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作者：刘晓炫江苏大学

学位级别：硕士

新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)是一种高传染性和致死性的病毒,其刺突蛋白(Spike)在新型冠状病毒疫苗的开发中常作为关键抗原,能够引发人体产生高效的体液免疫及细胞免疫。单独以S蛋白上的... 详细信息

新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)是一种高传染性和致死性的病毒,其刺突蛋白(Spike)在新型冠状病毒疫苗的开发中常作为关键抗原,能够引发人体产生高效的体液免疫及细胞免疫。单独以S蛋白上的受体结合域(Receptor binding domain,RBD)作为免疫原也是目前常用的疫苗研发策略之一。腺相关病毒(Adeno-Associated Virus,AAV)作为一种复制缺陷型病毒,其低免疫原性、多种组织趋向性、非致病性以及对外源基因表达的稳定性等特点,为成为基因治疗的优良递送载体创造了条件。AAV在抗病毒疫苗领域的研究表明AAV诱导的免疫反应表现出比其他类型疫苗(包括重组蛋白、灭活病毒)更高效持久的效果。本课题中使用的AAV2.5Tcap是在定向进化条件下由AAV2(aa1-128)和AAV5(aa129-725)进行重组获得,其中第581位氨基酸由A突变成T。这种重组型衣壳包装的AAV对呼吸道上皮细胞表现出了更强的结合力,并且已经证实能够成功介导囊性纤维化跨膜传导,纠正人类囊性纤维化(CF)的氯离子运输缺陷。这一重组病毒载体具有成为呼吸道相关疾病基因治疗以及病毒疫苗载体的潜力。基于AAV在基因治疗和抗病毒疫苗领域广阔的应用前景,AAV产量需求激增,获得一种低成本且高产的AAV生产体系成为关键。目前存在的rAAV生产方式中,昆虫/杆状病毒表达系统是其中较为高效的生产方式之一。我们利用家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori Nuclear Polyhedrosis Virus,Bm NPV)表达系统,以家蚕生物反应器为平台生产一种嗜呼吸道的重组腺相关病毒rAAV2.5T-RBD,以探索利用rAAV生产针对新冠病毒的高特异性病毒载体疫苗的可行性。本实验中,我们首先构建并验证了重组质粒pAAV-R2.5C和pAAV-RBD,同商品化的p Helper质粒共同在哺乳动物细胞系AAV293中进行三质粒转染,并验证目的蛋白的表达。将蛋白表达盒克隆入杆状病毒表达系统的穿梭载体,构建pFastBacAAV2ITR/RBD、pFastBacAAV2.5TCap,进而筛选重组杆粒并转染家蚕Bm N细胞系获得r Bm NPV-AAV2ITR/RBD和r Bm NPV-AAV2.5TCap。通过检测重组杆状病毒共感染后标记蛋白EGFP、病毒载体蛋白Rep及Cap确定各蛋白均可以稳定表达至P4代,且在P3代达到峰值。以直接注射的方式将两种P3代的重组杆状病毒共感染5龄起蚕的家蚕幼虫,感染后72h可观察到重组病毒中的绿色荧光蛋白在幼虫体内高效表达,检测已发病幼虫的组织和器官发现血淋巴和脂肪体中蛋白表达量高。同时,利用P3代重组病毒注射感染家蚕蚕蛹,48h后即可检测到各蛋白的高效表达,证明目的蛋白在蚕蛹中的表达要早于家蚕幼虫。重组型AAV载体的纯化方法对载体的产量和质量有很大的影响。我们通过预实验对比氯化铯(CsCl)超速离心与碘克沙醇(iodixanol)密度梯度超速离心后,选择用后者进行rAAV2.5T-RBD的纯化,碘克沙醇密度梯度离心法不仅在用时上大大节省时间,分离效果也明显优于氯化铯法。经纯化后的病毒样品利用透射电子显微镜(TEM)可观察到20-25nm左右的病毒粒子,但Bm N细胞中所纯化得到的病毒粒子多为未成功包装的AAV2.5T衣壳,q PCR检测可知Bm N细胞中的完整病毒粒子量远低于家蚕和蚕蛹的纯化样品。而家蚕和蚕蛹纯化样品中虽能得到较为完整的病毒粒子,但在TEM结果中显示样品中含有较多直径为10nm左右的杂质未能成功去除,表明这一生产系统在未来仍需要对包装效率和纯化方法进行进一步优化。由于新冠疫情影响,无法获得敏感细胞系人呼吸道上皮细胞HAE-ALI。因此在转导效率的测定中我们尝试利用纯化的rAAV2.5T-RBD感染人支气管上皮细胞(16HBE),在感染后7天左右可以观察到少量的荧光表达,这一结果证实纯化的病毒粒子应具备一定转导活性,由于16HBE细胞不是rAAV2.5T-RBD的敏感细胞系,导致感染及转导效率较低。之后我们将在获得HAE-ALI细胞后尝试利用流式细胞荧光分选技术更为准确地检测其转导活性。在本课题中我们构建了一个利用家蚕杆状病毒表达系统生产rAAV2.5T-RBD载体的rAAV生产系统,并通过比较获得了更高效的rAAV纯化方法。新生产系统可以成功生产出重组病毒rAAV2.5T-RBD。这项工作表明家蚕生物反应器应用于重组AAV载体规模化生产中的巨大潜力,为病毒载体疫苗的商业化生产提供了参考。

