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拟南芥TOR抑制剂抗性突变体的筛选及初步定位

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拟南芥TOR抑制剂抗性突变体的筛选及初步定位

作者：刘晓霏西南大学

学位级别：硕士

TOR(雷帕霉素的靶标)激酶在酵母、植物、动物和人类进化中是一个保守的主调节因子,它整合营养和能量信号来促进细胞增殖和生长,TOR信号通路与生物的很多生理机能密切相关,如细胞生长、细胞分裂、细胞的新陈代谢等进程都有着密不可分的... 详细信息

TOR(雷帕霉素的靶标)激酶在酵母、植物、动物和人类进化中是一个保守的主调节因子,它整合营养和能量信号来促进细胞增殖和生长,TOR信号通路与生物的很多生理机能密切相关,如细胞生长、细胞分裂、细胞的新陈代谢等进程都有着密不可分的关系。通过对出芽酵母抗雷帕霉素的遗传突变筛选,TOR首先被鉴定出来。雷帕霉素是一种能够阻断人类T细胞激活和增殖的免疫抑制剂,雷帕霉素可以与FKBP12结合,形成RAPA-FKBP12二元复合物,然后RAPA-FKBP12复合物作用于TOR的FRB结构域以此抑制TOR激酶活性。虽然在酵母中鉴定出了两个TOR基因,但随后在拟南芥、绿藻、大多数动物和人类中只鉴定出了一个TOR基因。拟南芥和人类的TOR基因具有高度相似的氨基酸序列,特别是在蛋白激酶区(75%的相似性),表明这些蛋白激酶具有相似的功能和蛋白基底。在动物和酵母中关于TOR信号通路已经进行了深入的研究,但由于拟南芥FKBP12无法与雷帕霉素形成二元聚合物,导致雷帕霉素不能与拟南芥TOR的FRB结构域结合,从而不能抑制TOR蛋白的活性,所以关于拟南芥的TOR通路研究较少,本文通过甲基磺酸乙酯(EMS)诱导Columbia-0(Col-0、Col,WT)型拟南芥筛选出了具有TOR抑制剂抗性的突变体,对这些突变体进行表型观察分析和基因定位等相关研究。主要结论如下:1.突变体筛选结果实验中所用Columbia(Col)拟南芥都已转入酵母中的FKBP12蛋白,转入植株被命名为BP12-2。TOR的一代抑制剂为雷帕霉素(RAP),二代抑制剂为KU、AZD、Torin1等,分别用RAP和AZD将TOR的FRB结构域和Kinase结构域抑制,用EMS诱变Col型拟南芥,利用RAP+AZD双重抑制TOR活性,筛选出9个对RAP+AZD抑制剂不敏感的突变体,命名为TOR抑制剂抗性突变体(tor-inhibitor-insensitive,trin),分别为trin-1、trin-2、trin-6、trin-8、trin-10、trin-12、trin-16、trin-17、trin-19。2.表型观察结果9个突变体生理成熟后,所表现出的外观性状有所不同,且大致分为三类:(1)野生表型单株:trin-1、trin-6、trin-8、trin-10、trin-12;(2)双果荚、生长缓慢单株:trin-2;(3)双果荚、不育单株:trin-16、trin-17、trin-19。3.钾敏感度实验结果用不同浓度钾培养基进行鉴定,将钾元素浓度按照MS培养基的配方从低到高设置了7个等级,分别是0%、10%、20%、30%、40%、50%和100%,每个突变体在不同钾浓度下又设置了两次重复,对9个突变体做不同浓度钾培养基的直接培养和先在正常1/2MS培养基上铺种,长10天左右转苗到不同浓度梯度钾培养基的间接培养实验,9个突变体中发现了有对低钾或无钾敏感的突变体trin-2突变体。4.遗传分析统计和观察突变体和野生型Lansberg(Ler)杂交组合中的F1代和F2的植株中在培养基上的表型,发现所有的F1表现正常,都表现出萎蔫枯黄,表明9个突变体均为隐性突变;而F2代中的苗子在筛选培养基上出现正常生长和萎蔫枯黄不正常生长两种表型,统计不同杂交组合的表型,?2测验显示正常植株与突变植株的分离比均符合3:1,表明每个突变体的突变性状均受1对隐性核基因控制。5.初步定位结果利用突变体和野生型Lansberg(Ler)杂交组合中F2群体对TOR抑制剂抗性系列突变体进行定位。结果表明,trin-1定位在第3条染色体上9.3M(1M=1024kb,1kb=1024b)处的ciw11分子标记附近;trin-2定位在第5条染色体上13.4M处的PHYC和16.3M处的ciw9分子标记之间;trin-6定位在第1条染色体上20.0M处的nga280和26.1M处的nga111分子标记之间;trin-8定位在第3条染色体上18.0M处的ciw4和22.0M处的nga6分子标记之间;trin-10定位在第4条染色体0.7M处的ciw5和7.5M处的ciw6分子标记之间;trin-12定位在第4条染色体0.7M处的ciw5和7.5M处的ciw6分子标记之间;trin-16定位在第5条染色体上13.4M处的PHYC和16.3M处的ciw9分子标记之间;trin-17定位在第5条染色体上13.4M处的PHYC和16.3M处的ciw9分子标记之间;trin-19定位在第5条染色体上13.4M处的PHYC和16.3M处的ciw9分子标记之间。6.候选基因分析将初步定位后确定的分子标记之间的序列进行了测序,确定了各突变体的候选基因范围。其中trin-1的候选基因为8个;trin-2的候选基因为5个;trin-6的候选基因

