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作者：刘有旺山东农业大学

学位级别：硕士

为了寻找一种能够快速诊断奶牛白色念珠菌性乳腺炎的方法和有效治疗该病的中药方剂,本研究进行了共四个部分的试验,第一部分根据白色念珠菌ITS1-ITS2部分的保守序列设计了一对特异性引物,建立了奶牛白色念珠菌性乳腺炎的PCR检测方法;第... 详细信息

为了寻找一种能够快速诊断奶牛白色念珠菌性乳腺炎的方法和有效治疗该病的中药方剂,本研究进行了共四个部分的试验,第一部分根据白色念珠菌ITS1-ITS2部分的保守序列设计了一对特异性引物,建立了奶牛白色念珠菌性乳腺炎的PCR检测方法;第二部分通过中药药敏试验,本着中医辩证施治的原理,自拟了治疗奶牛白色念珠菌性乳腺炎的纯中药方剂“乳炎消”;第三部分则对筛选出的中药方剂的急性毒性和细胞毒性进行了检测;第四部分以奶山羊为实验动物模型进行了中药治疗白色念珠菌性乳腺炎的研究,并进行了“乳炎消”方剂的临床治疗试验。第一部分用PCR方法诊断奶牛白色念珠菌性乳腺炎的研究查阅了GenBank已发表的ITS1-ITS2序列,根据白色念珠菌ITS1-ITS2部分的保守序列设计了一对特异性引物,对患牛乳样中分离到的4珠白色念珠菌进行了PCR扩增,结果表明,扩增产物均为500bp,检测工作仅耗时2.5h;同时,对照试验表明,该对引物不能扩增大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌等常见的乳房炎致病细菌。敏感性实验结果表明,该方法的敏感性可达到1.25×103 CFU/mL。对50份患牛乳样进行了细菌学培养和生化实验检测及PCR检测,结果传统方法检测到白色念珠菌的阳性率为16%,而PCR方法检测到白色念珠菌的阳性率为18%。传统方法检测为阳性的样品,PCR检测全部为阳性。因此,用PCR方法检测奶牛白色念珠菌性乳腺炎是一种快速、敏感和特异的方法,对兽医临床中白色念珠菌性乳腺炎的诊断具有一定的参考价值。第二部分治疗奶牛酵母菌性乳腺炎中药方剂的筛选本着中医辨症施治的原理,以调气活血、消肿散淤、提高机体免疫力为原则,自拟了三组中药方剂,进行了单味中药及三组自拟中药方剂的体外平板抑菌试验,各单味中药结果表明:黄连和黄芩对4种酵母菌的抑制作用均较强;而蒲公英、连翘、鱼腥草对酵母菌没有抑制作用;苦参、升麻、姜黄、仙鹤草对不同的酵母菌有一定的抑制作用。三组方剂结果表明:方剂1的抑菌效果明显好于其它两组方剂。在方剂1的基础上调整筛选组方,最后筛选出一种纯中药方剂,定名为“乳炎消”,并进行了MIC(最低抑菌浓度)试验。结果表明,该方剂对白色念珠菌等奶牛酵母菌性乳腺炎的主要致病菌具有较好的抑菌效果,MIC值较低,平均为0.116g/mL。第三部分中药“乳炎消”方剂毒性检测为了确保临床用药安全,通过不同的试验途径和方法测定方剂“乳炎消”对小鼠的急性毒性和对L929(小鼠成纤维母细胞)细胞的毒性。体内急性毒性试验进行了半数致死量(LD50)和最大耐受量(MTD)为的检测,用40g/kg体重剂量的乳炎消方剂给小鼠灌胃,1周后小鼠未发生死亡,再在小鼠可接受的最大容积下,给小鼠灌服日累积剂量为120g/kg体重的乳炎消方剂进行MTD试验,1周后处死观察其病理变化。体外细胞毒性试验采用形态学观察和MTT两种方法,测试乳炎消方剂在L929体外培养中的最大无毒浓度(TC0)。结果表明:(1)乳炎消方剂毒性很低,其LD50超过40g/kg体重,MTD超过120g/kg体重。根据毒性分级标准,可认为中药方剂在短期内使用是安全的。(2)体外培养结果显示,乳炎消方剂对L929细胞的最大无毒浓度达1.56g/L。第四部分“乳炎消”方剂的治疗效果研究本试验以30头健康泌乳奶山羊为试验动物,将其分为三组:正常对照组、发病用药组和发病末用药组,每组10只。用白色念珠菌菌液1mL从乳头管注入发病用药组和发病末用药组奶山羊的乳室,成功地诱发奶山羊急性乳炎腺的发生, 48h后出现红、肿、热、痛等炎症反应,并伴有精神萎靡,食欲下降等症状。并从患羊乳汁中分离到白色念珠菌。用乳炎消方剂给发病用药组灌服(2mL/kg体重),每天一次,连用5天后发病用药组羊只有8只康复,2只症状明显减轻。而发病未用药的羊只症状加重或无明显改善,用药前后分别采集三组奶山羊的血样和乳样进行了血液流变学分析、淋巴细胞转化试验和乳成份分析,血液流变学指标的测定表明,治疗前发病羊只的全血粘度、全血还原粘度、血浆粘度、红细胞聚集指数和刚性系数均显著高于正常对照组(P<0.05),治疗后发病用药组上述指标基本恢复正常,而发病末用药组的各项指标仍显著高于正常对照组(P<0.05)。淋巴细胞转化试验表明,治疗前发病羊只的淋巴细胞转化率显著低于正常对照组(P<0.05),治疗后发病用药组这一指标基本恢复正常,而发病未用药组仍显著高于正常对照组。乳成分对比分析发现,治疗前发病羊只的乳糖、乳脂肪显著低于正常对照组(P<0.05),而乳蛋白、体细胞数显著升高(P<0.05),治疗后发病用药组上述指标基本恢复正常,而发病末用药组无明显变化。证明该中药方剂能够有效治疗白色念珠菌性乳腺炎。

