度卷积网络的驾驶人姿态识别方法。本文具体研究内容如下:（l）提出了一种基于深度图像和深度卷积神经网络的驾驶人关节点识别方法。卷积神经网络由于局部连接和权值共享的特性,对于复杂的人体外貌姿态、环境光照变化具有不变性,深度图像具有颜色无关性且能提供场景目标深度信息。因此本文利用ToF相机获取驾驶人姿态深度图像,设计了一种基于LeNet网络的深度卷积神经网络,提取图像层次结构的特征,实现驾驶人关节点识别。通过实验证明该网络能够有效地定位驾驶人关节点,较其它网络有更高的精确度。（2）设计了一种利用计算机动画软件3DSMAX构建虚拟驾驶人姿态深度图像数据集的方法,用于解决缺少大量的附有人体关键点标注的驾驶人姿态深度图像的问题。本文利用3DSMAX仿真驾驶室环境,批量渲染虚拟驾驶人姿态图像,构建虚拟驾驶人姿态深度图像数据集、彩色图像数据集以及相应的标签信息。此数据集构建方式不仅节省了人力,同时降低了由于人的主观因素而带来的误差。本文构建的数据集可用于驾驶人部位检测、姿态识别、头部分析等多种视觉任务。（3）实现了一种基于深度迁移学习的驾驶人头部分析框架,用于解决大量虚拟驾驶人图像数据的特性与真实场景存在较大差异的问题。利用深度网络的自学习特性,寻找源域与目标域的公共特征子空间,最小化源域和目标域在网络最高层输出的分布差异,根据少量目标域样本迭代更新深度迁移网络,所得模型用于目标域具有很好的迁移效果。（4）设计了一款基于深度图像的驾驶人姿态识别系统,以驾驶人姿态深度图像为输入,能够自动批量地识别驾驶人关节点、头部姿态以及面部特征点。

关键词：驾驶人姿态识别深度图像卷积神经网络虚拟数据深度迁移网络

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个人网店的法律属性及其规则适用

个人网店的法律属性及其规则适用

作者：刘柯柯西南政法大学

学位级别：硕士

网络购物因为快速便捷的电子商务而成为越来越多的人青睐的购物方式,其具有便利性、多样性、灵活性、跨越时空性、成本低等特征。随着电子商务产业的不断发展,个人网店引发的纠纷不断增多,但因为我国对个人网店保护的法律规定仍是空白,... 详细信息

网络购物因为快速便捷的电子商务而成为越来越多的人青睐的购物方式,其具有便利性、多样性、灵活性、跨越时空性、成本低等特征。随着电子商务产业的不断发展,个人网店引发的纠纷不断增多,但因为我国对个人网店保护的法律规定仍是空白,个人网店的法律属性依然无法确定,导致涉及个人网店的法律纠纷得不到合理的解决,司法机关也经常陷入无法律条文适用的尴尬境地。本文对个人网店的物权客体属性进行论证,确定出网络环境下个人网店的物权适用规则,以保障个人网店所有人的合法权益。本文除引言外,正文分为六个部分:第一部分,个人网店的概念与特征。本部分界定了个人网店的概念,并分析了个人网店的法律特征。通过对个人网店所呈现的特点进行归纳,进而可以将本文研究的个人网店的概念限定为:未经工商登记的自然人,以营利为目的,经网络运营商的审查和认可后在第三方交易平台上开设的用于商品交易或提供服务的网店。此外,个人网店还呈现出虚拟财产的一般法律特征:虚拟性、具有信用价值与财产价值、可支配性、可流通性。第二部分,个人网店的法律属性分析。着重介绍了个人网店法律属性争议及其司法实践,分析了确定个人网店物权客体属性的制度意义。现今学术界对于个人网店之法律属性有着较大的理论争议,而在诸多学说中最主要的是商事主体说、合同之债说、物权说之间的分歧。文章从个人网店具有支配性和排他性、个人网店具有独立的经济价值两个方面对物权说的合理性进行论证。第三部分,个人网店的归属规则。无论是司法实务界还是学术界对于个人网店归属于网络运营商还是店主的意见分歧很大。作者从动产理论、所有权归属条款两个个方面进行剖析,认为个人网店的所有权属于店主。第四部分,个人网店的转让规则。既然个人网店作为物权客体,那么其自由处分权应该受到保护,《服务协议》中的禁止转让条款因为违反诚实信用原则而显示公平应为无效。个人网店因为转让而可能产生损害网络交易信用体系与消费者权益的风险因为网店公示和费者保障服务而得到约束。第五部分,个人网店的权利保护规则。个人网店作为物权客体,在其受到侵害时,必须赋予店主享有返还原物请求权、排除妨碍和消除危险请求权、恢复原状请求权、损害赔偿请求权等物权请求权。第六部分,结论。个人网店属物权客体,个人网店的支配性和独立的经济价值是其物权客体属性的直接表现。将个人网店确定为物权客体更具有深远的制度意义,能够更加全面有效保护当事人权利,是物权客体的扩展,也是从司法实践中得出的有益结论。

关键词：个人网店法律属性规则适用

我国赡养协议养老模式的适用与完善——以裁判文书的量化分析为基础

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郑州轻工业大学学报（社会科学版） 2022年第6期23卷 67-73页

作者：王阁刘柯柯郑州轻工业大学政法学院河南郑州450001

赡养协议养老是我国存在已久且被立法明确认可的一种养老模式,但是通过对中国裁判文书网上“赡养协议纠纷”类文书的梳理,发现赡养协议养老模式在现实运行中存在着适用范围较小、适用效果有待提升、适用程度参差不齐等问题。应通过加强... 详细信息