关键词： TOR 突变体图位克隆 SSR 钾

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高速铁路综合接地系统牵引回流表征参数研究

高速铁路综合接地系统牵引回流表征参数研究

作者：刘晓霏西南交通大学

学位级别：硕士

高速铁路综合接地系统对钢轨电位具有重要的抑制作用,是牵引供电系统安全运行的关键保障。随着我国高速铁路列车的提速和数字化交通的发展,钢轨电位抬升对铁路工作人员及沿线设备的危害性愈加凸显,对综合接地系统回流性能提出了更高要求... 详细信息

高速铁路综合接地系统对钢轨电位具有重要的抑制作用,是牵引供电系统安全运行的关键保障。随着我国高速铁路列车的提速和数字化交通的发展,钢轨电位抬升对铁路工作人员及沿线设备的危害性愈加凸显,对综合接地系统回流性能提出了更高要求,施工验收和运行监测环节中均需对其进行检测评估。然而,当前铁路行业相关标准未对检测评估中的回流参数作出明确规定,实际现场多依赖于工程经验进行参数及阈值确定。综合接地系统工程验收和运营维护缺乏依据,给高速铁路的安全性评估带来极大不便。因此本文将追本溯源,基于牵引回流和钢轨电位的关联性,建立牵引回流特性表征参数,为综合接地系统的回流参数应用提供理论指导,对积极推动高速铁路标准化体系构建具有重要的意义。本文首先根据牵引回流路径方向,将回流特性研究划分为分流特性研究和散流特性研究。在分流异常对系统安全性影响分析的基础上定义了分流系数,并将其选为分流特性的表征参数,建立了长直接地导体模型对参数计算方法进行修正;分析了综合接地系统散流机理,基于综合地线散流率和钢轨电压的映射关系定义了有效散流长度,并将其选为散流特性的表征参数,在考虑综合接地系统影响的最大钢轨电压计算基础上,建立了该参数的计算方法。其次基于多导体传输线理论,建立了全并联AT牵引供电系统10导体链式电路模型,上行及下行均包含T母线(接触线和承力索)、F母线(正馈线)、R母线(双轨)、PW线和综合地线。建立过程中以PW线和综合地线的横向连接间距为子网划分标准,根据回流分析需求对导体进行了等值合并简化,合并后不影响模型计算精度,由此建立的链式电路模型能够较好地适用于回流分析。综合地线采用埋地裸导体模型,便于分析其电流分布情况。最后基于MATLAB/Simulink对正常运行状态下的综合接地系统回流导体进行了电流分布特性分析,揭示了不同AT供电回路中各回流导体的分流系数变化规律,结合综合地线的电流时域响应特性和散流机理求取了综合接地系统的有效散流长度。利用建立的表征参数计算方法进行了对比计算和误差分析,并对其适用性进行了验证。阐释了系统结构设计对回流特性参数的影响规律;根据检测环节对运行条件的要求,分析了负荷分布和故障工况对系统回流特性的影响。