关键词：白色念珠菌乳腺炎中药方剂快速诊断

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苦瓜降血糖作用的研究进展

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中国老年学杂志 2011年第7期31卷 1269-1270页

作者：包万员丁超刘有旺泰山医学院山东泰安271000

苦瓜,别名凉瓜。属于葫芦科苦瓜属的一年生攀缘性草本植物。苦瓜果实中含有各种营养物质,是瓜类蔬菜中含维生素C最高的一种,具有清热解毒、清心明目、清热解暑、治胃通气的功效。现代研究表明,苦瓜还有降血糖、降血脂、提高免疫力、调... 详细信息

苦瓜,别名凉瓜。属于葫芦科苦瓜属的一年生攀缘性草本植物。苦瓜果实中含有各种营养物质,是瓜类蔬菜中含维生素C最高的一种,具有清热解毒、清心明目、清热解暑、治胃通气的功效。现代研究表明,苦瓜还有降血糖、降血脂、提高免疫力、调节内分泌、抗氧化、抗肿瘤等作用。其中苦瓜的降血糖作用越来越受到人们的关注。

关键词：苦瓜降血糖皂甙机制

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关于高校实验教学中安全问题的思考

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中国学校卫生 2009年第8期30卷 766-767页

作者：刘有旺方茜李雅林泰山医学院医学检验与预防医学系山东泰安271000

我国实施科教兴国战略后,高校规模迅速扩大,在校人数剧增,进入实验室学习的学生人数不断增加.随之而来的是实验设备数量大幅增加,使用率也很高,加速了实验设备老化,增加了事故隐患.同时管理松懈、操作不规范等原因,造成物理、化学、生... 详细信息

我国实施科教兴国战略后,高校规模迅速扩大,在校人数剧增,进入实验室学习的学生人数不断增加.随之而来的是实验设备数量大幅增加,使用率也很高,加速了实验设备老化,增加了事故隐患.同时管理松懈、操作不规范等原因,造成物理、化学、生物安全事故时有发生,这就使得实验室的安全管理比以往任何时候都显得更加重要.如何强化高校师生实验室的安全意识,增强对实验室安全管理工作重要性的认识,认真分析存在的不安全因素,采取各种必要措施,防患于未然,确保师生安全与实验设备安全,是一个值得认真研究的问题.