赡养协议养老是我国存在已久且被立法明确认可的一种养老模式,但是通过对中国裁判文书网上“赡养协议纠纷”类文书的梳理,发现赡养协议养老模式在现实运行中存在着适用范围较小、适用效果有待提升、适用程度参差不齐等问题。应通过加强甄别该养老模式的适用对象,强化相应监督机制,以及加强宣传等完善举措,进一步推动我国赡养协议养老模式的适用。

关键词：赡养协议养老模式裁判文书

具有超高延性的再生微粉水泥基复合材料的力学性能

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材料导报 2019年第8期33卷 1328-1334页

作者：余江滔田力康王义超刘柯柯同济大学土木工程学院上海200092

用废弃建筑垃圾的再生微粉作为粉煤灰的替代品,进行了超高延性水泥基体复合材料的研发。研究了不同的再生微粉替代率下材料的抗拉、抗压性能,并探索了再生微粉对材料强度的影响规律。轴向拉伸试验表明,采用再生微粉制备的超高延性水泥... 详细信息

用废弃建筑垃圾的再生微粉作为粉煤灰的替代品,进行了超高延性水泥基体复合材料的研发。研究了不同的再生微粉替代率下材料的抗拉、抗压性能,并探索了再生微粉对材料强度的影响规律。轴向拉伸试验表明,采用再生微粉制备的超高延性水泥基体复合材料具有稳定的应变硬化和多裂缝特性。材料的抗拉强度介于4～5 MPa之间,是普通混凝土的2～3倍;材料拉伸应变范围为7%～9%,具有超高的拉伸变形能力。轴向压缩试验表明,圆柱体试件的抗压强度为21～23 MPa,超过峰值强度后,材料在80%的峰值强度处的应变分别为18. 28‰和26. 18‰,说明材料具有较高的受压变形能力。此外,为了研究再生微粉的掺入对基体断裂韧度和纤维桥接力的影响,进行了三点弯曲切口梁试验和单裂缝试验,结果表明,随着再生微粉替代率的增加,基体的断裂韧度基本保持不变而纤维的桥接能力增强。最终,通过应变强化准则PSH criterion对材料的应变强化性能进行了解释和评估。本工作通过试验验证了再生微粉用于制备超高延性水泥基复合材料的可行性。

关键词：应变强化再生粉末水泥基复合材料

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蔗糖脂肪酸酯改性黏土制备水土保持喷膜研究

中国水土保持 2022年第7期 45-48页

作者：刘柯柯渠永平山西水务物资贸易有限公司山西太原030051 中北大学材料科学与工程学院山西太原030051

针对黄土高原生产建设项目水土流失治理难题,利用蔗糖脂肪酸酯改性黏土制备水土保持喷膜材料,并测试了其保水性能、力学性能、抗老化性能和模拟植草性能。结果表明:当蔗糖脂肪酸酯与黏土的质量比为2∶3时,材料综合性能最佳,其抗压强度为... 详细信息

针对黄土高原生产建设项目水土流失治理难题,利用蔗糖脂肪酸酯改性黏土制备水土保持喷膜材料,并测试了其保水性能、力学性能、抗老化性能和模拟植草性能。结果表明:当蔗糖脂肪酸酯与黏土的质量比为2∶3时,材料综合性能最佳,其抗压强度为1.6 MPa,老化500 h后强度损失率和质量损失率分别为12%和2.5%,草籽发芽率为86%。该材料固土保水性能较优,且具有良好的施工性能,可为黄土高原生产建设项目水土流失治理提供一种新材料。

关键词：水土保持水分蔗糖脂肪酸酯改性黏土

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度汛方案编制解析

山西水利 2019年第3期35卷 34-35,52页

作者：刘柯柯山西水务物资贸易有限公司山西太原030002

度汛方案的编制对确保汛期水利工程人财物的安全起着十分重要的作用。本文结合山西昔阳松溪供水工程近三年度汛方案编制的经验,对度汛方案的编制目的、编制依据、编制原则、编制内容及编制需要注意的事项进行了解剖分析,厘清了方案编制... 详细信息

度汛方案的编制对确保汛期水利工程人财物的安全起着十分重要的作用。本文结合山西昔阳松溪供水工程近三年度汛方案编制的经验,对度汛方案的编制目的、编制依据、编制原则、编制内容及编制需要注意的事项进行了解剖分析,厘清了方案编制的思路和方法,可为其它类似工程度汛方案编制提供参考。

关键词：度汛方案供水工程编制松溪供水工程昔阳县

网络虚拟财产法律属性及民法保护——以案例为基础的实证研究

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洛阳理工学院学报（社会科学版） 2019年第2期34卷 42-48页

作者：刘柯柯西南政法大学民商法学院重庆401120

关于网络虚拟财产的法律属性,学术界已有诸多探讨,但多停留在未由实践加以佐证的理论研究层面。从司法实践的角度对网络虚拟财产的概念外延、法律属性认定、民法保护方法及裁判者之判定缘由进行类型化分析,回归财产渊源和本质,对其财产... 详细信息

关于网络虚拟财产的法律属性,学术界已有诸多探讨,但多停留在未由实践加以佐证的理论研究层面。从司法实践的角度对网络虚拟财产的概念外延、法律属性认定、民法保护方法及裁判者之判定缘由进行类型化分析,回归财产渊源和本质,对其财产属性予以证成。在网络虚拟财产的保护方面,摒弃传统单一的保护方法论,构建物权法、债法、侵权责任法等三位一体的网络虚拟财产保护框架,以最大限度地保护权利人之合法权益。

关键词：网络虚拟财产法律属性民法保护价值认定