关键词：高速铁路综合接地系统牵引回流链式网络钢轨电位

代谢工程改造谷氨酸棒状杆菌生产手性2,3-丁二醇及乙偶姻

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代谢工程改造谷氨酸棒状杆菌生产手性2,3-丁二醇及乙偶姻

作者：刘晓霏天津大学

学位级别：硕士

2,3-丁二醇和乙偶姻作为重要的平台化合物,在食品、医药、能源和其它行业具有广泛应用。谷氨酸棒状杆菌是非致病性的革兰氏阳性菌,氧气充足的条件下菌体密度较高,底物消耗快,产物生产率较高。本文从野生型Corynebacterium glutamicum AT... 详细信息

2,3-丁二醇和乙偶姻作为重要的平台化合物,在食品、医药、能源和其它行业具有广泛应用。谷氨酸棒状杆菌是非致病性的革兰氏阳性菌,氧气充足的条件下菌体密度较高,底物消耗快,产物生产率较高。本文从野生型Corynebacterium glutamicum ATCC 13032和敲除了ldhA、pta、ack基因的菌株SAT7出发,经过代谢工程改造,使谷氨酸棒状杆菌具有生产两种手性2,3-丁二醇和乙偶姻的能力。为消除谷棒自身butA基因的影响,重点考察人工引入基因的功效,首先敲除butA得到WT△butA/SAT7△butA。进而引入*** 168乙偶姻合成途径alsSD操纵子,得到乙偶姻生产菌株CGF3-10。为生产D-2,3-丁二醇而引入*** 168的D-2,3-丁二醇脱氢酶编码基因bdhA,构建菌株CGF11-18;为生产meso-2,3-丁二醇而引入***的meso-2,3-丁二醇脱氢酶编码基因budC,构建菌株CGF19-26。最后,为探究谷棒自身的编码meso-2,3-丁二醇脱氢酶的基因butA的作用,构建过表达载体,得到菌株CGF27-28。利用辅因子工程调节菌株胞内的氧化还原力。Lactobacillus brevis CICC 6239的nox基因,编码合成的NADH氧化酶使NADH氧化为NAD+,理论上可为细胞提供乙偶姻合成所需氧化力。*** W1485的udhA基因,编码合成的还原力平衡过程转氢酶可使磷酸戊糖途径中合成的NADPH转化为NADH,理论上可提高2,3-丁二醇合成所需还原力。通过对工程菌株在不同培养基中的发酵表征,证明了谷氨酸棒状杆菌能够有效合成2,3-丁二醇和乙偶姻。CGF5,在丰富培养基中经过50 h时消耗20 g/L葡萄糖,生产了5.94 g/L乙偶姻,达到理论最大得率的60%,具有0.12 g/Lh生产力。CGF18,在基本盐培养基中经过30 h生产了4.65 g/L D-2,3-丁二醇,达到理论最大得率的46%,生产力0.15 g/Lh。CGF28,在添加了0.5%酵母抽提物的基本盐培养基中经过30 h获得了4.73 g/L的meso-2,3-丁二醇,生产力为0.16 g/Lh,达到理论最大得率的47%。实验证明,谷氨酸棒状杆菌具备良好的2,3-丁二醇和乙偶姻合成能力。编码合成D-2,3-丁二醇脱氢酶的外源基因bdhA在谷氨酸棒状杆菌表达效果良好。而编码合成meso-2,3-丁二醇脱氢酶的外源基因budC,表达效果不如谷棒本身具有的butA基因。