关键词：实验室技术和方法教学安全学生保健服务

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奶牛酵母菌性乳腺炎的诊治试验

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安徽农业科学 2008年第21期36卷 9060-9060,9090页

作者：曹思军刘有旺朱瑞良山东省邹城市田黄镇政府山东邹城273506 山东农业大学山东泰安271018

[目的]采用中药方剂治疗经多种抗生素治疗无效的奶牛乳腺炎。[方法]从牛奶中分离病原真菌,进行药敏试验,确诊后使用自制"乳消汤"开展临床治疗。[结果]20例奶牛中,19例确诊为酵母菌性乳腺炎,经治疗后除1例热带念珠菌病例外全部痊愈。[结... 详细信息

[目的]采用中药方剂治疗经多种抗生素治疗无效的奶牛乳腺炎。[方法]从牛奶中分离病原真菌,进行药敏试验,确诊后使用自制"乳消汤"开展临床治疗。[结果]20例奶牛中,19例确诊为酵母菌性乳腺炎,经治疗后除1例热带念珠菌病例外全部痊愈。[结论]该研究中自制中药方剂"乳消汤"可用于酵母菌性乳腺炎的治疗。

关键词：酵母菌乳腺炎中药方剂

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Apelin/APJ系统研究进展

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第四军医大学学报 2009年第20期30卷 2248-2251页

作者：李雅林白波陈京刘有旺泰山医学院基础部神经生物学实验室山东泰安271000 山东农业大学生命科学学院山东泰安271018 济宁医学院神经生物学实验室山东济宁272000

Apelin肽家族是由单个基因编码并能够激活7次跨膜G蛋白偶联受体APJ的一组内源性活性肽.Apelin/APJ系统在心血管调节中具有降低血压、强的心脏收缩作用;在中枢神经系统中具有调节垂体激素释放、调节摄食、摄水、体液平衡等作用;作为脂肪... 详细信息

Apelin肽家族是由单个基因编码并能够激活7次跨膜G蛋白偶联受体APJ的一组内源性活性肽.Apelin/APJ系统在心血管调节中具有降低血压、强的心脏收缩作用;在中枢神经系统中具有调节垂体激素释放、调节摄食、摄水、体液平衡等作用;作为脂肪细胞分泌的一个新的脂肪因子(adipo-kine),可调节胰岛素的分泌;而且,最新的研究表明,apelin能够促进血管的生成.Apelin/APJ系统有望成为心衰、高血压等心血管疾病以及肥胖相关疾病的治疗靶点.这篇综述的目的是总结apelin/APJ系统的特点及功能,为进一步研究该系统提供理论依据和线索,为开发新的治疗性的药物提供有吸引力的靶点.

关键词： Apelin 脂肪因子血管生成心血管系统中枢神经系统

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IMB模型在肺结核废弃物危害控制中的应用

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中国卫生统计 2016年第3期33卷 441-442页

作者：刘有旺曹爽李程李士雪张乐泰山医学院公共卫生学院 271016 济南市儿童医院山东大学公共卫生学院

目的确定居家治疗肺结核患者对废弃物危害控制行为的形成路径。方法以IMB模型为指导,建立废弃物危害控制信息、动机、行为技巧和行为之间的结构方程。结果行为技巧对废弃物危害控制行为有直接效应,效应值为0.634,信息和动机通过行为技... 详细信息

目的确定居家治疗肺结核患者对废弃物危害控制行为的形成路径。方法以IMB模型为指导,建立废弃物危害控制信息、动机、行为技巧和行为之间的结构方程。结果行为技巧对废弃物危害控制行为有直接效应,效应值为0.634,信息和动机通过行为技巧对行为产生间接效应,效应值分别为0.210和0.299。结论可通过对信息、动机和行为技巧的干预,提高肺结核患者对废弃物危害的控制水平。