关键词：新型冠状病毒病毒载体疫苗 rAAV2.5T-RBD 家蚕杆状病毒表达系统家蚕生物反应器

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基于生产“三循环”的东北地区空间不均衡发展现象分析

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地理学报 2024年第6期79卷 1464-1477页

作者：谢富胜江炫辰施佰发中国人民大学全国中国特色社会主义政治经济学研究中心北京100872 中国人民大学经济学院北京100872 福建师范大学全国中国特色社会主义政治经济学研究中心福州350117

2010年以来,中国东北地区经济增速呈现逐渐下滑的现象成为中国空间发展不均衡的重要问题。本文基于空间政治经济学和产业地理学理论,构建空间不均衡发展与东北地区(黑龙江、吉林、辽宁3省)经济增速下滑现象成因的理论和经验统一的分析... 详细信息

2010年以来,中国东北地区经济增速呈现逐渐下滑的现象成为中国空间发展不均衡的重要问题。本文基于空间政治经济学和产业地理学理论,构建空间不均衡发展与东北地区(黑龙江、吉林、辽宁3省)经济增速下滑现象成因的理论和经验统一的分析框架。研究发现:①空间不均衡发展是资本在空间中运动的结果,生产网络的空间变迁与东北地区经济增速下滑密切相关。②2002—2007年东北地区迅速参与到“国际循环”和“国内循环”的产业链垂直分工中,东北地区和国内其他地区协同均衡发展。③2007—2010年东北地区“国际循环”和“国内循环”参与度均受到外需严重冲击,“区内循环”由于政府刺激计划而有所提升,经济维持高速增长。④2010—2017年外需冲击的产业链关联效应和区域市场的贸易替代效应逐步显现,东北地区制造业“三循环”参与度竞争性下降,导致东北地区经济增速逐渐下滑出现。本文旨在为研究中国空间不均衡发展问题的成因和经验研究策略提供一个新思路,并为推动东北地区深度融入新发展格局,促进经济重振提供政策建议。

关键词：空间不均衡发展生产循环投入产出法东北地区

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燕巢危幕——蔡迈轮日记中的陕县岁月(1947—1948)

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中共党史研究 2024年第1期 98-111页

作者：黄道炫北京大学历史学系

1947年,中共反攻揭开序幕,蔡迈轮随大军加入豫西反攻,并率领一支小队伍回到家乡陕县,发动群众,开展游击战争。面对继续维持统治的国民党政权以及强大的地方武装,蔡迈轮的队伍在陕县三进两出,处境困难。加之急性土改造成的脱离群众问题,... 详细信息

1947年,中共反攻揭开序幕,蔡迈轮随大军加入豫西反攻,并率领一支小队伍回到家乡陕县,发动群众,开展游击战争。面对继续维持统治的国民党政权以及强大的地方武装,蔡迈轮的队伍在陕县三进两出,处境困难。加之急性土改造成的脱离群众问题,进一步加剧了游击斗争的艰险。在此逆境之下,蔡迈轮等人顽强坚持,适时转移,保存有生力量。这样的做法得到了上级机关的谅解。最终,随着整体形势的变化,迎来了陕县坚持的曙光。

关键词：蔡迈轮日记陕县豫西

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死——近人日记中的死亡经验

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清华大学学报（哲学社会科学版） 2024年第1期39卷 65-79,238页

作者：黄道炫北京大学历史学系北京100871

因了死亡予人类的深刻刺激,近人日记中留下大量关于死亡的记载。从这些记载中,可以看到死亡的永恒性,死亡的痛苦及其给人类带来的恐惧超越时间和历史存在。同时,这些记载也显示时代特征,近代的战乱和动荡让死亡变得更为密集,而主义、理... 详细信息