关键词： 2,3-丁二醇乙偶姻谷氨酸棒状杆菌代谢工程

《多语世界的话语与权力》（第一章）翻译实践报告

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《多语世界的话语与权力》（第一章）翻译实践报告

作者：刘晓霏郑州大学

学位级别：硕士

此次翻译材料选自阿德里安·布莱克利奇所著的《多语世界的话语与权力》一书中的第一章。所选材料探讨了多语世界的语言、意识形态和权力的关系,作者通过英国社会动乱和语言政策立法等实例拓宽批评话语分析理论的应用,来理解不同社会中... 详细信息

此次翻译材料选自阿德里安·布莱克利奇所著的《多语世界的话语与权力》一书中的第一章。所选材料探讨了多语世界的语言、意识形态和权力的关系,作者通过英国社会动乱和语言政策立法等实例拓宽批评话语分析理论的应用,来理解不同社会中话语和社会实践之间的关系,进而探索英国多语言环境中政治和社会问题,这对于促进社会发展和文明的进步具有重要意义。翻译实践报告主要由四个部分组成。第一部分是翻译任务描述,包括作者相关简介、材料来源和选材意义。第二部分为翻译过程描述,包括译前准备、翻译重点及译文的审校、润色和定稿。第三部分是翻译案例分析。笔者从词语、句子和语篇三个层面选取翻译实践材料中的典型译例,根据卡特琳娜·莱斯对文本类型的分类,所选文本为信息型文本,在“直译为主,意译为辅”的翻译方法指导下,总结归纳出翻译中的典型案例。词语方面主要运用词义选择、词语增减和词类转换技巧。句子方面主要运用长句拆分、短句合并、语态转换和句式重构等技巧。语篇层面主要运用增加逻辑连词和还原代词的先行语的翻译技巧。第四部分是笔者对此次翻译实践的反思和总结。通过此次翻译实践,笔者对话语分析有了更详细具体的了解,加深了对多语世界话语和权力之间关系的认识,同时也意识到翻译时了解相关专业背景知识的重要性。

关键词：批评话语分析权力多语社会信息型文本

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新常态下我国商业银行信用风险实证研究

新常态下我国商业银行信用风险实证研究

作者：刘晓霏浙江大学

学位级别：硕士

以我国进入新常态为背景,本文以我国16家上市商业银行作为研究对象,基于2012年第一季度至2015年第四季度的样本银行的财务数据和股票交易数据,采用KMV模型对样本银行的信用风险进行了实证分析。实证结果表明,从纵向的时间维度看,在宏观... 详细信息

以我国进入新常态为背景,本文以我国16家上市商业银行作为研究对象,基于2012年第一季度至2015年第四季度的样本银行的财务数据和股票交易数据,采用KMV模型对样本银行的信用风险进行了实证分析。实证结果表明,从纵向的时间维度看,在宏观层面上大型国有银行的违约距离波动性和全国股份制商业银行和城市商业银行相比是最大的,而全国股份制商业银行和城市商业银行的变化范围相对较小。而在2015年上半年,这三类银行的违约距离在大小和变化趋势方面都比较接近,都是在较低的水平上缓慢运行,本文认为股市暴涨暴跌可能是2015年上市银行违约距离变小的结果也是原因。从横向上看,中国的大型国有商业银行的违约距离远远高于同时期的全国股份制商业银行和城市商业银行,而理论预期的违约概率却远远低于同时期的另两类银行,这反映了我国大型国有商业银行的信用风险控制能力较强,原因可能是大型国有银行的资本规模庞大,局部风险可以依靠足量资本进行稀释。此外,大型国有银行的存款的市场占有率高,创新业务不够丰富,因而降低了信用风险。对于全国股份制商业银行和城市商业银行,二者在违约距离和预期违约概率之间都相差不大,但后者总体上略高于前者。前者面对的市场竞争压力更大,客户群体不够稳定,资产质量有待提高,而后者在城市商业银行中经营效益最好,资产质量相对较高,总体的抗风险能力较强。此外,本文分别从国民经济发展周期、商业银行内部管理机制、政府干预行为和金融监管机构的监管效率等四个角度出发分析了商业银行信用风险水平的影响因素。