关键词：肺结核废弃物危害控制 IMB模型结构方程模型

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畜禽及水环境大肠杆菌mcr-1基因的流行病学调查与耐药性分析

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中国动物传染病学报 2024年第4期32卷 139-144页

作者：王新兴李刚李冬刘有旺山东第一医科大学(山东省医学科学院)公共卫生与健康管理学院济南250117

调查不同来源大肠杆菌mcr-1基因的携带率,大肠杆菌的耐药性和mcr-1基因阳性大肠杆菌的耐药谱,为控制mcr-1流行和多粘菌素的耐药性提供借鉴。采用PCR方法,对实验室前期分离的鸡源、兔源、猪源、屠宰场源、城市污水源、河流和野生鱼源大... 详细信息

调查不同来源大肠杆菌mcr-1基因的携带率,大肠杆菌的耐药性和mcr-1基因阳性大肠杆菌的耐药谱,为控制mcr-1流行和多粘菌素的耐药性提供借鉴。采用PCR方法,对实验室前期分离的鸡源、兔源、猪源、屠宰场源、城市污水源、河流和野生鱼源大肠杆菌进行mcr-1基因筛查,并计算携带率,同时检测了8种耐药基因的携带率。对所分离的不同来源大肠杆菌进行氨苄西林、环丙沙星、氟苯尼考、萘啶酸、四环素、头孢他啶、卡那霉素、庆大霉素、阿米卡星、链霉素、阿莫西林、氨曲南和多粘菌素13种常用药物的耐药性分析,计算耐药率、总体耐药率并分析mcr-1阳性大肠杆菌的耐药谱。共采集326份大肠杆菌样本,其中mcr-1阳性大肠杆菌45份,平均携带率为13.8%。鸡源大肠杆菌mcr-1基因携带率为16.3%(16/98),兔源为14.5%(8/55),猪源为8.9%(4/45),屠宰场源为10%(4/40),城市污水源为26%(13/50),河流和野生鱼源均为0。大肠杆菌对抗生素普遍耐药,其中对阿莫西林和氨苄西林的耐药率普遍较高,而对阿米卡星和多粘菌素的耐药率较低。mcr-1携带与多粘菌素的耐药性基本相符,其余药物的总体耐药比例均高于耐药基因的携带率,这可能与同一抗生素的多种耐药机制有关。mcr-1阳性大肠杆菌具有比mcr-1阴性大肠杆菌更高的多药物耐药性。畜禽源大肠杆菌具有较高的mcr-1基因携带率和较广泛的耐药性,应该降低和限制抗生素的使用量,控制耐药基因和耐药性的蔓延。

关键词：大肠杆菌 mcr-1 抗生素耐药性

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pRluc-KOR真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

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第四军医大学学报 2009年第18期30卷 1644-1646页

作者：李雅林白波陈京刘有旺刘海青于鹏丽泰山医学院基础部神经生物学实验室山东泰安271000 山东农业大学生命科学学院山东泰安271018 济宁医学院神经生物学实验室山东济宁272000

目的:构建与海肾萤光素酶(Rluc)融合的κ型阿片受体(KOR)真核表达载体,用于生物发光共振能量转移法(BRET)检测apelin受体和KOR之间的相互作用.方法:以质粒pcDNA3.1-KOR为模板,PCR方法扩增KOR.扩增的KOR用NotⅠ和XhoⅠ双酶切,同时用这两... 详细信息