因了死亡予人类的深刻刺激,近人日记中留下大量关于死亡的记载。从这些记载中,可以看到死亡的永恒性,死亡的痛苦及其给人类带来的恐惧超越时间和历史存在。同时,这些记载也显示时代特征,近代的战乱和动荡让死亡变得更为密集,而主义、理念的输入及政治组织的予以强化,又形成关于死亡的意义讲述,并造就批量化生产的死士。当然,死亡本质上仍然是个体的,是不可替代的个体独特经验。

关键词：死亡日记流行病徐惊百追悼会

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关于第二类Zagreb指数猜想的一个证明

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中国科学：数学 2024年第1期54卷 105-120页

作者：龚世才罗高炫浙江科技学院理学院杭州310023

设G是一个n阶简单图.G的第二类Zagreb指数定义为M_(2)(G)=∑ij∈E(G)d_(i)d_(j).其中d_(i)表示顶点i的度.Xu等(2014)提出了一个关于第二类Zagreb指数的猜想:在所有阶数为n、边数为m的图中,M_(2)(G)最大的图是拟完全的.借助于门槛图的Fer... 详细信息

设G是一个n阶简单图.G的第二类Zagreb指数定义为M_(2)(G)=∑ij∈E(G)d_(i)d_(j).其中d_(i)表示顶点i的度.Xu等(2014)提出了一个关于第二类Zagreb指数的猜想:在所有阶数为n、边数为m的图中,M_(2)(G)最大的图是拟完全的.借助于门槛图的Ferrers表的性质,本文将上述猜想转化为组合矩阵论优化问题,并给出该猜想的一个代数证明.

关键词： Zagreb指数 Ferrers表门槛图度

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“锚定结”法小鼠颈部异位心脏移植模型构建及其稳定性测试

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陆军军医大学学报 2024年第8期46卷 822-828页

作者：李子炫方易冰程伟陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院心脏外科重庆400038

目的在传统Cuff法(“袖套”法)血管吻合技术基础上进行改良,优化小鼠颈部异位心脏移植操作步骤、过程,以建立更稳定的小鼠颈部异位心脏移植模型。方法将6~8周龄雄性C57BL/6小鼠(体质量20~24 g)分为实验组(通过“锚定结”法进行小鼠颈部... 详细信息

目的在传统Cuff法(“袖套”法)血管吻合技术基础上进行改良,优化小鼠颈部异位心脏移植操作步骤、过程,以建立更稳定的小鼠颈部异位心脏移植模型。方法将6~8周龄雄性C57BL/6小鼠(体质量20~24 g)分为实验组(通过“锚定结”法进行小鼠颈部异位心脏移植)和对照组(用传统Cuff法进行小鼠颈部异位心脏移植)。记录各项操作步骤时间、血管外翻次数、血管修剪次数、实验失败原因等。术后每天观察、触摸判断小鼠颈部供心存活情况,存活>48 h为移植成功。术后第7、14天HE染色观察实验组小鼠吻合血管处组织;第7天心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)染色观察2组小鼠供心。结果①实验组共进行25只移植,失败2只,供心存活率92%;对照组共进行25只移植,失败8只,供心存活率68%。实验组动脉平均外翻1.16次,修剪0.04次;静脉平均外翻1.16次,修剪0.04次。对照组动脉平均外翻2.00次,修剪0.21次;静脉平均外翻2.28次,修剪0.46次。②实验组、对照组的颈部心脏移植总时间[(77.22±3.82)vs(87.49±8.01)min]、分离血管+套管时间[(30.06±2.68)vs(36.50±6.67)min]、颈部血管吻合时间[(7.31±1.08)vs(12.34±2.58)min]差异有统计学意义(P<0.05)。③术后第7、14天实验组吻合血管处组织HE染色显示血管通畅。④术后第7天供心cTnT染色情况提示对照组、实验组均无大面积坏死。结论“锚定结”法进行小鼠颈部异位心脏移植保证了单人显微操作的稳定、高效,术后供心存活时间长、吻合血管通畅率高、心功能状态好、术后并发症少。

关键词：心脏移植袖套法小鼠模型

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融合预训练和双级元蒸馏的医学短文本分类方法

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计算机工程与应用 2024年

作者：廖列法姜炫至江西理工大学信息工程学院江西现代职业技术学院

为解决医学文本使用预训练模型处理速度慢、对硬件的算力要求高、难以分辨少样本类别，使用传统小模型由于自身限制难以做到足够的准确度的问题，提出了一种融合预训练和元蒸馏的文本分类模型PTMD(Fusion of Pre Training and Meta Dist... 详细信息