关键词：商业银行信用风险 KMV模型违约距离

膨化和酶解对玉米醇溶蛋白结构的影响及酶解物的抗氧化活性

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膨化和酶解对玉米醇溶蛋白结构的影响及酶解物的抗氧化活性

作者：刘晓霏齐齐哈尔大学

学位级别：硕士

玉米黄粉是玉米湿法淀粉生产的主要副产物，玉米黄粉深加工有重要的工业价值。本文以玉米黄粉为原料，采用膨化、蛋白酶酶解和微生物发酵等不同条件进行处理，提取玉米醇溶蛋白，并对不同条件下的醇溶蛋白进行分离纯化，进而研究其表面... 详细信息

玉米黄粉是玉米湿法淀粉生产的主要副产物，玉米黄粉深加工有重要的工业价值。本文以玉米黄粉为原料，采用膨化、蛋白酶酶解和微生物发酵等不同条件进行处理，提取玉米醇溶蛋白，并对不同条件下的醇溶蛋白进行分离纯化，进而研究其表面形貌。最后，采用多种体外实验方法和动物实验评价了酶解后玉米黄粉的抗氧化活性，这些数据结果可为玉米黄粉的深加工提供理论依据。本论文的主要内容如下： 1.分别提取出未处理、膨化、膨化及复合蛋白酶酶解、膨化及碱性蛋白酶酶解和膨化及纳豆杆菌发酵条件下的玉米醇溶蛋白，并采用纳豆杆菌对经膨化处理的玉米黄粉进行摇瓶发酵，筛选取出优良菌株，通过测定培养液中可溶性蛋白含量和抗氧化活力及凝胶电泳确定发酵时间为4小时，实验范围内纳豆杆菌发酵膨化后的玉米黄粉，液体发酵的工艺条件为：初始pH7.0，34℃，转速200r/min，培养4h，培养液可溶性蛋白含量和抗氧化活力分别达12.74mg/mL和725.71U/mL。 2.将不同方法提取的醇溶蛋白分别用一步反相色谱进行分离纯化，比较不同反相柱，不同梯度洗脱对玉米醇溶蛋白分离的影响，实验结果表明不同处理方法使玉米醇溶蛋白结构发生不同程度的改变;同时，采用两步分离法分离提取醇溶蛋白，首先通过凝胶柱去除色素和部分杂质，再进行反相色谱分离，通过电泳分析可以分离出纯度更高的醇溶蛋白,分析醇溶蛋白分子量范围在20.1KDa-31.0KDa内。 3.采用扫描电镜（SEM）和原子力显微镜（AFM）分别观察不同条件下分离的醇溶蛋白的表面形貌。扫描电镜成像图表明不同方法处理玉米黄粉对提取的醇溶蛋白表面结构有很大的影响。膨化处理能造成玉米醇溶蛋白的疏松;酶解可使醇溶蛋白向圆球状发展，在一定的时间内，酶解时间越长球状结构越圆，而且大球体蛋白越容易被水解成小球体。而且原子力显微镜也可推断出不同方法处理对玉米醇溶蛋白表面结构的作用，还可以初步推断出玉米醇溶蛋白成模性的形成。 4.体内外实验结果表明玉米黄粉本身具有一定的抗氧化活性，经过酶解处理可以增强其体外抗氧化活性，清除DPPH自由基率可达到67.68%。动物实验结果也表明酶解后的玉米肽具有较强的抗氧化活性，小鼠喂食一定量的玉米肽可极显著增加小鼠血浆SOD活性和肝脏GSH-Px活性，降低MAD浓度。由此可知，实验结果表明玉米肽是一种优良的抗氧化剂。