目的:构建与海肾萤光素酶(Rluc)融合的κ型阿片受体(KOR)真核表达载体,用于生物发光共振能量转移法(BRET)检测apelin受体和KOR之间的相互作用.方法:以质粒pcDNA3.1-KOR为模板,PCR方法扩增KOR.扩增的KOR用NotⅠ和XhoⅠ双酶切,同时用这两种酶双酶切质粒pRluc.将这两种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌Top10.挑取菌落培养,提取质粒,行酶切鉴定及测序.将测序正确的重组载体用脂质体法转染人胚胎肾(HEK293)细胞,免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察.结果:扩增出了1条1143 bp的片段,与预期的KOR大小相符,质粒酶切结果显示pRluc-KOR被切成2条片段,其中一条为pRluc载体大小,另一条为目的片段大小.经测序鉴定,序列与GenBank(NM_000912)中的序列高度同源.共聚焦显微镜观察显示,阿片受体主要表达在细胞膜上.结论:构建成功了pRluc-KOR重组表达载体,此表达载体可用于检测KOR与apelin受体或与其他受体之间的相互作用.

关键词： κ型阿片受体真核表达载体构建生物发光共振能量转移

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pRluc-hKOR-pcDNA3.1真核重组质粒的构建及在HEK293细胞中的表达

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中国病理生理杂志 2009年第10期25卷 2078-2080页

作者：李雅林白波陈京刘有旺刘海青路海泰山医学院山东泰安271000 山东农业大学山东泰安271018 济宁医学院山东济宁272000

目的:构建与海肾荧光素酶(renilla luciferase,Rluc)融合的人κ型阿片受体(kappa opioid receptor,KOR)的真核表达载体,用于生物发光共振能量转移法检测人KOR与其它受体间的相互作用。方法:以质粒pcD-NA3.1-hKOR为模板,PCR方法扩增人KO... 详细信息

目的:构建与海肾荧光素酶(renilla luciferase,Rluc)融合的人κ型阿片受体(kappa opioid receptor,KOR)的真核表达载体,用于生物发光共振能量转移法检测人KOR与其它受体间的相互作用。方法:以质粒pcD-NA3.1-hKOR为模板,PCR方法扩增人KOR。扩增的人KOR用NotⅠ和XhoⅠ双酶切,同时用这2种酶双酶切质粒pRluc-pcDNA3.1。然后将这2种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌Top10。挑取菌落培养,提取质粒,然后进行酶切鉴定,最后进行测序。将测序正确的重组载体用脂质体法转染人胚胎肾(human embryonic kidney293,HEK293)细胞,免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察。结果:扩增出了1条约1.2kb的片段,与预期的人KOR大小相符,质粒酶切结果显示重组质粒pRluc-hKOR-pcDNA3.1被切成2条片段,其中1条为pRluc-pcDNA3.1载体大小,另1条为目的片段大小。经测序鉴定,序列与GenBank(NM_000912)中的序列高度同源。共聚焦显微镜观察显示,阿片受体主要表达在细胞膜上。结论:构建成功了pRluc-hKOR-pcDNA3.1重组真核表达载体,此表达载体可用于检测人KOR与其它受体之间的相互作用。

关键词：受体,阿片样,κ 重组真核表达载体 HEK293细胞

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治疗酵母菌病中药方剂的筛选

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中国病原生物学杂志 2010年第9期5卷 660-662页

作者：刘有旺王冬梅赵莹李冬泰山医学院公共卫生学院山东泰安271000

目的筛选治疗酵母菌病的中药方剂。方法采用打孔法做蒲公英、连翘等单味中药和3种方剂的平板抑菌试验,确定最终中药组方,定名为"酵母散",然后做方剂"酵母散"的最低抑菌浓度(MIC)试验。结果除蒲公英、连翘、鱼腥草外,其余各单味中药及3... 详细信息

目的筛选治疗酵母菌病的中药方剂。方法采用打孔法做蒲公英、连翘等单味中药和3种方剂的平板抑菌试验,确定最终中药组方,定名为"酵母散",然后做方剂"酵母散"的最低抑菌浓度(MIC)试验。结果除蒲公英、连翘、鱼腥草外,其余各单味中药及3组方剂对4种酵母均有不同程度的抑制作用,以方剂1的抑菌效果较好;"酵母散"方剂对4种主要致病性酵母菌MIC值平均为0.116 g/ml。结论 "酵母散"方剂能抑制主要致病性的酵母菌的生长。

关键词：酵母菌病中药方剂筛选

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