为解决医学文本使用预训练模型处理速度慢、对硬件的算力要求高、难以分辨少样本类别，使用传统小模型由于自身限制难以做到足够的准确度的问题，提出了一种融合预训练和元蒸馏的文本分类模型PTMD(Fusion of Pre Training and Meta Distillation models)。PTMD针对医学文本的多标签问题，通过对比训练对RoBERTa预训练方法进行微调，再由双向内置注意力简单循环单元充分获取语义信息。最后在传统蒸馏模型的基础上融合元学习和助教的思想，通过教学实验和双级模型等方法，提高模型的教学水平，最终在减少训练成本的基础上得到一个高性能医学文本分类模型。实验结果表明，教师模型在CHIP2019评测三数据集上的F1值达到了85.47%，同时学生模型在损失1.45%f1值的情况下，将模型规模缩小到教师模型的近1/6，效果高于大多数传统预训练模型和知识蒸馏模型，证明了该模型具有良好的实用价值。

关键词：文本分类预训练模型知识蒸馏

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丰收的嘉奖：财政激励与粮食增产

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中国农村经济 2024年第08期 27-46页

作者：罗斯炫张俊飚湖南农业大学经济学院华中农业大学农业绿色低碳发展实验室浙江农林大学浙江省乡村振兴研究院浙江农林大学经济管理学院

常规产粮大县奖励政策是中央政府为了调动地方政府粮食生产积极性、缓解产粮大县财政困难的重要举措，但其粮食增产效果及作用机制尚未明晰。本文基于群聚分析法，利用奖励入围条件所形成的制度断层点，估计了该政策实施对粮食生产的影... 详细信息

常规产粮大县奖励政策是中央政府为了调动地方政府粮食生产积极性、缓解产粮大县财政困难的重要举措，但其粮食增产效果及作用机制尚未明晰。本文基于群聚分析法，利用奖励入围条件所形成的制度断层点，估计了该政策实施对粮食生产的影响。结果表明：2005-2020年，该政策实施产生了明显的群聚现象，即县域粮食产量频数分布在奖励入围断点20万吨处呈现左侧缺失与右侧群聚。该政策实施促使操纵区间内县域粮食单产平均提高5.0%，且提高了复种指数与农业机械化水平。财政收支缺口大、产业结构高级化程度低的县和贫困县受财政激励更强，表现出更高的粮食增产成效。进一步，该政策还提高了县级层面的农业全要素生产率和农业劳动生产率。经计算，该政策实施的预计收益下限值远大于其预计成本上限值，具有较高的经济效益。本文研究有助于认识县级政府对粮食生产财政转移支付的反应程度、财政激励的作用区间以及财政转移支付对粮食安全的贡献，为中央政府进一步优化和创新粮食生产财政转移支付制度，充分发挥财政助力粮食安全重要职能提供来自微观层面的经验证据。

关键词：常规产粮大县奖励政策财政激励财政转移支付粮食安全群聚分析

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社会资本参与老旧小区改造项目的创新融资路径——以北京劲松北社区改造为例

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现代城市研究 2024年第6期39卷 46-51页

作者：董炫旻清华大学建筑学院

近年来依赖于“财政包干”的老旧小区改造项目愈发凸显其限度和不可持续,亟待推进城市存量空间更新的社会资本参与模式,并探索社会资本在该模式下创新性的融资路径。文章基于城市更新多主体参与的理论逻辑,对现行老旧小区改造存在的资... 详细信息

近年来依赖于“财政包干”的老旧小区改造项目愈发凸显其限度和不可持续,亟待推进城市存量空间更新的社会资本参与模式,并探索社会资本在该模式下创新性的融资路径。文章基于城市更新多主体参与的理论逻辑,对现行老旧小区改造存在的资金模式困境进行了剖析。以劲松北社区改造项目为例,探讨了目前政策保障和融资创新下的转型难点和潜力,提出了构建“保障+助推+激活”的社会资本多元融资模式转型框架。最后阐释了当前社会资本参与老旧小区改造融资模式转型的突破点,对我国城市更新社会资本多方参与体系的建立和城市高质量发展具有重要意义。

关键词：老旧小区改造社会资本多主体参与融资模式

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基于深度学习的钢轨表面缺陷检测算法研究

基于深度学习的钢轨表面缺陷检测算法研究

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作者：许炫皓重庆交通大学

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