关键词：玉米醇溶蛋白纳豆杆菌分离纯化表面形貌抗氧化活性

振动时效原理分析及在大型环框类零件上的应用

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航天制造技术 2008年第6期 10-14,21页

作者：刘晓霏首都航天机械公司

金属工件在成型过程中,均有可能形成残余应力。在许多情况下,残余应力的存在会对工件的机械性能产生极为不利的影响。本文从振动时效的机理入手,得出消除残余应力的本质途径是给金属原子以足够的能量,使其振动加剧回到平衡位置,从而实... 详细信息

金属工件在成型过程中,均有可能形成残余应力。在许多情况下,残余应力的存在会对工件的机械性能产生极为不利的影响。本文从振动时效的机理入手,得出消除残余应力的本质途径是给金属原子以足够的能量,使其振动加剧回到平衡位置,从而实现晶格畸变的减少;另外振动时效可以使那些处于弹性应力状态的部分实现塑性屈服,从而减少金属的弹性应变量,进而达到减少残余应力的目的。文章还从新一代运载火箭实际工程应用中验证了振动时效的有效性。

关键词：振动时效位错机理残余应力

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齐云之美

小学生导读 2010年第3期 26-27页

作者：刘晓霏黟县渔亭中心小学五年级

早听说齐云山景色优美，伴着秋色更是怡人。金秋时节，我们终于有机会去造访这人间仙境，领略这迷人风光了。

关键词：小学作文语文教学《齐云之美》

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高速公路清洁能源自洽充电引导调度策略研究

公路交通科技 2024年第5期41卷 125-133页

作者：麦峻锋刘晓霏王杰袁旻忞广州大学电子与通信工程学院广东广州510006 交通运输部公路科学研究院北京100088

针对高速公路服务区车辆充电缺乏有效引导调度策略和清洁能源自洽率的问题,利用图论理论,建立了包含电动汽车、高速公路及服务区的“车-路-服务区”典型出行场景,构建了最优充电引导调度模型。以用户综合成本和服务区电动汽车清洁能源... 详细信息

针对高速公路服务区车辆充电缺乏有效引导调度策略和清洁能源自洽率的问题,利用图论理论,建立了包含电动汽车、高速公路及服务区的“车-路-服务区”典型出行场景,构建了最优充电引导调度模型。以用户综合成本和服务区电动汽车清洁能源自洽率为约束,针对电动汽车充电引导中的多峰函数寻优问题,采用免疫优化算法,提出了一种高速公路服务区最优充电引导策略。根据建立的典型出行场景,通过模拟仿真进行电动汽车充电引导调度策略的研究,并验证服务区电动汽车清洁能源自洽率对充电引导策略有效性的影响。结果表明:引导调度策略使高速公路系统总体运行效率提高了32.8%,各服务区的平均充电负荷降低50.3%,对减小各个服务区充电负荷差距具有显著效果;考虑清洁能源自洽率并引入自洽率权重后,高速公路能源系统的清洁能源自洽率与电动汽车行驶总时间呈近似线性关系;当车流量维持在3辆/h时,服务区电动汽车清洁能源自洽率达到初峰77.6%,之后逐渐下滑;当车流量提升至5辆/h时,自洽率攀升至最大值78.3%;随着车辆的增加,总自洽率以指数形式下降;当车流量急剧上升至250辆/h时(相当于日均电动汽车使用量超过6000辆时)所有服务区的清洁能源将被耗尽。

关键词：交通工程充电引导免疫算法电动汽车自洽率